1、长 春 中 医 药 大 学本 科 生 毕 业 论 文曹 园 园年 级： 2007 级专 业： 药 学班 级： 一 班学 号： 37 号二 O 一一年六月1莲芝消炎片的提取工艺研究曹 园 园指 导 教 师： 李大伟实 习 单 位： 江苏康缘药业股份有限公司论文提交日期： 2011 年 6 月论文答辩日期： 2011 年 6 月答辩组组长： 2答辩组成员： 长春中医药大学药学院本科生毕业论文诚信承诺书毕业论文题目 莲芝消炎片的提取工艺研究学生姓名 曹园园 学号 37 号专业 药 学 班级 1 班学生承诺我承诺在毕业设计（论文）活动中遵守学校有关规定，恪守学术规范，在本人的毕业设计（论文）中未剽窃、
2、抄袭他人学术观点、思想和成果，未篡改实验数据，如有违规行为发生我愿承担一切责任，接受学校处理。 学生签字 ：曹园园 2011 年 月 日目 录摘要11 引言21.1 材料与仪器22 实验方法22.1 仪器与材料22.1.1 仪器22.1.2 药材22.1.3 试剂2 2.2 实验方法的选择32.2.1 因素和水平的确定3 2.2.2 脱水穿心莲内酯的测定33 实验结果 43.1 正交实验结果43.2 方差分析53.3 验证实验64 小结与讨论6参考文献7致谢 8 附录 1 9附录 2 111摘 要目的： 穿心莲中含有脱水穿心莲内酯，它是清热解毒的主要成分，因此本实验对莲芝消炎片中主药穿心莲的提
3、取工艺进行研究。方法： 采用正交试验方法，用 HPLC测定其含量。结果： 实验表明加 8 倍量乙醇（65%），浸渍 72 小时，提取三次为最佳工艺。测定脱水穿心莲内酯的含量最高。结论： 所以提取穿心莲内置用正交试验法用高效液相色谱仪进行含量测定，表明，8 倍量乙醇（65%），浸渍 72 小时，提取三次为最佳工艺。关 键 词： 穿心莲内酯 正交试验 含量测定AbstractThe purpose of anti-inflammatory tablets by Lianzhi Andrographolide dry extract, dry mountains sesame extract com
4、ponents. Have Qingrejiedu, cools the blood swelling for Nasal congestion fire insides of coughing, asthma, tonsillitis, The treatment pharyngodynia the effectiveness 1. Therefore it is of broad prospects. Andrographis contains dehydroandrographolide, it is Qingrejiedu of the major components, So thi
5、s experiment right Lianzhi Tablets main drug Chuanxinlian the extraction process research. Methods orthogonal test method, Determination of its content. Results showed increases eight times the volume of ethanol (65%), dipping 72 hours, three of the best extraction process. Determination of dehydroa
6、ndrographolide the highest content.Keywords : orthogonal Andrographolide Determination Test 21 引言1.1 穿心莲别名一见喜、榄核莲、印度草、斩蛇剑、苦胆草、蛇草、四方莲、四方草、雄胆草、春莲夏柳；日行千里、。本药系爵床科须药草属一年生草本植物，我国的穿心莲最早在广东及福建南部引种栽培，经过五千年中医药文明的大浪淘沙，穿心莲早已应用于民间，作为治痢及外科疮疡肿毒等各种疾病的要药。 穿心莲性味苦寒、无毒，其主要作用是清热解毒、凉血消肿。穿心莲的各种产品临床常用于治疗各种感染性疾病，包括外伤感染、疖、痈、
7、丹毒、上呼吸道感染、急慢性扁桃体炎、急慢性咽喉炎、急慢性支气管炎、急性菌痢、急性胃肠炎、尿路感染、子宫内膜炎、盆腔炎、中耳炎、牙周炎等等。具有清热解毒、抗菌消炎等作用。穿心莲的副作用和毒性很小，临床应用一般是安全的，它可以改善机体免疫防御能力，发挥药物抗菌作用 2。莲芝消炎片由穿心莲干浸膏、山芝麻干浸膏组成。具有清热解毒、凉血消肿，用于肺胃火毒内盛引起的咳嗽、气喘、扁桃体炎、喉痹咽痛的功效 1。因此对它的研究有其广阔前景。穿心莲在经过现代技术的研制、提取、制造等多项创新后，逐步发展，成为代表中医药文明与科技新技术的消炎良药2 实验方法2.1 仪器与材料2.1.1 仪器德国 SartoriusR
