血清的制备与保存.doc

1、1、 血清：全血标本请于室温放置 2 小时或 4 过夜后于 1000 g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20 或-80 保存，但应避免反复冻融。2、 血浆：可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后 30 分钟内于 1000 g 离心 15 分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20 或-80 保存，但应避免反复冻融。3、 组织匀浆：将动物的组织标本先用 PBS 洗涤，去除多余血液，匀浆化后放在 510 ml PBS 中于-20放置过夜，第二天，经过二次反复冻融破膜，将匀浆物 5000x g 离心 5 分钟，取上清即可检测。4、 其它生物标本：请 1000 g 离心 20 分

2、钟，取上清即可检测，或将上清置于-20 或-80 保 存，但应避免反复冻融。来源：阿仪网() http:/ 2010-1-11 15:06:55 编 辑： hbscf123 字体：大中 小 我要投稿血 液 标 本 采 取 后 应 尽 可 能 早 地 自 然 地 使 血 清 （ 浆 ） 从 与 血 细 胞 接 触 的 全 血中 分 离 出 来 。 一 般 应 于 采 血 后 2h 内 分 离 出 血 清 或 血 浆 。 全 血 处 理 为 血 清 或血 浆 分 为 离 心 前 、 离 心 中 和 离 心 后 三 个 阶 段 ， 对 各 不 同 阶 段 均 有 具 体 要 求 。（ 一 ） 离 心

3、 前 阶 段即 指 标 本 采 集 到 离 心 处 理 前 的 一 段 时 间 。1.血 清 ： 标 本 离 心 前 一 般 应 令 其 自 行 凝 集 ， 不 可 用 木 棍 等 剥 离 凝 血 块 。 通常 于 室 温 （ 22 25 ） 放 置 30 60 min 血 标 本 可 自 发 完 全 凝 集 ； 冷 藏 标 本凝 集 缓 慢 ； 加 促 凝 剂 时 凝 集 加 快 （ 标 本 采 集 后 应 轻 轻 颠 倒 混 合 5 10 次 ，以 确 保 促 凝 剂 作 用 ） 。2.血 浆 ： 需 用 血 浆 标 本 时 ， 必 须 使 用 含 抗 凝 剂 的 血 液 标 本 收 集

4、管 ， 而 且 采血 后 必 须 立 即 轻 轻 颠 倒 采 血 管 混 合 5 10 次 （ 以 确 保 抗 凝 剂 发 挥 作 用 ） 医 .学教 .育 网 搜 .集 整 理 ， 5 10 min 后 即 可 分 离 出 血 浆 。3.冷 藏 标 本 ： 标 本 冷 藏 可 抑 制 细 胞 代 谢 ， 稳 定 某 些 温 度 依 赖 性 成 分 但 全 血 标 本 一 般 不 能 冷 藏 ； 血 钾 测 定 标 本 冷 藏 不 得 超 过 2h. 血 液 中 儿 茶 酚胺 、 pH 血 气 、 氨 、 乳 酸 、 丙 酮 酸 、 胃 泌 素 、 甲 状 腺 激 素 等 检 测 时 需 用

5、制 冷的 标 本 。标 本 需 要 冷 藏 （ 2 8 ） 时 ， 标 本 采 取 后 应 立 即 将 标 本 置 于 冰 屑 或 冰 水混 合 物 （ 不 可 用 大 冰 块 ） ， 并 且 必 须 保 证 标 本 与 制 冷 物 充 分 接 触 ， 保 证 制 冷 物达 到 标 本 的 高 度 。4.代 谢 抑 制 剂 和 防 腐 剂 ： 某 些 添 加 剂 加 入 血 液 标 本 中 能 抑 制 细 胞 代 谢 ， 可以 防 止 血 液 标 本 贮 存 时 分 析 物 浓 度 的 变 化 。 血 液 葡 萄 糖 测 定 时 ， 如 在 血 液 中 加入 氟 化 钠 ， 在 血 细 胞 未

