1、1生 化 实 验 讲 义基础实验生物科学与工程学院2实验一 实验基本操作技能培训一、 仪器的洗涤与干燥1. 仪器的洗涤化学实验中经常使用的玻璃仪器和瓷器，常常由于污物和杂质的存在而得不出正确的结果。因此，在进行化学实验时，必须把仪器洗涤干净。玻璃仪器的洗涤方法很多，应根据实验的要求、污物的性质、沾污程度来选择。常用的洗涤方法如下：(1)用水刷洗用水和毛刷刷洗，再用自来水冲洗几次，可除去附在仪器上的尘土、可溶性和不溶性杂质。注意洗刷时不能用秃顶的毛刷，也不能用力过猛，否则会戳破仪器。(2)用去污粉、肥皂洗、洗衣粉、洗涤剂洗去污粉由碳酸钠、白土、细砂等组成，它与肥皂、合成洗涤剂一样，能去除油污和一
2、些有机物。由于去污粉中细砂的摩擦和白土的吸附作用，使得洗涤的效果更好。洗涤时，可用少量水将要洗的仪器润湿，用毛刷蘸取少量去污粉刷洗仪器的内外壁，最后用自来水冲洗。用去污粉、洗衣粉、洗涤剂洗这些洗涤剂可以洗去油污和有机物质。若油污和有机物质仍然洗不干净，可用热的碱液洗。(3)用铬酸洗液洗铬酸洗液是由浓硫酸和重铬酸钾配制而成的，具有很强的氧化性，对有机物和油污的去污能力特别强。使用铬酸洗液时要注意被洗涤的仪器内不宜有水，以免洗液被冲淡或变绿而失效。能用一般洗涤剂洗净的器皿，尽量不要选用洗液洗涤。(4)用特殊的试剂洗应根据沾在器壁上污物的性质，采用合适的方法或药品来处理。例如，沾在器壁上的二氧化锰用
3、浓盐酸处理；AgCl 沉淀可以用氨水洗涤；硫化物沉淀可选用硝酸加盐酸洗涤等等。洗涤时应遵循“少量多次”的原则，一般以洗三次为宜。2玻璃仪器的干燥可根据不同的情况，采用下列方法将洗净的仪器干燥：(1)晾干不急用的仪器在洗净后，可倒置在干净的实验柜内或仪器架上任其自然干燥。(2)烘干将洗净的仪器尽量倒干水后放入烘箱内烘干。放入烘箱前要先把水沥干，放置仪器时，仪器的口应朝下。(3)吹干用吹风机或气流烘干器把仪器吹干。3. 基本度量仪器的使用和滴定分析的基本操作1)量筒量筒是实验中经常使用的度量液体的仪器之一，常见量筒的容量有 10 mL、20 mL、50 mL、 100 mL 、500 mL 等，可
4、根据需要来选用。量取液体时，应用左手持量筒，并以大拇指指示所需体积的刻度处，右手持试剂瓶，将液体小心倒入量筒。读取刻度时，应让量筒垂直，使视线与量筒内液面的弯月形最低点处于同一水平面上，偏高或偏低都会产生误差。量筒不能作反应器用，也不能装热的液体。2)滴定管滴定管是用来进行滴定的器皿，用于测量在滴定中所用溶液的体积。3酸碱滴定管滴定管一般分为两种，一种是酸式滴定管，另一种是碱式滴定管。各有白色、棕色之分。酸式滴定管的下端有玻璃活塞，可盛放酸液或氧化性溶液，不能盛放碱液，因为碱液会腐蚀玻璃，使活塞不能转动。盛放碱液时要用碱式滴定管，它的下端连接一橡皮管，内放一个比橡皮管管径稍大的玻璃珠作为开关以
5、控制溶液的流出，橡皮管下端再连一尖嘴玻璃管，这种滴定管不能盛放会腐蚀橡皮的溶液，例如酸或氧化性溶液等。滴定管洗涤：在洗涤前，应检查酸式滴定管的玻璃活塞与塞槽是否符合，活塞转动是否灵活。碱式滴定管下端连接一段橡皮管的粗细、长度是否适当，橡皮管的内管径应稍小于玻璃珠的直径，玻璃珠应圆滑，橡皮管应有弹性，否则难于紧固玻璃珠，操作时易上下移动而影响滴定。滴定管在用前必须仔细洗涤，当没有明显污物时，可以直接用自来水冲洗，或用滴定管刷蘸肥皂水刷洗(注意滴定管刷的刷毛必须相当软，刷头的铁丝不能露出，也不能向旁边弯曲，以免刷伤内壁)，然后再用自来水洗去肥皂水。洗刷后的滴定管，应将其直立，使水流尽，若滴定管的内
6、壁透明并不附着液滴，表示已洗净。洗净后，滴定管用蒸馏水淌洗三次，第一次用蒸馏水 10 mL，第二次及第三次各用蒸馏水 5 mL。每次加入蒸馏水后，边转边向管口倾斜使蒸馏水布满全管，并稍振荡，将管直立，使水流尽。在用自来水洗涤后，应检查滴定管是否漏水。检查酸式滴定管时，把玻璃活塞关闭，用水充满至“0”刻度线以上，直立约 2 分钟，仔细观察有无水滴滴下，有无水由活塞隙缝渗出。然后将活塞转 180，再如此直立 12 分钟后观察有无水滴滴下或从活塞隙缝渗出。如果检查碱式滴定管，只需装水直立 2 分钟即可。如果发现漏水或酸式滴定管活塞转动不灵时，把酸式滴定管取下将活塞涂油，碱式滴定管则需换玻璃珠或橡皮管
