1、第四章 微生物的营养,营养物质：能够满足微生物机体生长、繁殖和完成 各种生理活动所需的物质。,营养：微生物获得和利用营养物质的过程,营养物质是微生物生存的物质基础，而营养是生物维持和延续其生命形式的一种生理过程。,本章内容：,第一节、微生物的营养要求,（微生物需要吃什么？）,第三节、营养物质进入细胞,（微生物是怎样吃东西的）,第二节、培养基,（如何给微生物做饭）,第一节 微生物的营养要求,一、微生物细胞的化学组成,微生物细胞,水：70-90%,干物质,有机物 蛋白质、糖、脂、核酸、维生素等 及其降解产物,无机物（盐）,微生物、动物、植物之间存在“营养上的统一性”,细胞化学元素组成：,主要元素：
2、C、H、O、N、P、S、K、Mg、Ca、Fe等； 微量元素：Zn、Mn、Na、Cl、Mo、Se、Co、Cu、W、Ni、B等。,第一节 微生物的营养要求,二、营养物质及其生理功能,微生物与动植物营养要素的比较,第一节 微生物的营养要求,二、营养物质及其生理功能,主要功能：提供合成原生质和代谢产物原料；产生合成反应及生命活动所需能量；调节新陈代谢。 1、碳源 凡能提供微生物营养所需碳元素的营养源。功能：碳源、能源。微生物碳源谱： 2、氮源 凡能提供微生物营养所需氮元素的营养源。功能：氮源，一般不作能源。 微生物氮源谱：氨基酸自养型和异养型生物。速效氮源和迟效氮源。生理碱性、酸性、中性盐,3、无机盐
3、 所需浓度在10-3-10-4M的元素为大量元素。所需浓度在10-6-10-8M为微量元素。 主要功能：构成菌体成分；酶活性基组成或维持酶活性；调节渗透压、pH、Eh；化能自养微生物能源等。无机元素来源与功能：一些无机元素加入盐： 4、生长因子 一类对微生物正常代谢必不可少且又不能从简单的碳、氮源自行合成的所需极微量的有机物。 种类：维生素、AA、base、FA等。作用：辅酶或酶活化。来源：酵母膏、玉米浆、麦芽汁等，复合维生素。浓度： 5、水 存在状态：游离态（溶媒）和结合态（结构组成）；生理作用：组成成分；反应介质；物质运输媒体；热的良导体。,第一节 微生物的营养要求,三、微生物的营养类型,
4、异养型生物,自养型生物,生长所需要的营养物质,生物生长过程中能量的来源,光能营养型,化能营养型,光能自养型：以光为能源，不依赖任何有机物即可正常生长 光能异养型：以光为能源，但生长需要一定的有机营养 化能自养型：以无机物的氧化获得能量，生长不依赖有机营养物 化能异养型：以有机物的氧化获得能量，生长依赖于有机营养物质,第一节 微生物的营养要求,三、微生物的营养类型,微生物营养类型(),第一节 微生物的营养要求,三、微生物的营养类型,微生物的营养类型(),第一节 微生物的营养要求,三、微生物的营养类型,光能无机自养型（光能自养型）,能以CO2为主要唯一或主要碳源；,进行光合作用获取生长所需要的能量
5、；,以无机物如H2、H2S、S等作为供氢体或电子供体， 使CO2还原为细胞物质；,例如，藻类及蓝细菌等和植物一样，以水为电子供体（供氢体），进行产氧型的光合作用，合成细胞物质。而红硫细菌，以H2S为电子供体，产生细胞物质，并伴随硫元素的产生。,CO2+ 2H2S,光能,光合色素,CH2O+2S+H2O,第一节 微生物的营养要求,三、微生物的营养类型,光能有机异养型（光能异养型）,不能以CO2为主要或唯一的碳源；,以有机物作为供氢体，利用光能将CO2还原为细胞物质；,在生长时大多数需要外源的生长因子；,例如，红螺菌属中的一些细菌能利用异丙醇作为供氢体，将CO2 还原成细胞物质，同时积累丙酮。,C
6、HOH+CO2,H3C,H3C,2,光能,光合色素,2CH3COCH3 +CH2O + H2O,第一节 微生物的营养要求,三、微生物的营养类型,光能无机自养型和光能有机异养型微生物可利用光能生长， 在地球早期生态环境的演化过程中起重要作用。,第一节 微生物的营养要求,三、微生物的营养类型,化能无机自养型（化能自养型）,生长所需要的能量来自无机物氧化过程中放出的化学能；,以CO2或碳酸盐作为唯一或主要碳源进行生长时，利用H2、H2S、Fe2+、NH3或NO2-等作为电子供体使CO2还原成细胞物质。,化能无机自养型只存在于微生物中，可在完全无机及无光的 环境中生长。它们广泛分布于土壤及水环境中,参
