1、1“传统发酵技术的应用”知识归纳及试题例析一、知识归纳1、几种常用发酵菌种的比较菌种项目 酵母菌 醋酸菌 毛霉 乳酸菌生物学分类 真核生物 原核生物 真核生物 原核生物代谢类型 异养兼性厌氧 异养需氧 异养需氧 异养厌氧繁殖方式 适宜条件下出芽生殖 二分裂生殖 孢子生殖 二分裂生殖生产应用 酿酒 酿醋 制作腐乳 制作泡菜发酵条件 前期需氧，后期不需氧 一直需氧 一直需氧 不需氧2、果酒、果醋、腐乳、泡菜制作中所用菌种及控制条件的比较制作内容比较项目 果酒 果醋 腐乳 泡菜所用菌种、结构特点 酵母菌 真核 醋酸菌 原核 主要毛霉 真核 乳酸菌 原核代谢方式（同化、异化） 异养兼性厌氧 异养 有氧
2、 异养 有氧 异养 厌氧O2 的有无 有氧、无氧 有氧 有氧 无氧最适温度 1825 3035 1518 常温时间控制 1012 天 78 天 腌制 8 天左右 腌制 10 天左右控制条件其他条件 封闭充气口 适时充气 控制盐、酒用量 控制盐水比例相关反应式3、果酒、果醋、腐乳和泡菜制作过程的比较及亚硝酸盐含量的检测比较项目 果酒和果醋制作 腐乳的制作 制作泡菜并检测亚硝酸盐含量制作原理果酒：无氧呼吸果醋：有氧呼吸多种微生物发酵泡菜制作：乳酸菌无氧呼吸亚硝酸盐检测：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与 N1萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料2实验流程图挑选葡萄冲洗榨汁
3、酒精发酵醋酸发酵 果酒 果醋让豆腐上长也毛霉加盐腌制加卤汤装瓶密封腌制操作提示材料的选择与处理；防止发酵液被污染；控制好发酵条件。控制好材料的用量；防止杂菌污染。泡菜坛的选择；腌制的条件；测定亚硝酸盐含量的操作。“微生物的培养与应用”知识归纳及试题1.培养基的分类和应用划分标准 培养基种类 特点 用途液体培养基 不加凝固剂 工业生产固体培养基 加凝固剂，如琼脂 微生物分离、鉴定、活菌计数物理性质 天然培养基 含化学成分不明确的天然物质 工业生产 化学组成合成培养基 培养基成分明确（用化学成分已知的化学物质配成） 分类、鉴定 选择培养基培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所
4、需要的微生物的生长培养、分离出特定微生物目的用途鉴别培养基根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物2、消毒与灭菌的区别比较项目 消毒 灭菌条件 使用较为温和的理化方法 使用强烈的理化因素结果 杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子） 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 适用 实验操作的空间、操作者的衣服和手 微生物的培养器皿、接种用具和培养基等 常用方法煮沸消毒法（如在 100，煮沸 56 min） 、巴氏消毒法（如在 80，煮15 min） ；化学药剂消毒法 酒精、氯气、石炭酸；灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 3紫外线法3、三