7、。活塞涂油时，把滴定管平放在桌面上，先取下活塞上的橡皮圈，再取下活塞(拿在手上、放在干净的表面皿或滤纸上均可) ，用滤纸把活塞、活塞套、活塞槽内的水吸干，用手指粘少量凡士林擦在活塞两头，沿玻璃塞两端圆周各涂一薄层(如图 3-6 所示 )，但要避免涂得太多，尤其是在孔的近旁，油层要均匀涂满全圈，要尽可能薄些。涂完以后将活塞一直插入塞套中(不要转着插) ，插活塞时孔应与滴定管孔平行。然后向一个方向转动活塞，直到内外面观察时全部都透明为止。如果发现旋转不灵活，或出现纹路，表示涂油太多。遇到这些情况，都必须重新涂油。注意在套橡皮圈时，应该将滴定管放在桌上，一手顶住活塞大头，一手套橡皮圈或系橡皮圈，以免
8、将活塞顶出。然后再用前面所介绍的方法检查是否漏水。按前述方法用自来水冲洗干净以后，分别用蒸馏水和标准溶液各洗涤两到三次。用标准溶液淌洗时，第一次用 10 mL，第二次及第三次各用 5 mL。每次加入溶液后，也是边转边向管口倾斜使溶液布满全管，直立以后，打开活塞使溶液从管尖口放出。在放出时一定尽可能完全放尽，然后再洗第二次。但要特别注意，在装入标准溶液之前应先将试剂瓶中4的标准溶液摇匀，使凝结在试剂瓶内壁的水混入溶液中(这在天气比较热或室温变化较大时更有必要) ，混匀后，溶液应从试剂瓶中直接倒进滴定管，而不要经过其他器皿(如烧杯、漏斗、滴管等)。一定要注意，不要使溶液从试剂瓶移到滴定管的时候，改
9、变它的浓度。 滴定管读数：读取滴定管容积刻度的数值，称为读数。正确地读数是减少容量分析实验误差的重要措施。读数时应遵守下列规则：(1)读数前应观察，管壁是否挂有水珠，管内的出口尖嘴处有无悬挂液滴，管嘴是否有气泡。(2)读数时应把滴定管从滴定管架上取下，用右手大拇指和食指捏住管上部无刻度部位，使滴定管自然垂直，然后读数。每次装入溶液或放出溶液后，应等 12 分钟，待附着在管内壁的溶液流下后再读数。(3)对于无色和浅色溶液，应读取弯月面下缘实线的最低点，视线应与弯月面下缘实线的最低点相切。对于有色溶液，如 KMnO4、I 2 溶液等，视线应与液面两侧的最高点相切。若滴定管的背后有一条蓝线或带，无色
10、溶液就形成了两个弯月面，并且相交于蓝线的中线上，读数时读此交点的刻度。(4)滴定时，最好每次从 0.00 mL 开始，或从“05 mL”的范围内的任一刻度开始，这样可以减少体积误差。滴定管读数必须准确至 0.01 mL。(5)读取的读数立即记录在实验记录本上。滴定操作：使用酸式滴定管时，用左手控制活塞，大拇指在管前，食指和中指在管后，三指轻轻捏住塞柄，无名指和小指向手心弯曲，手心内凹，以防活塞被顶出造成漏液(如图3-9 所示 )。滴定时，右手握锥形瓶上部，将滴定管下端伸入锥形瓶口约 l cm，然后边滴加溶液边向同一方向摇动锥形瓶。滴定的速度开始时可稍快，一般为 34/秒滴左右，但不能滴成水线，
11、应呈“见滴成串” 。接近终点时，应逐滴加入，即加一滴摇动后再加，马上到达终点时，应控制半滴加入，即将活塞稍稍转动，使半滴悬于管口，用锥形瓶内壁将其沾下，再 用 洗 瓶 吹 洗 内 壁 ， 使 附 着 的 溶 液 全 部 流 下 ， 然 后 摇 动 锥 形 瓶 。 如 此 继 续 滴 定 至 滴 定 终 点 为止 。酸式滴定管的操作 碱式滴定管的操作使用碱式滴定管时(如图 3-10 所示)，左手捏住乳胶管，拇指在前，食指在后，其余三指辅助夹住出口管，用拇指和食指捏住玻璃珠中上部，向一边挤压玻璃珠外面的乳胶管，使玻璃珠和乳胶管之间形成一个狭缝，溶液即可流出。注意不要用力捏玻璃珠，也不要使玻璃珠上下
12、移动，更不要捏玻璃珠下部的乳胶管，以免进入空气形成气泡，影响读数。滴定通常在锥形瓶中进行，必要时也可以在烧杯中进行(如在烧杯中滴定5图 3-11 所示) 。把烧杯放在实验台上，滴定管的高度应以其下端伸入烧杯内约 1 cm 为宜。滴定管的下端应在烧杯的左后方处，如放在中央，会影响搅拌；如离杯壁过近，滴下的溶液不易搅拌均匀。左手控制滴定管滴加溶液，右手持玻璃棒搅拌溶液。玻璃棒应作圆周搅动，不要碰到杯壁和底部。接近终点加半滴时，可用玻璃棒下端轻轻沾下，再浸入烧杯中搅匀。3）容量瓶容量瓶是一个细颈梨形的平底瓶。瓶塞是带有磨口的玻璃塞，细颈上刻有环形标线，瓶上标有容积(mL)和标定时的温度(一般为 20