7、与地球物质循环；,第一节 微生物的营养要求,三、微生物的营养类型,化能有机异养型（化能异养型）,生长所需要的能量均来自有机物氧化过程中放出的化学能；,生长所需要的碳源主要是一些有机化合物，如淀粉、糖类、纤维素、有机酸等。,有机物通常既是碳源也是能源；,大多数细菌、真菌、原生动物都是化能有机异养型微生物；,所有致病微生物均为化能有机异养型微生物；,第一节 微生物的营养要求,三、微生物的营养类型,化能有机异养型（化能异养型）,腐生型(metatrophy)：,可利用无生命的有机物(如动植物尸体和残体)作为碳源；,寄生型(paratrophy)：,寄生在活的寄主机体内吸取营养物质,离开寄主就不能生存
8、；,在腐生型和寄生型之间还存在中间类型：兼性腐生型(facultive metatrophy)；兼性寄生型(facultive paratrophy)；,三、微生物的营养类型,不同营养类型之间的界限并非绝对：,异养型微生物并非绝对不能利用CO2；,自养型微生物也并非不能利用有机物进行生长；,有些微生物在不同生长条件下生长时,其营养类型也会发生改变；,例如紫色非硫细菌(purple nonsulphur bacteria)： 没有有机物时，同化CO2， 为自养型微生物； 有机物存在时，利用有机物进行生长，为异养型微生物； 光照和厌氧条件下，利用光能生长，为光能营养型微生物； 黑暗与好氧条件下，依
9、靠有机物氧化产生的化学能生长，为化能营养型微生物；,微生物营养类型的可变性无疑有利于提高其对环境条件变化的适应能力,三、微生物的营养类型,第一节 微生物的营养要求,营养缺陷型,某些菌株发生突变(自然突变或人工诱变)后，失去合成某种(或某些)对该菌株生长必不可少的物质(通常是生长因子如氨基酸、维生素)的能力，必须从外界环境获得该物质才能生长繁殖，这种突变型菌株称为营养缺陷型(auxotroph)，相应的野生型菌株称为原养型 (prototroph)。营养缺陷型菌株经常用来进行微生物遗传学方面的研究。,微生物生长需要的生长因子与营养缺陷型之间的关系？,第二节 培养基,培养基几乎是一切对微生物进行研
10、究和利用工作的基础,培养基（medium）是人工配制的，适合微生物生长繁殖或 产生代谢产物的营养基质。,任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素：,碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水,任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌处理；,常规高压蒸汽灭菌：1.05kg/cm2,121.315-30分钟；某些成分进行分别灭菌； 过滤除菌；,第二节 培养基,一、配制培养基的原则,在微生物学研究和生长实践中，配置合适的培养基是一项最基本的要求。,1、选择适宜的营养物质 2、营养物质浓度及配比 3、控制pH条件 4、控制氧化还原电位 5、原料来源的选择 6、灭菌处理,一、配制培养基的原则,1、选择适
11、宜的营养物质,培养不同的微生物必须采用不同的培养条件；培养目的不同，原料的选择和配比不同；,实验室的常用培养基：细菌： 牛肉膏蛋白胨培养基（或简称普通肉汤培养基）； 放线菌：高氏1号合成培养基培养； 酵母菌：麦芽汁培养基； 霉菌： 查氏合成培养基；,实验室一般培养：普通常用培养基； 遗传研究：成分清楚的合成培养基； 生理、代谢研究：选用相应的培养基配方；,例如枯草芽孢杆菌：一般培养：肉汤培养基或LB培养基； 自然转化：基础培养基； 观察芽孢：生孢子培养基； 产蛋白酶：以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶培养基；,一、配制培养基的原则,2、营养物质浓度及配比,营养物质的浓度适宜；营养物质之间的配比适宜；
