1、2019/6/16,1,肺气肿的预防,2019/6/16,2,前 言,吸烟危害健康，被动吸烟对机体损害更为严重 吸烟是引起慢性阻塞性肺疾病的重要因素之一， 为临床上慢性阻塞性肺气肿的防治提供新的思路 本文采用烟气染毒的方法建立阻塞性肺气肿大鼠模型，并观察维A酸、-胡萝卜素、牛磺酸对肺气肿形成的影响以及对其机制进行探讨,2019/6/16,3,材料与方法,大鼠实验性阻塞性肺气肿模型的复制与分组 选用Wistar雄性大鼠，体重230-300g，（购于首都医科大学动物中心，动物编号100148，合格证号医动字01-3048）。实验分5组，正常对照组15只；单纯吸烟组15只，用于制备阻塞性肺气肿模型；
2、维A酸组12只；-胡萝卜素组12只；牛磺酸组12只。 香烟：金键牌香烟，焦油含量18mg/支，烟碱量1.2mg/支。给药方法 维A酸组：每天吸烟染毒前通过胃管给大鼠灌胃维A酸15mg/kg，共75天； -胡萝卜素组：每天吸烟染毒前给大鼠灌胃-胡萝卜素15mg/kg，共75天； 牛磺酸组：每天吸烟染毒前给大鼠灌胃牛磺酸600mg/kg，共75天。,2019/6/16,4,材料与方法,阻塞性肺气肿模型制备方法 将大鼠放入80cm60cm58cm的有机玻璃制成的染毒箱内，在其右上角开通一个直径1cm的通气孔。大鼠每天吸烟2次，每次16支，时间30min，2次间隔4h，连续75天。 被动吸烟染毒方法：
3、将点燃的香烟通过三通将烟雾吸入100ml的注射器中，关闭吸烟通路一端，再打开三通的另一端将烟雾注入染毒箱内进行大鼠被动吸烟染毒。 大鼠肺功能测定（维A酸实验各组） 吸烟染毒结束后第2天，应用动物呼吸功能测定仪（北京悦宏达有限公司产品）测定大鼠的0.3秒用力呼气量（FEV0.3）、第0.3秒用力呼气量与用力肺活量比值（FEV0.3/FVC）、功能残气量（FRC）以及动态顺应性（Cld）。,2019/6/16,5,材料与方法,形态定量分析（维A酸实验各组）各组的每张病理切片随机选取上、中、下、左、右5个视野，用HIPS-1000多功能彩色病理图文分析系统对进行每视野的平均肺泡数、平均肺泡面积和平均
4、肺泡直径的测定；对weigert弹力纤维染色标本进行弹性纤维相对含量测定；对免疫组化标本进行MMP-2和MMP-9蛋白相对含量测定。 大鼠平均肺动脉压测定（-胡萝卜素与牛磺酸组） 按孙波等方法经右颈外静脉插入微导管，连接CY-682D型生理多导仪），测定mPAP。 大鼠血清、肺组织各项指标检测 MMP-2、MMP-9、IL-6和IL-8采用ELISA方法检测； 鸟苷酸含量采用放射免疫方法检测； NO、NOS、GSTs采用分光光度法进行检测； SOD活性采用邻苯三酚法，LPO采用硫代巴比妥酸法检测。,2019/6/16,6,材料与方法,病理光镜标本制备及免疫组织化学染色维A酸实验各组于吸烟染毒结
5、束后次日取每只大鼠的右下叶肺组织，常规HE染色和weigert弹力纤维染色，部分行增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组织化学染色，阳性反应为胞核呈棕褐色；取每只大鼠右中叶肺组织，制成冰冻切片，同上进行MMP-2和MMP-9的免疫组织化学染色，阳性反应为胞浆呈棕褐色。-胡萝卜素与牛磺酸实验各组于吸烟染毒结束后次日，各组随机取大鼠5只相同部位肺组织（右肺中下叶），用10%甲醛固定，HE染色，观察各组肺组织病理变化情况。,2019/6/16,7,统计学处理,采用SPSS8.0版统计软件进行F检验和直线相关与回归分析。实验数据以xs表示，组间比较用t检验，多组间比较用方差分析（F检验和q检验）。,2019
6、/6/16,8,结 果,正常对照组 HE100正,2019/6/16,9,结 果,模型组 HE100,2019/6/16,10,结 果,模型组 HE100,2019/6/16,11,结 果,维A酸组 HE100,2019/6/16,12,结 果,正常对照组 HE100,2019/6/16,13,结 果,单纯吸烟组 HE100 （慢性支气管炎）,2019/6/16,14,结 果,单纯吸烟组 HE100 （肺气肿）,2019/6/16,15,结 果,-胡萝卜素组 HE100,2019/6/16,16,结 果,牛磺酸组 HE 100,2019/6/16,17,结 果,维A酸实验各组 病理改变光镜观察
7、：模型组大鼠支气管粘膜上皮大片脱落，管壁及周围大量的单核细胞和淋巴细胞浸润；周围肺组织普遍存在肺泡型肺气肿，表现为肺泡结构紊乱、肺泡壁变薄或断裂、肺泡腔扩大，部分融合成肺大庖。用药组大鼠的支气管粘膜上皮脱落较模型组明显减轻，炎性细胞浸润以及肺泡壁断裂和肺泡腔扩大情况亦较单纯吸烟组减轻。形态学定量分析见表1。 呼吸功能测定与对照组比较，模型组FEV0.3和FEV0.3/FVC明显下降，而FRC与Cld则显著增加（P0.05，表2）。,2019/6/16,18,结 果,BALF中MMP-2和MMP-9的活性测定模型组与对照组比较，用药组与模型组比较，差异均有显著性（P0.05，表3）。 支气管、肺
8、组织中MMP-2、MMP-9以及PCNA的免疫组化结果模型组与对照组大鼠比较，支气管、肺组织中MMP-2和MMP-9的相对含量显著增加。模型组与用药组比较含量明显减少（P0.01）。对照组极少有PCNA表达，模型组PCNA的表达增加，PCNA指数（每1000个细胞中的阳性细胞数）上升（P0.01），用药组PCNA指数升高，与模型组比较差异有显著性（P0.01，表4）。 模型组BALF中MMP-2和MMP-9活性与肺组织中弹性纤维相对含量的相关性分析多元逐步回归显示，MMP-2和MMP-9活性与肺组织中弹性纤维相对含量均呈明显负相关，回归方程为（y=-6.954X1, -6.024X2，P均0.