13、)。在指定的温度下(一般为 20)，当液体充满到标线时，液体体积恰好与瓶上所标的体积相等。容量瓶有10mL、 25mL、 50mL、100mL 、250mL、1000mL、2000 mL 几种规格，并有白、棕两色，棕色的用来配制见光易分解的试剂溶液。容量瓶不能加热，磨口瓶塞是配套的，不能互相调换。容量瓶用于配制准确的一定体积的溶液。也用于标准的浓溶液稀释。在使用容量瓶之前，要选择好容量瓶：(1)要选择与所要求配制的溶液体积相一致的容量瓶。 (2)要选择瓶塞与瓶口相符合、不漏水的容量瓶。选好容量瓶后，首先仔细检查有无裂痕破损，然后进一步检查瓶口与瓶塞间是否漏水。检查瓶口与瓶塞间是否漏水，可在瓶中
14、放入自来水到标线附近，将瓶塞塞好，左手拿住容量瓶瓶口并用食指按住塞子，右手指尖顶住瓶底边缘，倒立 2 分钟左右，观察瓶塞周围是否有水渗出，如果没有，把瓶直立，转动瓶塞 180后，再倒立过来试一次。这样做两次检查是必要的，因为有时瓶塞与瓶口不是在任何位置都是密合的。容量瓶在使用前要充分洗涤干净，无论用什么方法洗，绝对不能用毛刷刷洗内壁。洗涤时，盖好瓶塞，充分振荡，洗完后立即将瓶塞塞好，以免灰尘落入或瓶塞被污染。用容量瓶配制溶液时，如果是用固体配制准确浓度的溶液( 或称标准溶液)，一般是将固体物质称在大小适当的干净烧杯中，往其中加入少量的蒸馏水或适当溶剂使之完全溶解。溶解过程不论放热或吸热，都需待
15、溶液至室温时，才能定量地将溶液转入容量瓶中。转移时，要把溶液顺玻璃棒加入，玻璃棒下端要靠住瓶颈内壁，使溶液顺内壁流入瓶中。注意玻璃棒下端的位置最好在标线稍低一点的地方，不要高到接近瓶口，玻璃棒稍向瓶中心倾斜，烧杯嘴应靠近瓶口并紧靠玻璃棒，使溶液完全顺玻璃棒流入瓶内，待溶液全部流尽后，将烧杯轻轻向上提(烧杯嘴口仍应紧靠玻璃棒)，同时直立，使附着在玻璃棒与烧杯嘴之间的溶液流入烧杯中或容量瓶内，然后先把玻璃棒放入烧杯中，才能把烧杯拿开放在桌上，用洗瓶吹水洗涤烧杯内壁和玻璃棒接触到溶液的部分 3 次，每次用水应尽量少些为宜，每次洗涤的水溶液应无损地转入容量瓶中。然后慢慢加蒸馏水至接近标线稍低 1 cm
16、 左右，等12 分钟，使黏附在瓶颈内壁的水流下后，再用细而长的滴管加蒸馏水恰至标线，这一过程称为定容。用滴管加水时，视线要平视标线，然后将滴管伸入瓶颈使管口尽量接近液面，稍向旁倾斜，使水顺壁流下，注意液面上升，滴管应随时提起，勿使溶液接触滴管，直到弯月面下缘最低点与标线相切为止。定容以后，塞好瓶塞。左手拇指在前，中指、无名指及小指在后拿住瓶颈标线以上部分，右手托住瓶底。如果容积小于 100mL 的容量瓶，就不必用右手托住容量瓶瓶底，以免由此造成的温度变化对小体积产生较大的影响。将容量瓶倒转，使气泡上升到顶，再充分振荡，如此反复 35 次，即可摇匀。容量瓶不能久贮溶液，尤其是碱性溶液会侵蚀瓶塞，
17、使瓶塞无法打开，配制好溶液后，应将溶液倒入清洁干燥的试剂瓶中贮存。容量瓶不能用火直接加热及烘烤。4) 移液管、吸量管6用于准确移取一定体积的溶液的移液管，通常有两种形状，一种移液管中间有膨大部分，称为胖肚移液管(胖肚吸管 )，常用的有 5mL、10mL 、25mL、50mL 等几种；另一种是直形的，管上有刻度，称为吸量管(刻度吸管) ，常用的有 1mL、2 mL、5 mL、10 mL 等多种(如图 3-15 所示 )。移液管和吸量管 洗涤移液管 移液管的使用用移液管或吸量管移取溶液前，先将用蒸馏水洗净过的移液管或吸量管用少量被移取的溶液淌洗 23 次，以免被移取溶液的浓度发生改变。为此，可倒少