5、种常用灭菌方法的比较灭菌方法 灭菌条件 灭菌时间 适用材料或用具灼烧灭菌 酒精灯火焰的充分燃烧层 直至烧红 接种环、接种针或其他金属工具干热灭菌 干热灭菌箱内，160170 12 h 玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等高压蒸汽灭菌 100kPa，121 1530 min 培养基等4、微生物的纯化培养包括培养基的制备和纯化微生物两个阶段，纯化微生物时常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后，就可以得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是菌落。稀释涂布平板法：将菌液进行一
6、系列梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。微生物的培养与观察细菌 真菌 放线菌稀释度 104 105 106 102 103 104 103 104 105温度 30-370C 25-280C 25-280CpH 6.57.5 5.06.0 7.58.55、微生物的分离和计数（1）土壤中分解尿素的细菌的分离与计数筛选菌株：利用选择培养基筛选菌株。测定微生物数量的常用方法：活菌计数法和显微镜直接计数。土壤取样样品的稀释微生物的培养与观察。（2）分解纤维素的微生物的分
7、离实验原理4即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。流程：土壤取样选择培养梯度稀释涂布平板挑选菌落发酵培养。“植物的组织培养技术”知识归纳及试题一、知识归纳1、菊花茎的组织培养与月季的花粉培养的比较比较项目 菊花茎的组织培养 月季的花药培养理论依据 细胞的全能性基本过程 脱分化、再分化、分化影响因素 选材、营养、激素、pH、温度、光照等 选材、营养、激素、pH、温度等 材料 未开花、生长旺盛的嫩枝 初花期、完全未开发花蕾、单核期的花粉pH 5.8 5.8温度 1822 25比较光照 每日光照 12h 开始时不需要光照，幼小植株形成后才光照培养流程植物组织形成愈伤组织长出丛芽生根移栽成活花药
8、中的花粉胚状体 丛芽生根移栽花药中的花粉愈伤组织丛芽生根移栽实验操作 制备培养基外植体消毒接种培养移栽栽培 选材材料消毒接种和培养筛选和诱导移栽栽培选育培养基 要求更严格2、植物激素（生长素和细胞分裂素）对实验结果的影响影响因素 实验结果植物激素的浓度 根据生长素作用的两重性：低浓度促进生长，高浓度抑制生长，甚至杀死植物生长素细胞分裂素 有利于根的分化、抑制芽的形成生长素细胞分裂素 有利于芽的分化、抑制根的形成植物激素用量生长素细胞分裂素 促进愈伤组织的形成使用顺序 先生长素，后细胞分裂 有利于细胞分裂，但细胞不分化5素先细胞分裂素，后生长素细胞既分裂也分化同时使用 分化频率提高3、植物组织培
9、养技术与微生物培养技术的比较比较项目 植物组织培养 微生物培养含义在无菌条件下，将离体的植物体器官或组织接种在适当的培养基上进行培养，最终发育成完整植物体在无菌条件下，在适宜的营养和环境条件下对微生物的培养培养基成分 水、矿质元素、蔗糖、维生素、有机添加物和植物激素等 水、无机盐、碳源、氮源等特殊操作要求严格控制无菌操作，在培养过程中要更换培养基，调节细胞分裂素和生长素的比例严格控制无菌操作，整个培养过程无需更换培养基注：在这两种技术中均需要一定的营养物质，但营养物质的划分标准不同。酶研究及应用、DNA 和蛋白质技术、植物有效成分的提取检测题基础篇（A 卷）一 选择题（每小题只有一个选项符合题
