1、分子生物学作业学 号：0914120130姓 名：刘 义2009 级中药本一班山药中胆碱对流涎或唾液分泌过量治疗作用的研究一、研究背景：唾液是主要由三对大的唾液腺(下颔腺、腮腺和舌下腺)分泌入口腔，且下颔腺、腮腺和舌下腺分别提供其中的 70%、25%和 5%的量。涎腺是产生和分泌唾液的主要部位，由副交感神经及交感神经调节，但是主要是副交感神经起作用，主要对下颔腺调节。因此中枢和大脑皮质中枢的兴奋，引起唾液大量分泌。流 涎 在 婴 儿 中 是 正 常 的 ,但 有 相 当 比 例 的 发 育 缺 陷 患 者 主 要 由 神 经 肌肉 功 能 障 碍 引 起 的 流 涎 ,由 此 影 响 吞 咽
2、。 唾 液 中 含 有 凝 血 因 子 、 血 浆 白 蛋1白 、 葡 萄 糖 、 氨 基 酸 、 枸 橼 酸 、 乳 酸 、 尿 素 、 尿 酸 、 肌 酸 苷 、 脂 肪 酸 、 皮 质类 固 醇 和 免 疫 球 蛋 白 IgG、 IgG、 IgM 等 。 腺 细 胞 分 泌 或 排 出 唾 液 是 消 耗 营养 物 质 和 耗 氧 的 主 动 活 动 过 程 。 口角流涎症是 26 岁小儿常见病。此病往往沾污衣服、枕被,很不卫生,好发于冬春季节,若日久不治,可使口角及下唇颌浸淫成疮。 正常情况下唾液一天的分泌量为 10001500ml， 流涎即是唾液的分泌超12过正常水平，唾液流速受神经
3、控制，如使用氯氮平等产生的流涎副作用药品服用导致流涎或唾液分泌增多，有部分孕妇唾液也会不知不觉分泌增多。随着生活速度加快，人的社会压力增大以及人们不正常的生活习惯，以及抑郁症导致唾液分泌过多的患者日益增多。流涎症已经成为困扰人们正常生活的疾病。目前在国内治疗流涎的药品主要为胆碱受体阻断药，如阿托品，用量不同药效也会不同，必须在医生的监督指导下使用，不方便。胆碱受体阻断阻断药产生的副作用大，如对膀胱有强烈的刺激作用，不易于小孩等使用。第二种为芷闲胶囊，这是中药的合成剂，而且价格昂贵，且副作用以及作用机理不明确。第三种为格 隆 溴 铵 ， 为 2010 年 7 月 ,美 国 FDA 批 准 了 盐
4、 野 义 制 药 公 司 开 发的 格 隆 溴 铵 口 服 液 ， 用 于 治 疗 3 16 岁 儿 童 和 青 少 年 因 大 脑 性 麻 痹 等 神 经病 学 疾 病 引 起 的 慢 性 严 重 流 涎 。 格 隆 溴 铵 为 乙 酰 胆 碱 受 体 的 竞 争 性 抑 制 剂 ，其 作 用 比 阿 托 品 好 但 是 副 作 用 与 阿 托 品 相 似 ， 用 药 的 范 围 小 ， 且 在 国 内 的 价格 也 相 当 贵 。 第 四 ， 中 医 理 论 下 地 针 灸 等 中 医 治 疗 方 法 ， 不 方 便 且 不 易 于 推广 。 因 此 研 究 治 疗 流 涎 或 唾 液 分
5、 泌 增 多 使 用 简 便 且 便 宜 的 新 型 的 药 物 是 相 当必 要 和 紧 迫 。在 中 医 理 论 上 山 药 有 健 脾 、 除 湿 、 补 气 、 益 肺 、 固 肾 、 益 精 的 功 效 ，山 药 含 有 可 溶 性 纤 维 ， 能 推 迟 胃 内 食 物 的 排 空 ， 控 制 饭 后 血 糖 升 高 。 能12助 消 化 、 降 血 糖 。 山 药 中 含 有 大 量 的 胆 碱 类 的 化 学 成 分 。根 据 山 药 中 胆 碱 为 生 物 碱 类 ， 且 具 有 与 阿 托 品 相 似 得 结 构 。 本 文 提 出山 药 中 的 胆 碱 可 以 治 疗 流