18、许溶液于一洁净而干燥的小烧杯中，用移液管吸取少量溶液，将管横向转动，使溶液流过管内标线下所有的内壁，然后使管直立将溶液由尖嘴口放出。吸取溶液时，一般可以用左手拿洗耳球，右手把移液管插入溶液中吸取。当溶液吸至标线以上时，马上用右手食指按住管口，取出并用滤纸擦干下端，并把管尖接触于干净小烧杯壁上。然后转动移液管，稍松食指，使液体平稳下降，直至溶液的弯月面与标线相切，立即按紧食指，将移液管垂直放入接受溶液的容器中，管尖与容器壁接触(如图 3-17 所示)，放松食指，使溶液自由流出，流完后再等 15 秒左右，残留于管尖的液体不必吹出(刻“吹”字的移液管例外)，因为在校正移液管时，也未把这部分液体体积计
19、算在内。移液管使用后，应立即洗净并放在移液管架上。4. 药品的取用方法1) 液体试剂的取用从滴瓶或者试管、锥形瓶等中取液体，使试剂滴入试管中(如图 3-30 所示)，试管应垂直不要倾斜。滴管或移液管尖决不能伸入所用容器中，以免触及器壁而沾污药品；装有试剂的滴管或移液枪不能平放或管口向上斜放，以免试剂倒流腐蚀。倒入试管里液体的量一般不超过其容积的 1/3。正确 不正确2) 固体试剂的取用(1)取用试剂前应看清标签。取用时，先打开瓶塞，将瓶塞倒放在实验台上。如果瓶塞一端不是平顶而是扁平的，可用食指和中指将瓶塞夹住(或放在清洁的表面皿上) ，决不可将它横置桌面上以免污染。不能用手接触化学试剂，应根据
20、用量取用试剂。取用完毕，一定要把瓶塞盖严，绝不允许将瓶塞张冠李戴。然后把试剂瓶放回原处，以保持实验台整齐7干净。(2)要用清洁、干燥的药匙取试剂。用过的药匙必须洗净擦干后才能再使用。(3)注意取药不要超过指定用量，多取的不能倒回原瓶，可放在指定的容器中供他人使用。(4)一般固体试剂可以放在干净的纸或表面皿上称量。具有腐蚀性、强氧化性或易潮解的固体试剂应放在表面皿或玻璃容器内称量。(5)往试管(特别是湿的试管 )中加入固体试剂时，可用药匙或将取出的药品放在对折的纸槽上，伸进试管约 2/3 处，小心地将药品倒入试管内。加入块状固体试剂时，应将试管倾斜，使其沿着试管壁慢慢滑下，以免碰破试管二、常用仪
21、器及设备的使用：1. 移液枪（微量移液器）使用方法：1)选择适当的微量移液器：不同型号的微量移液器，各有其吸取体积范围，请依取用溶液体积取用适当的微量移液器。QY100 20ul 100ulQY200 50ul 200ulQY1000 100ul 1000ul2)设定体积：设定体积时，请勿将体积调整圈转到超过最低或最高的使用范围,以免损坏移液枪。3)套上微量移液器头，吸取溶液： 吸取溶液时，尖端请先套上微量移液器头 (枪头)，QY1000 使用藍色微量移液器头，QY200 及 QY100 使用黄色微量移液器头。标准操作：适用的液体：水、缓冲液、稀释的盐溶液和酸碱溶液。1)按到第一档，垂直进入液
22、面几毫米。2)缓慢松开控制按钮，否则液体进入吸头过速会导致液体倒吸人移液器内部吸人体积减少。3)打出液体时贴壁并有一定角度，先按到第一档，稍微停顿 1s 后，待剩余液体聚集后，再按到第二档将剩余液体全部压出。适用的液体：黏稠或易挥发液体在移取黏稠或易挥发的液体时，很容易导致体积误差较大。为了提高移液准确性，可以采取以下方法：1)移液前先用液体预湿吸头内部，即反复吸打液体几次使吸头预湿，吸液或排出液体时最好多停留几秒。尤其对于移取体积大的液体，建议将吸头预湿后再移取。2)采用反相移液法：吸液时按到第二档，慢慢松开控制按钮，打液时按到第二档，部分液体残留在吸头内。3)适当加热液体，使其易于吸取。使
23、用注意事项：1) 勿将微量移液器本体浸入溶液中。2) 吸液时，移液器本身倾斜，导致移液不准确( 应该垂直吸液，慢吸慢放 )。3）吸取黏度高之试液，请先将微量移液器头尖端以刀片或剪刀将出口切大，并先行预润后再吸取。4) 用大量程的移液器移取小体积样品( 应该选择合适量程范围的移液器 )。直接按到第二档吸液5）吸取酸液或具腐蚀性溶液后，请将微量移液器拆解开，各部位零件以蒸馏水冲洗干8净，擦干后再正确组合回復原狀。6) 微量移液器的任何部份切勿用火烧烤，亦不可吸取温度高于 70的溶液，避免蒸气侵入腐蚀活塞。7) 套有微量移液器头的微量移液器，无論微量移液器头中是否有溶液，均不可平放，需直立架好。2.