8、200D 十万分之一电子分析天平250LH 超声波清洗仪（上海科岛超声仪器有限公司）戴安 V3000 高效液相色谱仪（上海科岛超声仪器有限公司）2.1.2 药材穿心莲叶（穿心莲叶中主要成分含量最高） 用粉碎机粉碎成粗粉备用，32.1.3 试剂甲醇、乙醇等试剂均为分析纯2.2 实验方法的选择2.2.1 因素和水平的确定中华人民共和国卫生部药品标准第十二册中药成方制剂莲芝消炎片中部分参数不明确，提取工艺中只有提取次数，而加溶媒量和提取时间不明确，因此我们以处方中有效成分脱水穿心莲内酯为检测指标，采用正交实验法对提取工艺中加溶媒量和提取时间进行考察。对实验结果进行系统分析：提取加溶媒量（A）、浸渍时
9、间（B）、提取次数（C），每个因素三个水平见表 1表 1 因素水平表A B C 水平 加溶剂量（倍） 亲爱时间（小时） 提取次数（次） 1 6 48 12 8 72 23 10 96 32.2.2 脱水穿心莲内酯的测定色谱条件与系统适用性实验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇水（55：45）为流动相，检测波长 250nm，理论塔板数按脱水穿心莲内酯计算应不低于 3000。对照品溶液的制备 精密称取脱水穿心莲内酯适量，加甲醇制成每 1ml 含 20g的溶液即得。4供试品溶液的制备 精密称定穿心莲干浸膏 0.3g，置锥形瓶中精密加入甲醇100ml，称定重量，超声处理（250w，25KHz）3
10、0 分钟，放冷，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得测定法 分别吸取上述供试品溶液和对照品溶液个 10l 注入液相色谱仪，测定即得。对照品溶液液相色谱图谱见附录 1。供试品溶液液相色谱图谱见附录 2。3 实验结果 3.1 正交实验结果取穿心莲干膏所用原料（穿心莲叶 100g），按正交实验方案，取药材 9 份（每份 100g），每份按 L9（3 4）正交表所设计方案，浸渍、滤过、合并、浓缩、干燥，即得 3,4、5 。得到干浸膏 36.7g，精密称定穿心莲干浸膏 0.3g 制备供试品溶液。以干膏中的脱水穿心莲内酯含量为指标，结果见表 25表 2 L9（3 4）正交实验结果试验号
11、A B C D 脱水穿心莲内酯含量(g/g)1 1 1 1 1 16.702 1 2 2 2 18.293 1 3 3 3 17.494 2 1 2 3 18.125 2 2 3 1 20.146 2 3 1 2 18.397 3 1 3 2 18.228 3 2 1 3 19.319 3 3 2 1 18.31K1 52.48 53.04 54.40 55.16 K2 56.65 57.74 54.73 54.90 K3 55.85 54.02 55.85 54.92K1 17.49 17.68 18.13 18.39K2 18.88 19.25 18.24 18.30K3 18.62 18
12、.07 18.62 18.31R 1.39 1.57 0.49 0.09每一正交表 L9（3 4）有 9 行 4 列，由数字“1” 、 “2”、 “3”组成，用它来安排试验，最多允许安排 4 个因素即加溶媒量（A）、浸渍时间（B）、提取次数（C）及空白(D)，每个因素可以考虑 3 个水平，共做 9 次试验。6正交表 L9（3 4）有两个特点：（1） 列中各数字出现的次数相同。（2）在任何两列中，各种数字对出现的次数相同。正交表的这两个特点，说明正交表具有“均衡分散性”与“整齐可表性” 。因此用正交表安排试验能使任何两个因素，不同水平的搭配次数相同，且不同水平的试验次数相同，从而使试验点比较均匀
13、并具有代表性，所以能用较少次试验及分析得出比较好的试验结果。本实验按正交表共做九次实验，用 HPLC 测定含量的图谱见附录2，依次为图 1、图 2、图 3、图 4、图 5、图 6、图 7、图 8、图 9，结果表明图 5 的含量最高。3.2 方差分析从三个水平看在加提取加溶媒量（A）中各水平顺序为 K2K 3K 1，说明采用 8倍药材量的乙醇为佳。浸渍时间（B）各水平大小顺序为 K2K 3K 1，以 K2水平最佳，故提取时间 72 小时为佳。提取次数（C）中各水平顺序为 K3K 2K 1三次结果最佳。因此最佳的提取工艺为 A2B2C3。即加 8 倍量乙醇（65%）浸提 72 小时提取三次。方差分
14、析表明提取时间（因素 B）和提取溶媒量（因素 A）对提取工艺有极显著影响，而提取次数（因素 C）对提取工艺有显著影响。见表 3表 3 方差分析表方差来源 离差平方和 自由度 均方 F 值 F 值（） 显著性A 3.26509 2 1.6325 233.9 0.01 极显著B 3.99639 2 1.9982 286.3 0.01 极显著C 0.399509 2 0.1925 27.60 0.05 显著D 0.01396 2 0.0070 1.000 - -结果：F 0.05(2,2) = 19.0 F0.01(2,2) = 99.03.3 验证实验按最佳工艺制备三批样品，结果测定脱水穿心莲内酯