6、 涎 或 唾 液 分 泌 过 量 。唾 液 分 泌 的 调 节 完 全 是 神 经 反 射 性 的 ， 包 括 非 条 件 反 射 和 条 件 反 射 。 副交 感 神 经 兴 奋 时 ， 其 末 梢 释 放 乙 酰 胆 碱 作 用 于 唾 液 腺 使 之 分 泌 大 量 稀 薄 的 、酶 多 消 化 力 强 的 唾 液 。 如 用 乙 酰 胆 碱 或 类 似 药 时 ， 可 引 起 大 量 唾 液 分 泌 ，09而 用 抗 乙 酰 胆 碱 药 （ 如 阿 托 品 ） ， 则 能 抑 制 唾 液 分 泌 。 腮 腺 、 颌 下 腺 等 外分 泌 腺 含 有 M2 和 M3 两 种 受 体 ,
7、以 M2 为 主 ， 腺 体 主 要 由 胆 碱 受 体 体 与 乙 酰1胆 碱 结 合 后 增 加 唾 液 的 分 泌 毒 蕈 硷 乙 酰 胆 碱 受 体 (mAChR)是 膜 受 体 家 族 的 成员 ,通 过 与 异 三 聚 体 鸟 苷 酸 结 合 蛋 白 (G 蛋 白 )偶 联 介 导 信 号 转 导 过 程 。二 、 预 用 的 实 验 技 术 及 资 料本 文 拟 通 过 制 作 变 应 性 流 涎 动 物 模 型 ,观 察 山 药 胆 碱 对 腺 体 的 的 影 响 检测 流 涎 动 物 模 型 的 唾 液 与 其 他 各 组 以 及 又 要 前 后 的 量 的 变 化 ;并 运
8、 用克 隆 技 术 ， 对 M2 和 M3 的 mAChR 进 行 研 究 （ 检 测 毒 蕈 硷 乙 酰 胆 碱 受03,2101体 表 达 和 功 能 的 调 节 及 其 介 导 新 的 信 号 途 径 ） ， 注 入 药 品 后 ， M2 和 M3 的对 动 物 的 唾 液 分 泌 的 作 用 机 理 ， 同 时 与 对 照 组 进 行 对 比 。 运 用 HPLC-荧 光08检 测 法 测 定 大 鼠 血 浆 及 脑 组 织 中 神 经 递 质 （ 乙 酰 胆 碱 ） 的 含 量 ， 与 阿 托 品 组以 及 正 常 组 进 行 对 比 。 运 用 EFG（ 此 技 术 目 前 用 于
9、 临 床 ， 检 测 六 种 脑 神 经 递质 的 量 的 变 化 ， 从 而 判 断 病 情 ， 目 前 在 中 国 此 技 术 很 少 使 用 ， 本 文 假 设 实 验资 金 充 足 情 况 下 ， 将 EFG 改 装 能 满 足 本 实 验 的 检 测 ） 监 测 乙 酰 胆 碱 的 量 ， 判断 是 否 是 山 药 胆 碱 的 药 物 对 神 经 的 作 用 ， 并 与 阿 托 品 组 进 行 对 比 。 三 种 方法 确 定 山 药 胆 碱 的 作 用 及 位 置 。 再 用 受 体 与 山 药 胆 碱 结 合 ， 蛋 白 质 技 术 测 量G 蛋 白 功 能 是 否 受 其 影
10、响 ； 做 体 外 实 验 ， 用 荧 光 标 记 法 判 断 是 否 是 山 药 胆 碱与 乙 酰 胆 碱 受 体 结 合 ， 发 挥 了 药 效 作 用 。三 、 实 验 步 骤 与 预 期 结 果 ：1.提 取 并 获 得 山 药 中 的 胆 碱 成 分 或 通 过 购 买 （ 为 了 实 验 精 确 以 及 有 精密 设 备 最 好 是 自 己 提 取 ） ；2.取 8 只 大 白 鼠 ， 雌 雄 各 半 ， 随 机 分 配 成 三 组 ， 每 组 为 一 雌 一 雄 。 标记 为 A1,2 组 ； B1,2 组 ； C1,2 组 ； E1,2 组 。 并 测 量 每 只 老 鼠 每
