1、提取液:1M Tris.HCl pH8.0 10ml0.5M EDTA pH8.0 4mlCTAB 2gNaCl 8.176g巯基乙醇 2ml(使用时加入)加 70ml ddH2O 溶解定容至 98ml步骤:1. 在液氮中研磨菌丝体,直到菌丝体研磨成解决白色细粉2. 将菌丝体装入 1.5ml 离心管中,加入 600lCTAB 提取液,于 62-65水浴中加热1h,间或振荡数次3. 加入 600lTris 饱和酚:氯仿:异戊醇(25:24 :1) , 【现用现配,按比例混匀后再加入管中】 ,温和振荡几次,然后在 12000rpm 下离心 15 分钟4. 取上清至新的离心管中,然后加入 1/10
2、体积的 3M/L NaAc,1 倍体积的异丙醇,轻柔混匀,在-20下静置 30-60 分钟,在 12000rpm 下离心 5 分钟5. 离心后去上清,沉淀用 70乙醇润洗 2 次6. 加入适量的 TE 缓冲液溶解沉淀,7. 加入 1l RNase(10mg/ml )37水浴 1 小时8. 加入 1 倍体积的饱和酚:氯仿:异戊醇(25:24 :1) , 【现用现配,按比例混匀后再加入管中】 ,温和振荡几次,然后在 12000rpm 下离心 15 分钟,取上清至新的离心管9. 加入 1 倍体积的氯仿,温和振荡几次,在 12000rpm 下离心 15 分钟,取上清至新的离心管中10. 加入 2 倍体积无水乙醇,-20静置 30 分钟以上,8000rpm 离心 12 分钟11. 去除上清,沉淀用 70乙醇润洗 2 次,加入 100l TE 缓冲液溶解沉淀,放入-20 存放,待电泳检测