9、05）。,2019/6/16,19,结 果,-胡萝卜素实验各组，见表5-9,2019/6/16,20,讨 论,被动吸烟所致大鼠阻塞性肺气肿的模型是成功的 基质金属蛋白酶（MMPs）与肺气肿的发生关系密切 RA是一种具有多效性 调节作用的化合物，预防性应用可减缓肺气肿的发生RA抑制肺组织MMP-2和MMP-9的活性及表达RA促进肺组织损伤后的修复,2019/6/16,21,讨 论,鸟苷素是一种肽类物质，是体内的内源性鸟苷酸环化酶激活物，调节局部水、电解质的分泌 鸟苷素局限分布于远段传导气道内层无纤毛的分泌细胞 ，作用气道上皮，促进气道分泌鸟苷素可显著抑制白蛋白诱导的支气管收缩及微血管渗漏,201
10、9/6/16,22,讨 论,一氧化氮(NO)是近年来发现的具有多种生理功能的化学分子，它可以松弛血管平滑肌、抑制血小板聚集 吸烟导致的NO合成及释放减少是形成COPD的重要因素之一 氧自由基是吸烟引起肺损伤的病理基础之一 IL-6、 IL-8是吸烟所致肺损伤过程中的两种重要的炎症介质，可以导致机体一系列免疫、病理损害,2019/6/16,23,讨 论,-胡萝卜素是一种良好的抗氧化剂，对COPD的早期防治有一定作用 吸烟大鼠给予口服一定量的-胡萝卜素后，NO的含量提高 -胡萝卜素可以对抗吸烟引起的氧自由基对肺组织的损伤作用 -胡萝卜素有一定的抗炎作用 ，可通过减少IL-6和 IL-8的含量,20
11、19/6/16,24,讨 论,牛磺酸是一种良好的细胞保护剂，可以对抗由吸烟引起的肺损伤作用，提高NO的含量和NOS活性，对临床COPD的防治亦提供了新的思路,2019/6/16,25,表 1 各组大鼠肺泡数、肺泡面积、直径及 肺组织中弹性纤维含量的比较,2019/6/16,26,表 2 各组大鼠肺功能情况比较,2019/6/16,27,表 3 各组大鼠BALF中MMP-2和MMP-9活性比较（xs）,2019/6/16,28,表 4 MMP-2和MMP-9蛋白相对含量及PCNA指数情况（xs）,2019/6/16,29,表5 各组大鼠血清IL-6、IL-8、NO、SOD、LPO变化情况（Xs）
12、,2019/6/16,30,表6 各组大鼠支气管肺泡灌洗液中IL-6、IL-8、NO 变化情况（Xs）,2019/6/16,31,表7 各组大鼠肺组织中IL-6、IL-8、NO、SOD、 LPO变化情况（xs）,2019/6/16,32,表8 血浆与肺组织中鸟苷素含量的变化（xs）,2019/6/16,33,表9 被动吸烟大鼠肺组织中、NOS、GSTs变化情况 （xs）,2019/6/16,34,表10 各组大鼠mPAP的变化情况,2019/6/16,35,表11 各组大鼠血浆NO及肺组织NOS变化情况,2019/6/16,36,结 论,2019/6/16,37,Thank you,2019/6/16,38,三，问题的提出：,“CNET2000”是否是CNET未来发展合适的战略？,2019/6/16,39,表2：竞争者与CNET商业模式的对比,2019/6/16,40,表3: 1999年8月的各网站访问量,2019/6/16,41,表1：JUPITER:美国网上计算机产品花费预测,(单位:10亿美圆),2019/6/16,42,CNET Networks 核心业务品牌,