11、分 钟 的 分 泌量 。 对 各 组 老 鼠 分 别 滴 入 毛 果 芸 香 碱 溶 液 的 口 腔 内 ， 0.02mg-0.04mg kg， 造 成 唾 液 分 泌 增 多 模 型 ， 然 后 A1,2 给 入 山 药 胆 碱 ， B1,2 组注 入 阿 托 品 ,C1,2 组 滴 入 相 同 比 例 的 生 理 盐 水 ， E 组 作 为 正 常 组 。 初 步 测 量其 唾 液 的 每 分 钟 的 分 泌 量 量 。 预 期 A 和 B 组 的 唾 液 比 C,E 组 少 。3.用 克 隆 技 术 分 别 对 每 组 的 大 鼠 的 M2 和 M3 的 mAChR 作 用 机 理08分
12、 析 ， 从 而 检 测 乙 酰 胆 碱 受 体 表 达 和 功 能 的 调 节 及 其 介 导 新 的 信 号 途 径 。1对 比 两 种 受 体 在 各 组 中 的 作 用 变 化 。4.运 用 HPLC-荧 光 检 测 法 测 定 阿 托 品 组 与 山 药 胆 碱 药 物 模 型 组 大 鼠08血 浆 及 脑 组 织 中 内 乙 酰 胆 碱 的 的 含 量 。5. 用 膜 片 钳 对 测 定 给 药 模 型 组 可 能 由 于 乙 酰 胆 碱 的 量 增 加 ， 导 致14,3的 增 加 ， 细 胞 内 外 电 流 的 变 化 ， 并 与 正 常 组 以 及 阿 托 品 的 电 流 变
13、 化 相 比 。2aC由 于 神 经 末 梢 乙 酰 胆 碱 增 多 导 致 ， 细 胞 内 外 的 电 流 变 化 ， 预 测 A,B 电 流 变化 明 显 ， C,E 组 几 乎 无 变 化6.用 EFG 技 术 对 过 模 型 组 对 脑 神 经 内 分 泌 的 乙 酰 胆 碱 ， 进 行 检 测 ， 作 图并 对 比 每 组 的 变 化 。 A,B 组 的 乙 酰 胆 碱 明 显 多 于 C,E 组 。四 、 结 论 ：山 药 胆 碱 能 治 疗 流 涎 症 或 唾 液 分 泌 过 量 ， 有 抑 制 唾 液 分 泌 的 作 用 。五 、 文 献 ：01 Hirshman CA,Lan
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17、87-93.07 Bunemann M,Hosey M.Novel signaling events mediated by muscarinicreceptor subtypesJ.Life Sci,2001,68:2525-2533.08 荧光检测法测定大鼠血浆及脑组织中种单胺类神经递质，09 毒蕈碱样乙酰胆碱受体及其拮抗剂在近视发生发展中的作用10 抽薪散治疗小儿口角流涎症， （任宏宽 林鸿淼 ）11 http:/ http:/222.170.75.166/KNS50/knowledgenet.aspx?sdb=CJFD&sfield=%e4%b8%ad%e6%96%87%e5%85%b3%e9%94%ae%e8%af%8d&skey=%e5%94%be%e6%b6%b13.第七版生物化学14.第七版药理学