10、意。每小题 2 分，共 20 分）1从几千年前到现在，酶制剂就安全地在被使用在工业、美容和口腔护理产品、纺织品、食品（如酸奶酪）以及芝士、啤酒和白酒等的发酵生产过程中。下列各项中，不属于酶制剂的是（ ）A蛋白酶 B脂肪酶 C淀粉酶 D麦芽糖酶2提取植物芳香油的方法可以根据其原料不同而不同。从柑橘、柠檬等植物原料中提取植物芳香油，通常采用的方法是（ ）A水中蒸馏 B水下蒸馏 C压榨法 D萃取法63固定化酶技术是近几年新兴发展起来的一项酶应用技术，它很好的解决了酶的重新利用的能力，大大提高了酶的利用率，从而避免了酶的浪费问题。下列关于固定化酶技术的说法正确的是( )A固定化酶技术就是固定反应物,将
11、酶依附着载体围绕反应旋转的技术B固定化酶的优势在于能催化一系列的酶促反应C固定化酶中的酶无法重复利用D固定化酶是将酶固定在一定空间内的技术4下表是某种生物活性洗衣粉的成分及用法说明，下列对资料表明的信息理解不正确的是（ ）A这种洗衣粉较易清除衣服上的蛋清污渍B该蛋白酶在 60以上将会失去活性C这种洗衣粉可除去衣料上的各种污渍D这种洗衣粉不能用于洗涤真丝织物5PCR 技术又称聚合酶链式反应，现在已成 为分子生物学实验室的一种常规手段，它可以在体外 很短的时间内将 DNA 大量扩增。你认为下列符合在体外进行 PCR 反应条件的一组是（ ）稳定的缓冲液环境 DNA 模板 合成引物 四种脱氧核苷酸DN
12、A 聚合酶 DNA 解旋酶 限制性核酸内切酶 温控设备A B C D6蛋白质的分离与提纯技术是蛋白质研究的重要技术，下列有关叙述不正确的( )A根据蛋白质分子不能通过半透膜的特性，可将样品中各种不同蛋白质分离B根据蛋白质所带电荷性质的差异及分子大小，可通过电泳分离蛋白质C根据蛋白质相对分子质量的大小，可通过凝胶色谱法分离蛋白质D根据蛋白质的分子大小、密度不同，可通过离心沉降法分离蛋白质7下列有关 PCR 技术的实验过程叙述，不正确的是（ ）A变性过程中破坏的是 DNA 分子内碱基对之间的氢键，也可利用解旋酶实现B复性过程中引物与 DNA 模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的C延伸过程中需要
13、 DNA 聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸DPCR 与细胞内 DNA 复制相比所需酶的最适温度较高8从细胞中提取某种特定的蛋白质比提取 DNA 难度大，其原因不是( )A蛋白质对温度、盐浓度、pH 等条件更敏感，更易失活B蛋白质的空间结构多样，理化性质各不相同，使得蛋白质的提取没有统一的方法C提取某种特定的蛋白质需据其特性摸索提取的程序D提取血红蛋白程序可分为样品处理、粗分离、纯化、纯度的鉴定四大步9生物组织中有机物的提取方法有多种，如电泳、压榨、萃取等，不同的有机物提取方法各不相同。下列有关的说法中不正确的是（ ）A香料工业中“液体黄金”玫瑰油的提取中要求不含有任何添加剂或化学原料，其提取方法
14、主要是水蒸气蒸馏B杏仁油富含矿物质和维生素，主要通过压榨法提取C用萃取法提取胡萝卜素，萃取的效率只受萃取剂的性质和使用量的影响D为了纯化提取的 DNA，往 DNA 滤掖中加入嫩肉粉，其目的是木瓜蛋白酶能够分解7蛋白质10下列是关于血红蛋白的提取和分离实验中关键步骤，其中正确的是（ ）A蛋白质的提取和分离一般可分为粗分离、样品处理、纯化、纯度鉴定等 4 步B蛋白质的提取和分离实验可以以猪、牛、羊、蛙等动物的血液为材料分离血红蛋白C对样品的处理过程分为红细胞的洗涤、血红蛋白的释放、透析和分离血红蛋白等D对蛋白质的纯化和纯度鉴定的方法使用最多的是 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳二 非选择题（30 分）11