12、,高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能 维持和促进微生物的生长，反而起到抑制或杀菌作用。,培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长 繁殖和(或)代谢产物的形成和积累，其中碳氮比(C/N)的影响较大。,发酵生产谷氨酸时： 碳氮比（C/N）为4/1时，菌体大量繁殖，谷氨酸积累少； 碳氮比（C/N）为3/1时，菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量大量增加,一、配制培养基的原则,3、控制pH条件,培养基的pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型 微生物的生长繁殖或产生代谢产物。,通常培养条件：细菌与放线菌：pH77.5 酵母菌和霉菌：pH4.56范围内生长,为了维持培养基pH的相对恒定
13、，通常在培养基中加入pH缓冲剂，或在进行工业发酵时补加酸、碱。,一、配制培养基的原则,4、控制氧化还原电位,氧化还原电位又称氧化还原电势（redox potential），是度量 某氧化还原系统中的还原剂释放电子或氧化剂接受电子趋势 的一种指标，其单位是V（伏）或mV（毫伏）。,就像微生物与pH的关系一样，不同类型微生物生长对 氧化还原电位()的要求不同,好氧性微生物：+0.1伏以上时可正常生长,以+0.3+0.4伏为宜； 厌氧性微生物：低于+0.1伏条件下生长； 兼性厌氧微生物：+0.1伏以上时进行好氧呼吸,+0.1伏以下时进行发酵。,一、配制培养基的原则,4、控制氧化还原电位,氧化还原电位
14、与氧分压和pH有关,也受某些微生物代谢产物的影响,增加通气量(如振荡培养、搅拌)提高培养基的氧分压，或加入 氧化剂，从而增加值； 在培养基中加入抗坏血酸（0.1%）、硫化氢(0.025%)、半胱氨酸(0.05%)、谷胱甘肽、二硫苏糖醇、庖肉等还原性物质可降低值。,培养基中加入氧化还原指示剂刃天青可对氧化还原电位进行间接测定,一、配制培养基的原则,4、控制氧化还原电位,氧化还原电位与氧分压和pH有关,也受某些微生物代谢产物的影响,一、配制培养基的原则,5、原料来源的选择,配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成份, 特别是在发酵工业中,以降低生产成本。,以粗代精,以“野”代“家”,
15、以废代好,以简代繁,以烃代粮,以纤代糖,以无机氮代蛋白,对微生物来说，各种粗原料营养更加完全，效果更好。 而且在经济上也节约。,以野生植物原料代替栽培植物原料，如木薯、橡子、薯芋等 都是富含淀粉质的野生植物，可以部分取代粮食用于工业发 酵的碳源。,以工农业生产中易污染环境的废弃物作为培养微生物的原料。 例如，糖蜜(制糖工业中含有蔗糖的废液)、乳清(乳制品工业中含有乳糖的废液)、豆制品工业废液及黑废液(造纸工业中含有戊糖和己糖的亚硫酸纸浆)等都可作为培养基的原料。 工业上的甲烷发酵主要利用废水、废渣作原料, 在我国农村，已推广利用粪便及禾草为原料发酵生产甲烷作为燃料。 另外,大量的农副产品或制品
16、，如麸皮、米糠、玉米浆、酵母浸膏、酒糟、豆饼、花生饼、蛋白胨等都是常用的发酵工业原料。,某制药厂改进链霉素发酵液中的原有配方，设法减去30-50%的 黄豆饼粉、25%的葡萄糖和20%硫酸铵，结果反而提高了产量。,以石油或天然气副产品代替糖质原料来培养微生物。 生产石油蛋白 将石油产品转化成一些产值更高的高级醇、脂肪酸、环烷酸等 化工产品和若干合成物； 对石油产品的品质进行改良，如脱硫、脱蜡等。,开发利用纤维素这种世界上含量最丰富的可再生资源。将大量的 纤维素农副产品转变为优质饲料、工业发酵原料、燃料及人类的 食品及饮料。,以大气氮、铵盐、硝酸盐或尿素等一类非蛋白质或非氨基酸廉价 原料用作发酵培