24、 分析天平及电子天平的使用方法：1) 事先检查电源电压是否匹配（必要时配置稳压器） ，接通电源并预热使天平处于备用状态。并检查并调整天平至水平位置。2) 预热足够时间后打开天平开关，天平则自动进行灵敏度及零点调节，使天平处于零位，否则按去皮键。待稳定标志显示后，可进行正式称量。3) 称量时将洁净称量瓶或称量纸置于称盘上，关上侧门，轻按一下去皮键，天平将自动校对零点，然后逐渐加入待称物质，直到所需重量为止。记录读数。4) 将称量瓶或称量纸拿出，转移所称量物质至锥形瓶或烧杯，将称量纸扔到垃圾桶，称量瓶清洗干净。按天平去皮键清零，以备再用。5）称量结束后，或者关上侧门，切断电源，并做好使用情况登记。
25、分析天平及电子天平使用注意事项：1）在使用前调整水平仪气泡至中间位置。2）电子天平应按说明书的要求进行预热3）称量时应从侧门取放物质，读数时应关闭箱门以免空气流动引起天平摆动。前门仅在检修或清除残留物质时使用。4）称量易挥发和具有腐蚀性的物品时，要盛放在密闭的容器中，以免腐蚀和损坏电子天平。5）操作天平不可过载使用以免损坏天平.目前我们所用天平最大量程为 200g.3. 722S 分光光度计使用方法：1）预热：开机后灯及电子部分需预热平衡，故一般开机 20min 后可开始测定。2）调波长：用旋钮调节，波长显示窗读数时目光垂直观察。3）调零及调 100%T进入测试状态。操作：打开样品槽盖，按 1
26、00%键，即可自动调整到零位。盖好盖按下“100%T”即可自动调 100%。 （注：调 100% 可能影响 0%，调整后请检查 0%，如有变化可重调 0%一次） 。4）改变样品槽位置让不同样品进入光路。槽有四位置，用拉杆改变，离测试者最近为“0”，依次为“1” 、 “2”、 “3”位置。将空白放入“0”号位置，盖好盖子，按 100%键调零，拉动拉杆，可依次读取“1” 、 “2”、 “3”位置各管吸光度值。5）确定滤光片位置：当测试波长在 340380nm 内作高精度测试可将拨杆推向前，通常不用此滤光片，可将其置于 4001 000nm 处。6）改变模式透射率：用于透明液体和固体测量透射测量。吸
27、光度：用于标准曲线法或绝对吸收法定量分析，在作动力学测试时可使用。浓度因子：用于在浓度因子法浓度直读时设定浓度因子。浓度直读：用于标样法浓度直读时，作设定和读出。注：各标尺的转换用 MODE 键并由各自指示灯指示。注意事项：91）操作应轻缓，不要将样品溶液弄到仪器上2）不要用手拿比色皿的光面3）比色皿用毕应及时清洗干净4. METLER DELTA 320 pH 计使用方法：1）打开电源开关，进入测量状态。2）校正：长按“模式”键，进入“Prog”状态，按“模式”进入 b2，按 或选择 b 1 或 b3，LCD 会逐一显示盖缓冲溶液组内的缓冲溶液 pH 值，按“模式”确认，按“读数退回正常测量
28、状态。3）将电极放在一个标准缓冲液中并按“校正” ，仪表将显示相应缓冲液 pH。4）用去离子水冲洗电极，将电极放入下一个标准缓冲液中，重复 3，进行两点或三点校准，仪器更新零点和斜率，标定完成，按“读数”退回测量状态。5）用蒸馏水清洗电极头部，用被测溶液再洗一次，把电极浸入被测溶液中，再用玻璃棒搅拌，使溶液均匀，按“读数”键测量，仪器稳定后显示 A，在显示屏上读数即溶液的pH 值。6）测量结束，及时将电极保护套套上。注意事项：1）一般情况下，24h 内仪器不需再标定。2）电极保护套内及时补加 3M KCl，切忌浸泡在蒸馏水中，防止干涸。3）仪器 pH 测量范围为 014.00，温度范围为-5-
29、105，精确度 0.01pH、1mV。4）如果斜率下降、响应速度慢或电极膜干涸，将电极头浸入 0.1MHCl 中过夜。5. Sigma SK30 低温高速冷冻离心机操作方法：操作步骤：1）装好所需转子：本实验室 Sigma 离心机配有两个型号的转子： 12150H ，容量6140g,最高转速 21000 转/min；12154H ，容量 245g,最高转速 26000 转/min，离心中，一定要注意，转子和转头要同一型号。用专用扳手拧紧转轴螺母，盖好同型号转子的盖子，拧紧。2) 设置参数：打开机身背侧电源开关，机身前面面板有数字显示，转动调节旋钮，可在面板上“DREHZAHL ”（离心速度，
30、rpm） 、 “RZB”（相对离心力，g） “ZEIT”（离心时间） 、 “TEMP”（离心温度） 、 “ROTOR”（转子选择）等显示栏之间选择，选择需设定参数，按下调节旋钮， “SET”同时被选择，转动调节旋钮，设定温度、离心速度、时间、转子型号等参数，盖好离心机盖门，等待降温。3）离心：温度达到所需温度后，打开离心机盖门，拧开盖子，放入已经平衡过的离心样品，拧紧盖子，关闭离心机盖门，启动按钮和开盖按钮亮。按下启动按钮，开始离心。4）等离心机完全停下，开盖指示灯亮后，打开离心机，取出样品，盖好盖子，关闭离心机。如果在离心过程中，发现有异常情况，立即按下“停止” 按钮，如不能完全停止，可关闭