15、的平均含量为 20.20g/g 7，结果符合要求。4 小结与讨论脱水穿心莲内酯是穿心莲中所含的主要成分， 中国药典2000 版一部穿心莲项下脱水穿心莲内酯的含量测定使用薄层扫描法 2 ，而本试验选择了 HPLC 法测定脱水穿心莲内酯的含量，该法具有快速、分离度好、重现性好、灵敏度高的特点，大大缩短了对莲芝消炎片工艺提取研究的时间，并且数据准确可靠。本实验确定了莲芝消炎片中穿心莲的提取最佳工艺为加 8 倍量乙醇浸提 72 小时提取三次。其中提取时间（因素 B）和提取溶媒量（因素 A）为主要影响因素，具有极显著性。提取次数（因素 C）为次要影响因素，具有显著性。这些指标可为生产提供参考依据。8参
16、考 文 献1 中华人民共和国卫生部药品标准第十二册S.1998,2982 中华人民共和国药典 2005 版第一部3 王永林,陶玲,周宝珠等. 高效液相色谱法测定消炎利胆胶囊中脱水穿心莲内酯含量J.药物分析杂志,2000,20(1):43 4孙文堇主编.天然药物成分提取分离与制备M.北京中国医药科技出版社,1994,115王炳南,贺英菊,龙波等. 脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐含量的测定方法J.天然气化 IC/化学与化工,1999,(3):536谢春英,苏微微. 莲芝消炎胶囊中脱水穿心莲内酯的 HPLC 法测定.中药材,2000,(12)7邓楠,王凯. 高效液相色谱法测定穿王消炎胶囊中两种成分含
17、量.中国医院药学杂志,2006,(08)8余楚钦,邓江,梁汉明,张育强. HPLC 法测定莲胆消炎片中脱水穿心莲内酯的含量.中药材，2003,(07)9毋福海,李光善, 梁汉明,张育强. HPLC 测定复方穿心莲片中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量.华西药学杂志,2004,(02) 10陈大全,王昌利,王剑波,王四旺.正交试验优选宝枫果壳中鞣质的提取工艺研究中草药，2006,37(12):18169致 谢在我实习期间得到了单位领导的关怀，将学校所学的专业知识运用到实际当中，实现了学以自用的目标。论文的研究工作是在江苏康缘药业股份有限公司进行的，在实验过程中得到了单位领导、老师和同事们的大力支持
18、和帮助。尤其感谢李大伟老师，在实验期间帮助我解决很多问题，使我的论文能够顺利完成。感谢康缘药业为我提供了实验条件，感谢单位领导、老师和同事们在实验中给予无限关怀和鼓励，向多年来所有鼓励、关心、支持和帮助我的领导、教师和同学们表示最衷心的感谢!10附录 1：1 穿 心 莲 对 照 品 1Sample Name: 穿 心 莲 对 照 品 1 Injection Volume: 10.0 Vial Number: BA1 Channel: UV_VIS_1Sample Type: standard Wavelength: 250Control Program: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 B
19、andwidth: n.a.Quantif. Method: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Dilution Factor: 1.0000 Recording Time: 9:01 AM Sample Weight: 1.0000 Run Time (min): 40.00 Sample Amount: 1.0000 No. Ret.Time Peak Name Height Area Rel.Area Amount Type min mAU mAU*min %1 27.17 n.a. 5.470 6.943 100.00 n.a. BMBTotal: 5.470 6.943 100.0
20、0 0.000 050.1.2.535.40.-11.02.3.04.5.06.品#品1UV_ISU i -27.16L:25 图 1112 穿 心 莲 对 照 品 2Sample Name: 穿 心 莲 对 照 品 2 Injection Volume: 10.0 Vial Number: BA1 Channel: UV_VIS_1Sample Type: standard Wavelength: 250Control Program: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Bandwidth: n.a.Quantif. Method: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Dilution F