6、 分 离 的 情 况 下 ， 葡 萄 糖 在 22 25 时 可 稳 定24h， 2 8 时 可 以 稳 定 48h； 但 在 新 生 儿 和 儿 童 标 本 ， 由 于 红 细 胞 压 积 高 ，用 氟 化 钠 难 以 控 制 细 胞 的 糖 酵 解 作 用 ； 甲 醛 草 酸 钾 抗 凝 保 存 剂 不 适 合 血 糖 测定 ； 氟 化 钠 麝 香 草 酚 混 合 剂 因 能 抑 制 酶 活 性 ， 不 适 用 于 酶 学 测 定 。5.标 本 采 集 现 场 ： （ 1） 标 本 采 集 后 应 尽 快 送 往 实 验 室 ， 尤 其 当 收 集 区 温度 超 过 22 时 此 点 更

7、为 重 要 ； （ 2） 血 液 标 本 采 集 后 血 管 必 须 加 塞 、 管 口 向上 、 垂 直 放 置 ， 以 减 少 管 中 内 容 物 振 动 ， 促 进 凝 血 完 全 ， 防 止 标 本 蒸 发 、 污 染和 外 溅 等 ； （ 3） 已 收 集 的 血 液 标 本 应 温 和 地 处 理 ， 要 防 止 标 本 管 振 荡 所 造 成的 溶 血 ； 溶 血 可 影 响 测 定 结 果 。 有 严 重 影 响 （ 使 结 果 升 高 ） 的 项 目 有 ： 乳 酸 脱氢 酶 、 血 清 门 冬 氨 酸 氨 基 转 移 酶 、 血 清 钾 和 血 红 蛋 白 ； 引 起 值

8、得 注 意 的 影 响 的项 目 有 ： 血 清 铁 （ ） 、 血 清 丙 氨 酸 氨 基 转 移 酶 （ ） 和 血 清 甲 状 腺 素（ ） ； 轻 度 受 影 响 （ 增 加 ） 的 有 ： 总 蛋 白 、 白 蛋 白 、 血 清 磷 、 血 清 镁 、 血清 钙 和 酸 性 磷 酸 酶 ； （ 4） 应 避 免 对 光 线 敏 感 的 分 析 物 暴 露 在 人 造 光 或 太阳 光 （ 紫 外 线 ） 照 射 下 。 如 VA 、 VB6 、 胡 萝 卜 素 、 卟 啉 、 胆 红 素 等测 定 时 ， 标 本 管 应 该 用 铝 箔 或 类 似 物 质 包 裹 保 护 起 来 。

9、6.标 本 运 送 ： 全 血 标 本 应 尽 快 从 采 血 现 场 运 送 至 实 验 室 ， 如 果 运 送 距 离 较远 ， 特 别 是 因 分 析 物 稳 定 性 有 影 响 ， 必 要 时 可 于 采 血 现 场 分 离 出 血 清 或 血 浆 后 ，再 送 往 实 验 室 ； 标 本 运 送 过 程 中 要 注 意 标 本 的 包 装 、 温 度 要 求 、 处 理 方 法 等 ，要 确 保 分 析 成 分 的 稳 定 性 ； 标 本 管 在 运 送 过 程 中 要 保 持 管 口 封 闭 、 向 上 垂 直 放置 。7. 实 验 室 接 受 标 本 及 离 心 标 本 准 备

10、： （ 1） 要 有 标 本 收 取 记 录 （ 应 认 真核 对 检 验 中 清 单 ， 对 有 关 情 况 要 认 真 记 录 ， 标 本 接 收 及 处 理 应 签 字 登 记 ） ； （ 2） 对 接 受 的 标 本 要 予 以 分 类 准 备 离 心 ； （ 3） 实 验 室 接 受 标 本 后 应 仍 保 持标 本 管 于 密 闭 封 口 、 管 口 向 上 ， 垂 直 位 放 置 。 管 塞 移 去 后 血 中 CO2 丢 失 ，会 造 成 pH 增 加 ， 离 子 钙 和 酸 性 磷 酸 酶 减 少 ， 尤 其 pH 变 化 会 影 响 某 些 检测 结 果 的 准 确 性 ；