15、 （15 分）生物组织中有机物的提取方法有多种，除以上方法外还有电泳、压榨、萃取等，不同的有机物提取方法各不相同。香料工业中“液体黄金”玫瑰油的提取中要求不含有任何添加剂或化学原料，其提取方法主要是_。杏仁油富含矿物质和维生素，是一种质地轻柔、高渗透性的保湿剂，主要通过_法提取。用萃取法提取胡萝卜素，萃取的效率主要取决于_；新鲜的胡萝卜在干燥时，如果温度太高，会导致_。DNA 提取时，为了纯化提取的 DNA，往 DNA 滤液中加入嫩肉粉，目的是_；DNA 鉴定时，可以使用_试剂并在沸水中加热产生蓝色沉淀，工业生产果汁时，常常利用果胶酶破除果肉细胞壁以提高出果汁率。为研究温度对果胶酶活性的影响，
16、某学生设计了如下实验：将果胶酶与苹果泥分装于不同试管，在 10水浴中恒温处理 lOmin(如图 A)。将步骤处理后的果胶酶和苹果泥混合，再次在 10水浴中恒温处理 lOmin(如图 B)。将步骤处理后的混合物过滤，收集滤液，测量汁量(如图 C)。在不同温度条件下重复以上实验步骤，并记录果汁量如下：温度/ 10 20 30 40 50 60 70 80果汁量/ml8 13 15 25 15 12 ll 10根据上述实验，请分析回答下列问题：(1)果胶酶能破除细胞壁，是因为果胶酶可以促进细胞壁中 的水解。(2)实验结果表明，当温度为 时果汁量最多，此时果胶酶的活性 。当温度再升高时，果汁量降低，说
17、明 。(3)实验步骤 的目的是 。812 （15 分）某生物兴趣小组在学习完“蛋白质的提取和分离”后，联系相关实验，准备从猪肝脏研磨液中初步提取过氧化氢酶，设计的“过氧化氢酶提取、分离流程图”如下：试回答下列有关问题：向肝细胞悬液中加入一定量的 pH=70 的缓冲液并充分搅拌，可以破碎肝细胞，破碎细胞的原理是 。与使用蒸馏水相比，使用缓冲液的优点是 。蛋白质粗分离阶段透析的目的是 。电泳利用了待分离样品中各种分子的 等的差异，而产生不同迁移速度，实现各种分子的分离。实验小组以 3%过氧化氢溶液和获得的过氧化氢酶为材料进行温度对酶催化活性影响的探究，得到下图所示的结果，根据实验结果得出“过氧化氢
18、酶能耐受 100高温”的结论。请问这一结论是否可靠？ 为什么？。 能力篇（B 卷）一 选择题（每小题只有一个选项符合题意。每小题 2 分，共 20 分）1四瓶失去标签的无色透明的液体各装有：混有少量纤维素分解菌的清水、丙球蛋白（一种抗体）溶液、溶解有 DNA 分子的 0015mol/L 的 NaCl 溶液、混有少量葡萄糖的生理盐水溶液。依次利用下列哪组物质即可鉴别出来（ ）刚果红培养基 双缩脲试剂 苏丹染液 二苯胺试剂 班氏试剂 斐林试剂 碘液A B C D2对于蒸馏法、萃取法、压榨法来提取芳香油各自的适用范围的叙述正确的一项是( )A蒸馏法适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油B压榨法适
19、用于范围广，要求原料的颗粒要尽可能细小，能充分浸泡在有机溶液中C萃取法适用于提取柑橘、柠檬等易焦糊的原料D玫瑰油、薄荷油、熏衣草油等芳香油主要通过压榨法获得3某同学用实验来探究 pH 值对酶活性的影响。他准备了 5 份含有的等量果胶酶溶液的试管，用 01%的盐酸或氢氧化钠溶液调节至不同的 pH 值，每支试管加五块 01cm 3的正方体苹果块，试管均置于 25室温条件下。下列的说法中，不合理的一项是（ ）A选取 pH 值梯度可以是 5、6、7、8、9B为使实验在更短的时间内完成，可以将温度由 25提高到大约 80C生成果汁量与酶活性强弱的关系是酶活性越大，果胶分解越快，生成的果汁越多D可根据果汁