21、actor: 1.0000 Recording Time: 9:42 AM Sample Weight: 1.0000 Run Time (min): 40.00 Sample Amount: 1.0000 No. Ret.Time Peak Name Height Area Rel.Area Amount Type min mAU mAU*min %1 27.18 n.a. 5.535 6.983 100.00 n.a. BMB*Total: 5.535 6.983 100.00 0.000 050.1.20. 35.40.-11.02.3.04.5.06.品# if bylenov品2UV
22、_ISU i1 -27.80L:25 图 212附录 213 穿 心 莲 样 33Sample Name: 穿 心 莲 样 33 Injection Volume: 10.0 Vial Number: BA7 Channel: UV_VIS_1Sample Type: unknown Wavelength: 250Control Program: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Bandwidth: n.a.Quantif. Method: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Dilution Factor: 1.0000 Recording Time: 5:12 PM Sample We
23、ight: 1.0000 Run Time (min): 40.00 Sample Amount: 1.0000 No. Ret.Time Peak Name Height Area Rel.Area Amount Type min mAU mAU*min %1 24.31 n.a. 16.090 18.420 100.00 n.a. BMBTotal: 16.090 18.420 100.00 0.000 050.5535.40.-110.2.30.4.50.6.品#3 if bylenov品3UV_ISAU i1 -24.3L:25 图 1137 穿 心 莲 样 21Sample Name
24、: 穿 心 莲 样 21 Injection Volume: 10.0 Vial Number: BA4 Channel: UV_VIS_1Sample Type: unknown Wavelength: 250Control Program: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Bandwidth: n.a.Quantif. Method: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Dilution Factor: 1.0000 Recording Time: 1:06 PM Sample Weight: 1.0000 Run Time (min): 40.00 Sample Amount: 1.
25、0000 No. Ret.Time Peak Name Height Area Rel.Area Amount Type min mAU mAU*min %1 25.08 n.a. 16.463 19.177 100.00 n.a. BMBTotal: 16.463 19.177 100.00 0.000 10.5.20.535.40.-1010.2.30.4.50.6.品#7 if bylenov品21UV_ISAU i1 -25.08L:25 图 21421 穿 心 莲 样 53Sample Name: 穿 心 莲 样 53 Injection Volume: 10.0 Vial Numb
26、er: BB3 Channel: UV_VIS_1Sample Type: unknown Wavelength: 250Control Program: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Bandwidth: n.a.Quantif. Method: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Dilution Factor: 1.0000 Recording Time: 10:39 PM Sample Weight: 1.0000 Run Time (min): 40.00 Sample Amount: 1.0000 No. Ret.Time Peak Name Height Area Rel.