31、电源，等待离心机完全停止。注意事项：1、本设备最大离心力可达 60000 g 以上，离心转速范围 100 30000 rpm（依据转头型号确定） ，设置不能超过最大转速，设定步长 1 rpm，温度范围 -20-+40，最大功率1300W。2、离心前，一定要平衡，对称放置，离心期间，不得离人。10实验二 氨基酸纸层析法一、实验目的学习纸层析法的基本原理和方法二、实验原理氨基酸混合液经纸层析,由于不同的氨基酸有不同的分配系数,移动速度不同,从而达到分离。经显色后,与标准氨基酸图谱比较或与氨基酸的标准 Rf 值比较,可辨别各种氨基酸。三、实验仪器（器材）层析缸、分液漏斗、吹风机、毛细管。四、实验试剂
32、和材料试剂：扩展剂：正丁醇:88甲酸 :水15:3:2（体积比）0.2茚三酮正丁醇显色液：几种氨基酸标准溶液（0.5）氨基酸混合液材料：新华滤纸五、实验流程画线（下沿 1.5cm） 标记样点（1.5cm 一个）配制扩展剂取样 点样练习（选好毛细管）点样卷纸筒 取扩展剂（放于培养皿） 放滤纸于层析缸 ,盖好扩展（3 小时）配染色剂 取滤纸 剪纸、吹干染色 吹干量各样品移动距离结果分析。六、主要实验环节1、扩展剂的配制及层析缸饱和：将配好的溶液倒入分液漏斗,等分层后,放掉下部水层,再把展开剂放入培养皿,使液面达培养皿高度的一半,把它放入层析缸进行饱和。2、记号：取层析纸一张（1224CM）。在纸的
33、一端距边缘 2 厘米处用铅笔划一条直线,在此直线上每间隔 1.5 厘米作一记号,共 6 个记号。3、点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在这六个位置上, 干后再点一次。每点在纸上的扩散直径最大不超过 3 毫米。4、扩展：用线将滤纸缝成筒状,纸张两边不能接触,不能用手触碰滤纸中部。将盛有扩展剂的培养皿迅速的置于密封的层析缸中,并将滤纸直立于培养皿中（点样的一端在下,扩展剂的液面需低于点样线）到溶剂上升 15-20 厘米时即取出滤纸,用铅笔描绘出溶剂前沿线,自然干燥或用吹风机热风吹干。5、显色：用喷雾器均匀的喷上 0.2%的茚三酮正丁醇溶液；然后置于烘干箱烘干 5 分钟就可显现出各个层析斑点七、结果
34、及分析绘出氨基酸层析图,标明混合样各成分的名称,计算各个氨基酸的迁移率,并分析说明。 八、注意事项（1）点样要适量,不宜太多,样点直径不超过 0.3 厘米。（2）点样毛细管,一样一支,不要重复使用。九、思考题为什么扩展剂要用两种溶剂系统？实验三 蛋白质的沉淀反应一、实验目的：熟悉和掌握蛋白质沉淀的相关原理。11二、实验原理：多数蛋白质是亲水胶体，当其稳定因素被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后，即产生沉淀。蛋白质盐析作用：向蛋白质溶液中加入中性盐至一定浓度，蛋白质即沉淀析出，这种作用称为盐析。乙醇沉淀蛋白质：乙醇为脱水剂，能破坏蛋白质质点的水化层使其沉淀出来。重金属盐沉淀蛋白质：蛋白质与重金属
35、离子结合成不溶性盐类而沉淀。三、实验仪器及用品实验器材：试管、吸管、吸滤瓶、布式漏斗。试剂：蛋白质试液、硫酸铵结晶体、饱和硫酸铵溶液、95%乙醇、结晶氯化钠、1% 醋酸铅、5%鞣酸溶液、1%硫酸铜溶液、饱和苦味酸溶液、1%醋酸溶液。四、实验内容及步骤一）蛋白质盐析作用1.取蛋白质溶液 5ml，加入等量饱和硫酸铵溶液，微微摇动试管，使溶液混合静置几分钟，球蛋白即析出。2. 将上述混合液过滤，滤液中加硫酸铵粉末，至不再溶解，析出的即为清蛋白。再加水稀释，观察是否溶解。二）乙醇沉淀蛋白质取蛋白质溶液 1ml，加晶体 NaCl 少许，待溶解后再加入 95%乙醇 2ml 混匀。观察有无沉淀析出。三）重金
36、属盐沉淀蛋白质取试管 2 支各加蛋白质 2ml，一管内滴加 1%醋酸铅溶液，另一管内滴加 1%CuSO4 溶液，至有沉淀生成。四）生物碱试剂沉淀蛋白质取 2 支试管各加 2ml 蛋白质溶液及 1%醋酸溶液 4-5 滴，向一管中加 5%鞣酸溶液数滴，另一管内加饱和苦味酸溶液数滴，观察结果了。五）验现象观察及记录仔细观察实验现象变化，并记录。实验四 血清丙氨酸氨基转移酶测定一、实验目的掌握酶活性的测定原理和方法二、实验原理ALT（血清丙氨酸氨基转移酶）在适宜的温度及 pH 条件下作用于丙氨酸及 -酮戊二酸组成的基质,生成丙氨酸及谷氨酸,反应至所规定的时间后加入 2,4-二硝基苯肼- 盐酸溶液终止反
