1、1、采样时间：消毒后、操作前进行采样。 2、采样方法： （1 ）布点： 室内面积30 m2，设内、中、外对角线 3 点，内外点距墙 1m；室内面积 30 m2，设四角及中央 5 点，四角点距墙 1m。 （2 ）平板暴露法 平板直径 9cm、采样高度 1.5m，暴露 5min。 3、检验方法 平板 37培养 48h。计数菌落数并分离致病菌。 4、平板暴露法结果计算 50000N 细菌总数（cfu/m3）=AT A 为平板面积（cm2） ； T 为暴露时间（min） ；N 为平均菌落数（ cfu） 5、结果判定 （1 ） I、 II 类区域，细菌总数10cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。
2、（2 ） III 类区域，细菌总数200cfu/cm3，并未检出致病菌为消毒合格。 （3 ） IV 类区域，细菌总数500cfu/cm2 ，并未检出致病菌为消毒合格。 6、注意事项：采样前关好门窗，在无人走动的情况下，静止 10min 进行采样层流手术室空气日常监测方法： 要求日常实行动态监测，必测项目为平板采样法（沉降法）或采样器法( 浮游菌法)检测细菌菌落总数。 （1）回风口动态平板采样法：应在手术开始、手术 2 小时、手术结束前抽检 3-4 次。每个回风口中部摆放 3 个倾斜 30，90 培养皿，暴露 30 分钟后，37C 培养 24 小时。 标准：每皿菌落计数平均值应符合表 4 标准要
3、求。单皿最大值不应超过平均值 3 倍。 （2）动态采样器法：浮游菌菌落检测应在手术进行如切皮、缝合、连台手术之间、手术进行 4 小时等，选择不少于 3 个程序，测定细菌菌落总数。 标准：I 级30cfu/m3 ；II 级150 cfu/m3；III 级450 cfu/m3；IV 级500 cfu/m3。 （3）其他洁净用房在当天上午 10 时和下午 4 时各测 1 次，在每个回风口中部摆放 3 个90 培养皿，沉降 0.5h 后在 37下培养 24h。 标准：同回风口动态平板采样法标准。 层流手术室静态（空态）时空气采样方法： 1、采样方法： （1）当送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检
4、测；当送风口分散布置时，按全室统一布点方法检测。 （2）沉降法采样时，用直径 9cm 的培养皿，在空气中暴露 30min，37培养 24h，培养皿中的菌落数（cfu）代表空气中沉降下来的细菌数，以个/皿表示。 （3）浮游法采样时，用裂隙采样器在空气中随机采样 30min，对采样皿或采样条培养得出的菌落数（cfu） ，代表空气中浮游下来的细菌数，以个/m3 表示。 2、采样高度： （1）采样点可布置在地面上或不高于地面 0.8m 的任意高度上； （2）在手术区检测时应无手术台；当手术台已固定时，检测高度应在台面之上0.25cm。 3、布点方法：（见表 1） 4、采样注意事项： （1）在 100
5、级区域检测时，采样口应对着气流方向；在其他区域检测时，采样口均向上； （2）采样后的培养基条或培养皿，应 37条件下培养 24h，并计算菌落数，菌落数的平均值均四舍五入选位到小数点后 1 位； （3）当采用浮游法测定浮游菌浓度时，细菌浓度测点数应和被测区域的含尘浓度测点数相同，且宜在同一位置上。每次采样应满足表 8 的最小采样量的要求，每次采样时间不应小于 30 分钟。 （4）当用沉降法测定沉降菌浓度时，细菌浓度测点数即要不少于含尘浓度测点数，应满足表 9 规定的最少培养皿数的要求（不含对照皿） 。如沉降时间适当延长，则最少要求培养皿数可按比例减少，但不能少于含尘浓度的最少测点数。 （5）不论
6、用何种方法检测细菌浓度，都必须有两次空白对照。第一次用于检测培养皿或培养基条（每批一个对照皿（条） ） ；第 2 次对操作过程做对照试验（每室或每区将 1 个对照皿（条） ，打开后又立即封盖，进行模拟操作） ；两次对照结果必须为阴性，整个操作过程应符合无菌操作的要求。 （6）新房验收时，应最后做空气、物表细菌检测。 表 1 洁净手术室空气采关布点位置与方法 区域 最少测点数 手术区图示级 洁净手术室 5 点（双对角线布点）手术区和洁 净辅助用房 8 点（每边内 2 点） 局部 100 级区 级 周边区 级 洁净手术 3 点（单对角线布点） 集中送风面正投影区室手术区 6 点（长边内 2 点，短边内 1 点） 集中送风面正投影区 级 周边区 4 点（每边内 1 点）级 周边区 级洁净手术室及分散 4 点（避开送风口正下方） 布置送风口的洁净室面 2 点（避开送风口正下方） 积30 面积30 注：分布在集中送风面正投影区角的采样点距离邻近两边的距离位 0.12 米