27、Area Amount Type min mAU mAU*min %1 24.59 n.a. 17.012 20.358 100.00 n.a. BMBTotal: 17.012 20.358 100.00 0.000 010.5 35.40.-112.5.037.50.70.品#2 if bylenov品53UV_ISAU i1 -24.593L:25 图 31516 穿 心 莲 样 42Sample Name: 穿 心 莲 样 42 Injection Volume: 10.0 Vial Number: BA8 Channel: UV_VIS_1Sample Type: unknown W
28、avelength: 250Control Program: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Bandwidth: n.a.Quantif. Method: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Dilution Factor: 1.0000 Recording Time: 7:14 PM Sample Weight: 1.0000 Run Time (min): 40.00 Sample Amount: 1.0000 No. Ret.Time Peak Name Height Area Rel.Area Amount Type min mAU mAU*min %1 24.77 n.a. 1
29、5.624 18.712 100.00 n.a. BMBTotal: 15.624 18.712 100.00 0.000 05100.535.40.-110.2.30.4.50.6.品#6 if bylenov品42UV_ISAU i1 -24.73L:25 图 4163 穿 心 莲 样 11Sample Name: 穿 心 莲 样 11 Injection Volume: 10.0 Vial Number: BA2 Channel: UV_VIS_1Sample Type: unknown Wavelength: 250Control Program: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究
30、Bandwidth: n.a.Quantif. Method: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Dilution Factor: 1.0000 Recording Time: 10:23 AM Sample Weight: 1.0000 Run Time (min): 40.00 Sample Amount: 1.0000 No. Ret.Time Peak Name Height Area Rel.Area Amount Type min mAU mAU*min %1 27.01 n.a. 14.125 17.656 100.00 n.a. BMBTotal: 14.125 17.656
31、 100.00 0.000 500.35.40.-.010.2.30.4.5.0品# if bylenov品1UV_ISAU i1 -27.0L:25 图 51735 穿 心 莲 样 91Sample Name: 穿 心 莲 样 91 Injection Volume: 10.0 Vial Number: BC2 Channel: UV_VIS_1Sample Type: unknown Wavelength: 250Control Program: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Bandwidth: n.a.Quantif. Method: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Dilu
32、tion Factor: 1.0000 Recording Time: 8:12 AM Sample Weight: 1.0000 Run Time (min): 40.00 Sample Amount: 1.0000 No. Ret.Time Peak Name Height Area Rel.Area Amount Type min mAU mAU*min %1 25.88 n.a. 14.462 18.915 100.00 n.a. BMBTotal: 14.462 18.915 100.00 0.000 010.5.0.35.40.-110.2.30.4.50.6.品#35 if by
33、lenov品91UV_ISU i1 -25.80L:25 图 6188 穿 心 莲 样 22Sample Name: 穿 心 莲 样 22 Injection Volume: 10.0 Vial Number: BA4 Channel: UV_VIS_1Sample Type: unknown Wavelength: 250Control Program: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Bandwidth: n.a.Quantif. Method: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Dilution Factor: 1.0000 Recording Time: 1:47 PM Samp
34、le Weight: 1.0000 Run Time (min): 40.00 Sample Amount: 1.0000 No. Ret.Time Peak Name Height Area Rel.Area Amount Type min mAU mAU*min %1 24.88 n.a. 16.583 19.179 100.00 n.a. BMBTotal: 16.583 19.179 100.00 0.000 051020.35.40.-110.2.30.4.50.6.品#8 if bylenov品2UV_ISAU i1 -24.80L:25 图 7194 穿 心 莲 样 12Samp
35、le Name: 穿 心 莲 样 12 Injection Volume: 10.0 Vial Number: BA2 Channel: UV_VIS_1Sample Type: unknown Wavelength: 250Control Program: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Bandwidth: n.a.Quantif. Method: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Dilution Factor: 1.0000 Recording Time: 11:04 AM Sample Weight: 1.0000 Run Time (min): 40.00 Sample Am
36、ount: 1.0000 No. Ret.Time Peak Name Height Area Rel.Area Amount Type min mAU mAU*min %1 26.99 n.a. 14.069 17.648 100.00 n.a. BMB*Total: 14.069 17.648 100.00 0.000 0510.5.2.535.40.-.10.2.30.4.5.0品# if bylenov品12UV_ISAU i1 -26.93L:25 图 82036 穿 心 莲 样 92Sample Name: 穿 心 莲 样 92 Injection Volume: 10.0 Via
37、l Number: BC2 Channel: UV_VIS_1Sample Type: unknown Wavelength: 250Control Program: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Bandwidth: n.a.Quantif. Method: 莲 芝 消 炎 片 工 艺 研 究 Dilution Factor: 1.0000 Recording Time: 8:52 AM Sample Weight: 1.0000 Run Time (min): 40.00 Sample Amount: 1.0000 No. Ret.Time Peak Name Height Area Rel.Area Amount Type min mAU mAU*min %1 25.78 n.a. 14.556 18.891 100.00 n.a. BMBTotal: 14.556 18.891 100.00 0.000 01020.35.40.-110.2.30.4.50.6.品#36 if bylenov品92UV_ISU i1 -25.780L:25 图 9