20、的澄清度来判断最适 pH 值4提取玫瑰精油的实验流程如下图所示。其中有关的说法不正确的是（ ）9A提取的原料鲜玫瑰花和加入清水的比例是 1:4B为了加速油水混合物分层一般需要加入氯化钠, 分离的油层还需加入无水硫酸钠将其除去多余的水分C 步中使用水上蒸馏更简便易行D中需过滤操作，目的是除去固体硫酸钠5下图是应用固定化酵母进行葡萄糖发酵的装置，下列说法中不正确的是 ( ) A为使固定化酵母可以反复使用，实验过程一定要在无菌条件下进行B加入反应液后应保持活塞 1 始终打开，活塞 2 则必须关闭C装置的长导管主要是为了释放 CO2 并防止杂菌进入反应柱 D加入的反应液浓度不能过高以免酵母细胞因失水过
21、多而死亡6 在采用鸡血为材料对 DNA 进行粗提取的实验中，若需进一步提取杂质较少的 DNA，可以依据的原理是（ ）A在物质的量浓度为 014 mol/L 的氯化钠溶液中 DNA 的溶解度最小BDNA 遇二苯胺在沸水浴的条件下会染成蓝色CDNA 不溶于酒精而细胞中的一些物质易溶于酒精D质量浓度为 01g/ml 的柠檬酸钠溶液具有抗凝血作用7镰刀型细胞贫血症是一种基因突变引起的遗传病，患者的红细胞是弯曲的镰刀状。这样的红细胞容易破裂，使人患溶血性贫血，严重时会导致死亡。某科学兴趣小组计划从血红蛋白的成分是否变化来开展研究性学习。下列是该小组成员获得纯度很高的血红蛋白的实验过程，不正确的一项是（
22、）A对红细胞进行洗涤，在加入蒸馏水和甲苯使红细胞破裂释放出血红蛋白后，将混合液静置于一段时间后分层获得血红蛋白溶液B将血红蛋白溶液装入透析袋中透析，可达到粗分离的目的C利用凝胶色谱操作对血红蛋白进行纯化D使用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行纯度鉴定，以获得纯度很高的血红蛋白8从 2001 年初到现在，青岛某实验基地已孕育出上百只转基因克隆羊，它们的体内分别携带包括 干扰素、抗凝血酶素、乙肝表面抗原在内的多种药用蛋白基因。这意味着，它们可以通过产奶的方式源源不断地提供药用蛋白基因，其应用前景非常光明。在其实验研究过程中，经常利用 PCR 技术制取大量的有关药用蛋白基因来供实验用。下列有关 PC
23、R 技术的叙述中，不合理的是（ ）APCR 扩增反应中加人引物的作用是结合在模板 DNA 上，提供 DNA 延伸起始位点BDNA 聚合酶的作用是从引物的 5端开始催化 DNA 链的延伸。CPCR 技术依据是 DNA 的热变性原理10DPCR 的反应过程一般经历三十多个循环，每次循环都包括变性、复性、延伸9右图为提取胡萝卜素的装置示意图，下列有关的叙述中不正确的是（ ）A一般来说，要想萃取效果好，需保证原料颗粒小，萃取温度高，时间长B萃取过程可以直接使用明火加热容易引起燃烧C在加热瓶口安装冷凝回流装置的目的是防止有机溶剂的挥发D提取的胡萝卜素用纸层析法进行鉴定，若出现了和标准样品一样的层析带，说
24、明实验成功10某化工厂最新产生了一种高效加酶洗衣粉，准备投放市场，其包装印有如下部分说明。成分：含最新高效碱性蛋白酶。特点：洗涤奶渍、血渍等的效率是普通洗衣粉的数倍。用法：洗涤前先将衣物浸于含有该洗衣粉的水内数小时，使用温水效果更佳。注意：切勿用于丝质及羊毛衣料。用后彻底清洗双手。该地区质检部门为证明该洗衣粉是否有功效，从化工厂提取部分洗衣粉样品做了如下实验：下列的说法中，不正确的是（ ）A此题中的自变量是洗衣粉溶液是否煮沸过，A 组是对照组B最佳的实验结果是 A 组胶片上的蛋白膜快速消失C胶片上蛋白膜消失的原因是碱性蛋白酶的催化作用的缘故D洗衣粉经过 0和 75处理后，温度再度回到 45，两