37、应,同时 2,4-二硝基苯肼与丙酮酸的羰基加成 ,生成丙酮酸苯腙。苯腙在碱性条件下呈红棕色,根据颜色深浅确定酶的活力强弱。三、实验仪器（器材）722 分光光度计、试管、移液管、恒温水浴四、实验试剂和材料试剂：0.1mol/L 的磷酸盐缓冲液：将 0.1mol/L 磷酸氢二钠溶液 420ml,0.1mol/L 磷酸二氢钾 80ml,混匀,即为 PH7.4、0.1mol 磷酸盐缓冲液,加氯仿数滴,4保存。12ALT 底物液：称 DL-丙氨酸 1.79g,-酮戊二酸 29.2mg,加磷酸盐缓冲液（PH7.4）约50ml 煮沸溶解后,待冷,用 1mol/L NaOH 调整 PH7.4（约加 0.5ml
38、）,缓冲液加到 100ml,加氯仿数滴, 4保存。该溶液可稳定 2 周。2,4-二硝基苯肼溶液：称取,-二硝基苯肼 19.8mg,溶于 10mol/L 盐酸 10ml 中,完全溶解后蒸馏水至 100ml,置棕色瓶中,室温保存,若有结晶析出,应重新配置。0.4mol/L 的氢氧化钠溶液丙酮酸标准溶液：精确称取纯丙酮酸钠 22.0mg 于 100ml 容量瓶中,加 0.1mol/L 磷酸盐缓冲溶液至刻度.此溶液需在临用前配制。材料：动物血清五、实验步骤器皿洗涤 取试剂 标准曲线制作 ALT 活力测定1、标准曲线制定试管号 1 2 3 4 5丙酮酸钠（ml） 0 0.05 0.10 0.15 0.2
39、0ALT 底物（ml） 0.5 0.45 0.40 0.35 0.30磷酸盐缓冲液（ml） 0.1相当 ALT 活力单位 0 28 57 97 15037水浴（min） 52,4-二硝基苯肼（ml） 0.537水浴（min） 200.4mol/L NaOH（ml） 5722S 测定（505nm）混匀，放置 5min，在波长 505nm 处，以蒸馏水调零，读取各管吸光度，各管吸光度均减“1”号管吸光度为该标准管的吸光度值。以吸光度值为纵坐标，对应的酶活性单位为横坐标，各标准管代表的活性单位与吸光度值作图，即成标准曲线。2、血清 ALT 测定样 样 样 对照血清 0.1 0.1 0.1 0.1AL
40、T 底物 0.5 0.5 0.5 037水浴（min） 30 30 30 302,4-二硝基苯肼（ml） 0.5 0.5 0.5 0.5ALT 底物（ml） 0 0 0 0.537水浴（min） 20 20 20 200.4mol/L NaOH（ml） 5 5 5 5722S 测定（505nm）室温放置 5min，在波长 505nm 处以蒸馏水调零，读取各管吸光度。测定管吸光度减去样本对照管吸光度的差值为标本的吸光度。该值在校正曲线上查得 ALT活力。六、结果及分析从标准曲线查找血清吸光值对应的 ALT 活力,分析影响标准曲线的质量高低及样品活力大小的原因。七、注意事项1丙酮酸标准液的配制 丙
41、酮酸不稳定，见空气易发生聚合反应，生成多聚丙酮酸，13而失去其化学性质。在配制校正曲线时，不会出现显色反应。此时应将变性的丙酮酸放在干燥箱（4055）23h，或干燥器中过夜后再使用。2基质液中的 -酮戊二酸和显色剂 2，4-二硝基苯肼均为呈色物质，称量必须很准确。各试剂加量必须准确。3当血清标本酶活力超过 150 时，应将血清用 0.145mol/L NaCl 溶液稀释后重测，其结果乘以稀释倍数。4加入 2，4-二硝基苯肼溶液后，应充分混匀，使反应完全。加入 NaOH 溶液时要缓慢并且边加边摇匀，如液体混合不完全或 NaOH 溶液的加入速度不同， 则 -酮戊二酸引起的发色增强，导致吸光度读数的
42、差异。呈色的深浅与 NaOH 的浓度也有关系，NaOH 浓度越大呈色越深。NaOH 溶液0.25mol/L 时，吸光度下降变陡，因此 NaOH 浓度要准确。备注：酶活力定义为： 1ml 血清与基质液在 37，保温 30 分钟，生成 2.5ug 丙酮酸为一个活力单位。八、思考题影响血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）活力测定的因素有哪些？实验五 维生素 C 的定量测定一、实验目的掌握 2，6-二氯酚靛酚法测定维生素 C 含量的原理和方法熟悉、掌握微量滴定法的基本操作技术。二、实验原理测定维生素 C（抗坏血酸）的化学方法，一般是根据它的还原性。本实验即是利用维生素 C 的这一性质，使其与 2，6-二氯酚
43、靛酚作用。2，6- 二氯酚靛酚钠盐的水溶液呈蓝色，在酸性环境中为玫瑰色，当其被还原时，则脱色。根据上述反应，利用 2，6-二氯酚靛酚在酸性环境中滴定含有维生素 C 的样品溶液。开始时，样品液中的维生素 C 立即将滴入的 2，6-二氯酚靛酚还原脱色，当样品液中维生素 C 全部氧化时，再滴入的 2，6-二氯酚靛酚就不再被还原脱色而呈玫瑰色。故当样品液用 2，6- 二氯酚靛酚标准液滴定时，溶液出现浅玫瑰色时表明样品液中的维生素 C 全部被氧化，达到了测定终点。此时，记录滴定所消耗的 2，6- 二氯酚靛酚标准液量，按下述公式计算出样品液中还原型维生素 C 的含量。计算公式：维生素 C 毫克数/100g
