1、1.2.5 果实组织结构的细胞学观察按常规石蜡切片法制片( 李正理 1978)，略作修改，具体步骤如下：（1）材料的选取 将新鲜果实用锋利的水果刀沿果实赤道面横切，在横切面中部取托杯组织，切成 1.0 cm（长）0.5 cm（宽）0.5 cm（深）大小（图2-1） 。图 2-1 梨果实横切面及试验取样点示意图Fig. 2-1 The diagram of the pear fruit transverse section and experimental sampling site（2）固定 用（FAA）固定，花后 85 d 前的材料用 70%酒精配制 FAA 液，花后 85 d 后的材料用
2、50%酒精配制 FAA 液。FAA 固定剂的配方见附录。（3）浸洗 将固定后的材料，用 70%酒精浸洗，洗去固定液后，每隔0.51 h 换浸洗液 1 次，需 23 次。（4）脱水 经不同浓度梯度的酒精（65%75%85%95%100%100%）进行逐级脱水，65%95%各浓度梯度脱水 2 h，在 100%乙醇中进行脱水时分 2 次进行，第 1 次 40 min，第 2 次20 min。（5）透明 将材料进行逐级透明处理，3/4 无水酒精和 1/4 二甲苯混合液1/2 无水酒精和 1/2 二甲苯混合液1/4 无水酒精和 3/4 二甲苯混合液纯二甲苯纯二甲苯。各级处理时间为 0.51 h。（6）浸
3、蜡 将材料先放入低熔点的切片石蜡（5254）中，在 30下浸蜡 24 h；然后将其放入由蜂蜡（熔点为 5860）和低熔点混合切片石蜡（质量比为 1：9）中，60 保温浸蜡，每 3 h 换 1 次混合石蜡，浸蜡时间为 6 h。（7）包埋 浸蜡结束后，立即用镊子转移至装有液态混合石蜡（与浸蜡中的混合石蜡相同）的小纸盒中，并迅速冷却，以备切片使用。（8）切片 根据材料在蜡块中的位置和方向，修整蜡块使其成梯形，然后粘到旋转式手摇切片机的蜡台上进行切片。切片厚度 10 m。（9）展片及粘片 在洁净的载玻片上均匀涂上少许蛋白甘油（鸡蛋清和甘油按 1：1 的体积比用搅拌器搅拌均匀制成） ，将蜡带小心地放在
4、4550的水面上，待蜡带展平后捞起，放入 35温箱中烘干。（10）脱蜡和染色 二甲苯脱蜡后采用番红固绿对染法染色。具体步骤如下：将玻片标本插入有二甲苯的染色缸中，脱蜡 1015 min，再经 1/2 二甲苯+1/2 无水乙醇无水乙醇 95%乙醇85% 乙醇70%乙醇50%乙醇30%乙醇，最后降到蒸馏水中待染，以上步骤每级 23min；番红染液（24 h）65%乙醇75%乙醇 85% 乙醇 固绿染液（0.51 min）95%乙醇无水乙醇无水乙醇1/2 二甲苯+1/2 无水乙醇纯二甲苯纯二甲苯。（11）封片、干燥和贴标签 用清洁软布擦去切片材料四周多余的二甲苯，滴上中性树胶，盖上玻片，树胶用量要适当，正好充满玻片下面，避免气泡。在载玻片的一端贴上标签，注明材料名称、制片时间等，最后将制成后的玻片置于切片盒中保存待观察。（12）观察 在 OLYMPUS BH-50 型显微镜上进行观察并拍照，每个处理做 3 张切片，每张切片观察 20 个视野。