25、者的催化作用已不能恢复二 非选择题（30 分） 11 （15 分）红细胞含有大量血红蛋白，红细胞的机能主要是由血红蛋白完成，血红蛋白的主要功能是携带 O2 或 CO2，我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验，来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题：(1)血红蛋白的提取和分离一般可分为四步：_、_、_和_。 (2)实验前取新鲜的血液，要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠，取血回来，马上进行离心，收集血红蛋白溶液。加入柠檬酸钠的目的是_ _。以上所述的过程即是样品处理，它包括 、 、分离血红蛋白溶液、透析。(3)收集的血红蛋白溶液在透析袋中可以经过透析，这就是样品的粗分离。透析的目的是
26、 。透析的原理是 。(4)然后通过凝胶色谱法将样品进一步纯化，最后经 SDS 一聚丙烯酰胺凝胶电泳进行纯11度鉴定。此步样品纯化的目的是_ _。12 （15 分）PCR 技术可快速实现 DNA 片段扩增；电泳技术可在外电场作用下，把待测分子的混合物放在一定的介质(如琼脂糖凝胶)中进行分离和分析或用作亲子鉴定。下图是电泳装置和电泳结果：与电泳和叶绿体色素分离采用的纸层析法比较，后者使用的介质是 ；叶绿体中的色素能够在滤纸上彼此分离开的原因是 。根据电泳的原理，你认为可以用它来分离核苷酸吗？_。PCR 技术能把某一 DNA 分子片断进行扩增，所依据的原理是 _，每次循环需要经过_三步，所用的引物是
27、一段设计的_。图 3 是把含有 21 个氨基酸的多肽进行水解，得到的氨基酸混合物进行电泳的结果，故可推知该多肽由 种氨基酸构成。图 4 通过提取某小孩和其母亲，以及待测定的四位男性的 DNA，分别由酶处理后，生成含有若干 DNA 片段，并进行扩增得到的混合物，然后进行电泳所得到的一组 DNA指纹图谱，请分析 F1F 4 中，谁是该小孩真正生物学上的父亲？为什么？， 。电泳过程中分子的迁移速率除与本身所带净电荷的多少有关外，你认为还受什么因素的影响？(列出 3 种)A 卷1D 2C 3D 4C 5D 6A 7C 8D 9C10D 11 蒸馏（2分） 压榨 萃取剂的性质和使用量（2 分） 胡萝卜素
28、分解 分解蛋白质 二苯胺 (1)果胶 (2) 40 最高 酶活性降低（2 分） (3)避免果汁和果胶酶混合时影响混合物温度，从而影响果胶酶活性（2 分）12（共 15 分，除标明外每空 2 分）渗透原理（当外界溶液浓度低于动物细胞内液浓度时，细胞吸水胀破）（3 分） 可以保证酶溶液 pH 基本稳定，避免因 pH 变化影响过氧化氢酶活性（3 分） 除去小分子化合物（杂质）带电性质、分子大小、形状（答对两项得分 3 分）不可靠 高温也能使过氧化氢分解12B 卷1D 2A 3B 4 C5B6C 7A 8B9B 10D 11（15 分，除标明外每空 1 分) (1)样品处理 粗分离 纯化 纯度鉴定(2)防止血液的凝固 红细胞的洗涤(2 分) 血红蛋白的释放(2 分) (3)将样品中分子量较小的杂质蛋白除去(2 分) 透析袋能使小分子自由进出，而将大分子保留在袋内(2分) (4)通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去(2 分)12(15 分) (1)层析液 各种色素随层析液在滤液上的扩散速度不同(2 分) 能(2)碱基互补配对原理 变性、复性和延伸(2 分) DNA(3)6 (4)F 2 C 和 F2两者的DNA 指纹图谱完全相同(2 分) (5)电泳的电压、被测分子的大小、被测分子的形状、凝胶的种类密度等(任写 3 个，3 分)
