1、 外周血染色体收获(考核)一 实验前准备1、 检查是否有足够的 0.075MKCl、甲醇、乙酸、秋水仙素和玻片2、 检查水浴箱的温度是否 373、 记录当天的温度和湿度4、 37 预温低渗液5、 打印当天收获的病人名单二 实验1、 加入 50g/mL 的秋水仙素,充分摇匀2、 放入 37培养箱继续培养 12min3、 离心 1500 转/分 6 分钟4、 去上清,震荡器混匀,加入 0.075M 氯化钾溶液 8mL,加盖,颠倒混匀5、 37 水浴,如湿度高于 35%温育 20 分钟,如湿度低于 35%则温育 25 分钟6、 预固定:去上清,震荡混匀,加入新鲜的预固定液(甲醇:冰醋酸=95:5)5
2、mL,加盖,轻轻混匀。7、 离心 1500 转/分 6 分钟8、 弃去上清后,震荡混匀悬液,加入预先冰冻过的固定液 9mL,加盖,颠倒混匀9、 室温放置 30 分钟10、 离心 1500 转/分 6 分钟11、 弃去上清后,震荡混匀悬液,加入固定液 9mL,加盖,颠倒混匀12、 放入 4冰箱过夜13、 实验用具归位,工作区域消毒清洁第一次固定之前,预先把配好的 3:1 固定液放 4冰箱冰冻后再加入,效果更好些标本接种量多少(接种培养基种类、为何两瓶) 、最佳温度、湿度(接种、滴片、显带)标本污染如何处理滴片注意问题(滴片的标本数量、镜检不出现核型及多少个核型为佳)染色如何选择、改变胰酶处理以及
3、吉姆萨工作液染色时间预固定试剂也可选择 3:1,如何根据实验室条件选择比例烤片的温度以及时间PBS 缓冲液成分分析阅片:镜下计数 20 个核型,分析 5 个核型,电子核型图片保存两张外周血染色体滴片(考核)一 实验前准备:玻片清洁1、 洗洁精擦拭每张玻片2、 清水冲洗每张玻片3、 蒸馏水冲洗玻片,无水乙醇浸泡 3 小时以上4、 蒸馏水冲洗、浸泡、放 4冰箱备用二 实验1、 将冰箱过夜的标本离心 1500 转/分 6 分钟2、 弃去上清,根据细胞沉淀,留 1-2mL 的上清,轻轻混匀3、 对光检查细胞悬液的情况,如较浑浊则加入数滴固定液,至悬液变成半透明状,如细胞悬液非常清澈,切勿再加入固定液4
4、、 每份标本必须接种两种不同培养基,滴片时首先将两只试管各滴片一张5、 用 10的低倍镜观察核型情况,选择核型好的试管进行滴片6、 实验用具归位,工作区域消毒清洁外周血染色体 G 显带(考核)一实验前准备1、 0.035%浓度的胰酶 50mL 放置 30-60 分钟平衡至室温2、检查水浴箱的温度是否 373、 50mL Wash和胰酶放置 37水浴箱预温4、50mL 的 PBS 缓冲液加 4 管吉姆萨工作液二实验1、胰酶浸泡时间 10-12 秒(视情况)2、Wash 10 秒3、吉姆萨工作液中 2-3 分钟4、蒸馏水冲洗5、吹风机吹干玻片6、镜下观察显带情况7、实验用具归位,工作区域消毒清洁。