11、 （ 4） 标 本 凝 集 时 间 要 充 分 ； 加 抗 凝 剂 的 血 液 标 本 可 以 立即 离 心 ； 加 促 凝 剂 的 标 本 可 于 采 血 后 5 15 min 尽 早 离 心 ； 抗 凝 的 全 血 标本 （ 锌 、 锂 、 原 卟 啉 等 测 定 时 ） 可 以 不 离 心 ； （ 5） 冷 藏 （ 2 8 ） 标 本 应保 持 这 个 温 度 直 到 准 备 离 心 。 推 荐 用 温 度 控 制 离 心 机 ； （ 6） 离 心 标 本 前不 主 张 用 小 木 棒 或 类 似 器 材 去 剥 离 附 着 于 试 管 壁 和 管 塞 上 的 凝 块 ， 人 为 剥 离

12、 会诱 导 溶 血 。 如 果 必 须 露 出 试 管 壁 或 取 下 管 塞 时 ， 一 定 要 十 分 注 意 ， 动 作 一 定 要轻 柔 。（ 二 ） 离 心 阶 段即 指 标 本 处 于 离 心 机 里 的 一 段 时 间 。1. 离 心 时 间 和 相 对 离 心 力 （ RCF） ： 临 床 化 学 分 析 血 液 标 本 离 心 时 ，RCF（ 1000 1200） ， 离 心 时 间 为 5 10 min.2. 温 度 控 制 离 心 ： 离 心 时 产 热 不 利 于 分 析 物 稳 定 ， 临 床 化 学 分 析 血 液标 本 离 心 时 必 须 采 用 温 度 控 制

13、离 心 机 。 一 些 温 度 依 赖 性 分 析 物 （ 如 促 肾上 腺 皮 质 激 素 、 环 腺 苷 酸 、 儿 茶 酚 胺 等 ） 应 在 4 分 离 ； 无 特 殊 温 度 要求 的 分 析 物 ， 离 心 温 度 应 设 定 在 20 22 ； 温 度 低 于 15 可 以 人 为 地使 血 钾 测 定 值 增 高 ； 冷 藏 运 送 的 标 本 必 须 在 要 求 的 温 度 下 离 心 。3.关 于 再 离 心 ： 标 本 离 心 最 好 一 次 完 成 ， 若 需 再 次 离 心 ， 应 距 上 次 离心 相 隔 时 间 很 短 ； 对 于 含 有 分 离 物 质 的 血

14、标 本 绝 不 可 以 再 离 心 。（ 三 ） 离 心 后 阶 段指 标 本 离 心 后 和 用 于 检 测 的 血 清 或 血 浆 被 取 出 一 定 量 之 前 的 一 段 时 间 。1. 血 清 或 血 浆 与 接 触 的 血 细 胞 和 凝 块 的 分 离 应 在 采 血 后 尽 快 （ 2h 内 ）完 成 。2. 分 离 的 血 清 或 血 浆 的 贮 存 ： 实 验 室 的 室 温 和 血 清 或 血 浆 的 贮 存 温 度 、时 间 ， 是 分 析 物 稳 定 性 和 测 定 结 果 准 确 性 的 重 要 参 数 。 （ 1） 于22 25 血 清 或 血 浆 的 保 存 不

15、 超 过 8h； 医 .学 教 育 网 整 理 （ 2） 实 验 于8h 内 不 能 完 成 时 ， 血 清 或 血 浆 应 置 2 8 保 存 ； （ 3） 48h 内 不 能 完 成的 实 验 项 目 ， 或 分 离 的 血 清 或 血 浆 需 贮 存 48h 以 上 时 ， 应 于 -20 保 存 ； （ 4） 标 本 不 可 反 复 冻 融 （ 只 能 冻 融 一 次 ） ， 且 不 可 贮 存 于 无 霜 冰 箱 （ 可 造成 样 品 温 度 变 化 ） ； （ 5） 离 心 后 分 离 凝 胶 （ 凝 胶 屏 障 ） 上 面 的 血 清 可 保 存2 5 天 （ 亦 有 报 道 4 可 贮 存 24h） ， 但 必 须 保 证 凝 胶 的 完 整 性 ； 但 应 用非 凝 胶 分 离 物 质 时 ， 离 心 后 必 须 立 即 将 血 清 或 血 浆 移 出 。 （ 6） 血 清 或 血 浆必 须 保 存 于 密 闭 的 试 管 中 。