17、养基的原料，让微生物转化成菌体蛋白质或含氮 的发酵产物供人们利用。,6、灭菌处理,配好的培养基要进行严格的灭菌。 一般采用高压蒸汽灭菌，0.1MPa，121 15 30min可达到灭菌效果。 灭菌后培养基pH会发生改变，可通过加入NaOH或HCl加以调整。,第二节 培养基,二、培养基的类型及应用,1按成份不同划分,（1）天然培养基(complex medium),以化学成分还不清楚或化学成分不恒定的天然有机物组成,（2）合成培养基(synthetic medium),是由化学成份完全了解的物质配制而成的培养基，也称 化学限定培养基(chemically defined medium),第二节
18、培养基,二、培养基的类型及应用,2、根据物理状态划分,（1）固体培养基：含凝固剂。琼脂、明胶、硅胶 （2）半固体培养基：凝固剂含量少，0.20.7%。 （3）液体培养基：未加凝固剂。振荡、搅拌。,第二节 培养基,二、培养基的类型及应用,3、按用途划分,（1）基础培养基(minimum medium),在一定条件下含有某种微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基，也称为基本培养基。,二、培养基的类型及应用,3、按用途划分,（2）加富培养基和富集培养基(enrichment medium),在普通培养基（如肉汤蛋白胨培养基）中加入某些特殊营养物质 制成的一类营养丰富的培养基。这些特殊营养物质包括血
19、液、血清、酵母浸膏、动植物组织液等。用来培养营养要求比较苛刻的异养型微生物，如培养百日咳博德氏菌(Bordetella pertussis)需要含有血液的加富培养基。,根据待分离微生物的特点设计的培养基，用于从环境中富集和 分离某种微生物。（目的微生物在这种培养基中较其他微生物生长速度快，并逐渐 富集而占优势，从而容易达到分离该种微生物的目的。）,二、培养基的类型及应用,3、按用途划分,（3）鉴别培养基(differential medium),（4）选择培养基(selective medium),用于鉴别不同类型微生物的培养基 特定的化学反应，产生明显的特征性变化， 根据这种特征性变化,可将
20、该种微生物与其他微生物区分开来。,用于将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不 同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要 的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。,（3）鉴别培养基(differential medium),伊红和美蓝二种苯胺染料可抑制G+细菌和一些难培养的G细菌。 在低酸度时，这二种染料结合形成沉淀，起着产酸指示剂的作用。 试样中的多种肠道菌会在EMB培养基上产生相互易区分的特征菌落，因而易于辨。例如大肠杆菌强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体呈酸性，菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光
21、中还可看到绿色金属闪光。,（4）选择培养基(selective medium),（4）选择培养基(selective medium),第三节 营养物质进入细胞,一、扩散(diffusion)二、促进扩散(facilitated diffusion)三、主动运输(active transport)四、膜泡运输(membrane vesicle transport),第三节 营养物质进入细胞,一、扩散(diffusion)：高浓度低浓度。动力是浓度差。,第三节 营养物质进入细胞,一、扩散(diffusion),物质跨膜扩散的能力和速率与该物质的性质有关,分子量小、脂溶性、极性小的物质易通过扩散进出