44、 样品= 10WSVBA式中 VA：滴定样品提取液所用的 2，6-二氯酚靛酚的平均毫升数；VB：滴定空白对照所用的 2，6-二氯酚靛酚的平均毫升数；S：1mL 2，6-二氯酚靛酚溶液相当于维生素 C 的毫克数；W：10mL 样品提取液中含样品的克数。三、实验仪器（器材）研钵、容量瓶、锥形瓶、微量滴定管、天平等。四、实验试剂和材料试剂：10盐酸溶液偏磷酸-醋酸溶液：称取偏磷酸 15g，溶于40mL 冰醋酸和450mL蒸馏水所配成的混合14液中。过滤。贮于冰箱内，此液保存不得超过10天。2，6-二氯酚靛酚溶液：称取 9.21g 碳酸氢钠，026g2，6二氯酚靛酚溶于 250mL蒸馏水中，稀释至 1
45、000mL。过滤，装入棕色瓶内，置冰箱内保存，不得超过 3 天。使用前用新配制的标准抗坏血酸溶液标定。取 5mL 标准抗坏血酸镕液加入 5ml 偏磷醋酸溶液， 然后用 2，6二氯酚靛酚溶液滴定，以生成为微玫瑰红色持续 15 秒钟不退为终点。计算2，6二氯酚靛酚溶液的浓度，以每 mL 2，6二氯酚靛酚溶液相当于抗坏血酸的 mg 数来表示。标准抗坏血酸（Vc）溶液：准确称取纯抗坏血酸结晶 50mg 溶于偏磷酸-醋酸溶液，定容到 250mL。装入棕色瓶，贮于冰箱内。酸化蒸馏水：每 10mL 蒸馏水加入 10%HCl 1 滴。材料：绿豆芽五、实验步骤1、制备含维生素C的样品提取液。称取30g绿豆芽置研
46、钵中研磨，放置片刻(约10分钟) ，用 2层纱布过滤，将滤液(如混浊可离心) 滤入50mL容量瓶中,用酸化的蒸馏水定容，混匀，备用。2、量取样品提取液10mL于锥形瓶中,以2，6二氯酚靛酚溶液滴定样品提取液，呈微弱的玫瑰色，持续5秒钟不退为终点，记录所用2，6二氯酚靛酚的mL数。整个滴定过程不要超过2分钟。另取10ml用10盐酸酸化的蒸馏水做空白对照滴定（滴定时用微量移液器滴定）。样品提取液和空白对照各做三份。计算结果。六、结果及分析按上述公式计算各样品中 Vc 含量七、注意事项(1) 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过 2min。滴定所用的染料不应小于 1ml
47、或多于 4ml，如果样品含维生素 C 太高或太低时，可酌情增减样液用量或改变提取液稀释度。(2) 本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢。(3) 滴定时每次均应从 0 刻度开始，减少误差。(4) 样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶直至呈粉红色，于 15s 内不消退为终点。 。八、思考题为了测得准确的维生素 C 含量，实验过程中都应注意哪些操作步骤？为什么？实验六 血清总胆固醇的测定（邻苯二甲醛法）一、实验目的掌握邻苯二甲醛法测定血清总胆固醇的原理和方法二、实验原理胆固
48、醇是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成，而且也是细胞的必要结构成分，还可以转化成胆汁酸盐、肾上腺皮质激素和维生素 D 等。胆固醇在体内以游离胆固醇及胆固醇酯两种形式存在，统称总胆固醇。总胆固醇的测定有化学比色法和酶学方法两类。本实验采用前一种方法。胆固醇及其酯在硫酸作用下与邻苯二甲醛产生紫红色物质，此物质在 550nm 波长处有15最大吸收，可用比色法作总胆固醇的定量测定。胆固醇含量在 400mg/100ml 内，与 OD 值呈良好线性关系。本法不必离心，颜色产物也比较稳定，胆红素及一般溶血对结果影响不大，严重溶血者才使结果偏高。本法在 2037条件下显色，显色后 5 分钟开始至半
49、小时以上颜色基本稳定。温度过低，显色剂强度减弱；加混合酸后振摇过激能使产热过高，也可使显色减弱。三、实验仪器（器材）722 可见分光光度计、试管、移液枪等。四、实验试剂和材料试剂：邻苯二甲醛试剂：称取邻苯二甲醛 50mg，以无水乙醇溶至 50ml 冷藏，有效期为一个半月。醋酸（90）：取冰醋酸 90ml 加入 10ml 蒸馏水中。混合酸：90醋酸 100ml 与浓硫酸 100ml 混合。标准胆固醇贮液（1mg/ml）：准确称取胆固醇 100mg，以冰乙酸溶至 100ml。标准胆固醇应用液（0.1mg/ml）：将上述贮存液以冰乙酸稀释 10 倍: 即取 10ml 用冰乙酸稀释至 100ml。材料：动物血清五、实验步骤1、制作标准曲线取 5 支试管编号后，按下表顺序加入试剂，加毕，温和混匀，2037下静置 10 分钟，于 550nm 下比色测定，以总胆固醇量（mg%）为横坐标，OD 值为纵坐标做出标准曲线。管号 1 2 3 4 5标准胆固醇应用液(ml)
