琼脂糖电泳技术,2005.4 扬州,琼脂糖电泳的用途,判断扩增片断的大小 回收扩增片断 用于转印进行Southern印迹,问题 如何获得清晰的琼脂糖电泳照片呢？,琼脂糖电泳结果的影响因素,凝胶 电泳液 电压 检测手段,琼脂糖凝胶浓度的选择,1、核酸分子大小与琼脂糖浓度的关系 在凝胶中，DNA片段迁移距离（迁移率）与碱基对的对数成反比。 2、琼脂糖凝胶电泳分离DNA时，分子大小不宜超过20kb 。 3、不同大小的DNA需要用不同浓度的琼脂糖凝胶进行电泳分离。 琼脂糖浓度与DNA分离范围琼脂糖浓度 /% 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 线状DNA大小/kb 60-5 20-1 10-0.8 7-0.5 6-0.4 4-0.2 3-0.1,电泳缓冲液,DNA的泳动受到电泳缓冲液和离子浓度的影响。缺乏离子，电导率严重降低，电泳迁移率很慢；离子强度过高，电导率升高，极易产生大量的热能，最严重的结果是凝胶熔化，DNA变性 常用的电泳缓冲液有TAE，TPE和TBE,其中TAE的缓冲容量最低，长时间电泳将被消耗。,