22、细胞。,扩散并不是微生物细胞吸收营养物质的主要方式,水是唯一可以通过扩散自由通过原生质膜的分子,脂肪酸、乙醇、甘油、苯、一些气体分子(O2、CO2)及某些氨基酸在一定程度上也可通过扩散进出细胞。,第三节 营养物质进入细胞,二、促进扩散(facilitated diffusion),被动的物质跨膜运输方式 物质运输过程中不消耗能量 参与运输的物质本身的分子结构不发生变化 不能进行逆浓度运输 运输速率与膜内外物质的浓度差成正比。,通过促进扩散进行跨膜运输的物质需要借助与载体(carrier) 的作用才能进入细胞，而且每种载体只运输相应的 物质，具有较高的专一性。,第三节 营养物质进入细胞,二、促进
23、扩散(facilitated diffusion),载体只影响物质的运输速率，并不改变该物质在膜内外形成的动态平衡状态； 这种性质都类似于酶的作用特征，因此载体蛋白也称为透过酶； 透过酶大都是诱导酶,只有在环境中存在机体生长所需的营养物质时，相应的透过酶才合成。,第三节 营养物质进入细胞,三、主动运输(active transport),在物质运输过程中需要消耗能量 可以进行逆浓度运输,主动运输是广泛存在于微生物中的一种主要的物质运输方式,运输物质所需能量来源： 好氧型微生物与兼性厌氧微生物直接利用呼吸能； 厌氧型微生物利用化学能(ATP)； 光合微生物利用光能； 嗜盐细菌通过紫膜(purpl
24、e membrane)利用光能；,第三节 营养物质进入细胞,三、主动运输(active transport),1、初级主动运输(primary active transport),由电子传递系统、ATP酶或细菌嗜紫红质引起的质子运输方式，是一种质子的主动运输方式。呼吸能、化学能和光能的消耗，引起胞内质子外排，导致原生质膜内外建立质子浓度差，使膜处于充能状态，即形成能化膜。,第三节 营养物质进入细胞,三、主动运输(active transport),1、初级主动运输(primary active transport),好氧型、兼性厌氧型微生物氧化释放电子，传递,厌氧型微生物发酵产生ATP， AT
25、P酶,光合微生物光合磷酸化,嗜盐菌视紫红质,第三节 营养物质进入细胞,三、主动运输(active transport),2、次级主动运输(secondary active transport),同向运输(symport),逆向运输(antiport),单向运输(uniport),为什么被称为：次级主动运输？,通过初级主动运输建立的能化膜在质子浓度差消失的过程中，往往偶联其他物质的运输,3、ATP结合性盒式转运蛋白系统,ABC转运蛋白由两个疏水性跨膜域与位于质膜内表面的两个核苷酸结合结构域形成复合物，两个疏水性跨膜域在质膜上形成一个孔，两个核苷酸结合结构域可与ATP结合。 ABC转运蛋白可以与专
26、一性的溶质结合蛋白结合，溶质结合蛋白携带被转运的溶质分子， ATP水解产生能量，使跨膜域构象发生改变，被转运的溶质分子进入胞内。,该酶由大小两个亚基组成，大亚基可被磷酸化,第三节 营养物质进入细胞,4、Na+,K+-ATP酶(Na+,K+-ATPase)系统,利用ATP的能量将Na+由细胞内“泵”出胞外，并将K+“泵”入胞内。,第三节 营养物质进入细胞,5、基团转位(group translocation),基团转移主要存在于厌氧型和兼性厌氧型细菌中，主要用于糖 的运输。脂肪酸、核苷、碱基等也可通过这种方式运输。,有一个复杂的运输系统来完成物质的运输；物质在运输过程中发生化学变化；,6、铁载体运输,铁载体（siderophore）是许多细菌和真菌分泌到胞外的一类能与Fe3+形成复合物并将其运输进入胞内的小分子化合物，如真菌产生的氧肟酸盐和大肠杆菌产生的儿茶酚盐。 3个铁载体可围绕一个Fe3+形成铁-铁载体复合物，该复合物到达细胞表面后与铁载体受体蛋白结合后将铁转运至胞内，或通过ABC转运蛋白将铁-铁载体复合物转运至胞内。,第三节 营养物质进入细胞,本章思考题：什么是选择性培养基？什么是鉴别性培养基？二者有何区别和联系？试举一例并分析其原理？,
