最低抑菌浓度(MIC)测定.doc

1、- 1 - 2 -3附件 3.4最低抑菌浓度（MIC）测定1. 菌悬液的制备刮取 1820 小时的培养物，在管壁上充分研磨后混悬于 1ml 缓冲液中，借助比浊仪，调 菌悬液浓度至 104/ml，于 1 小时内用多点接种仪接种（放置室温应大于 25）。2. MIC 测定(1) 抗菌药物储存液制备 抗菌药物称量及配制：根据各抗菌药物的纯度称取，以目前所用抗菌药物为例。抗菌素 纯度 称量（mg）加溶剂(ml)储存液 浓度( g/ml)四环素 100% 3.2 1 3200大观霉素 63.4% 40.38 1 25600头孢曲松 81.5% 2.45 1 2000环丙沙星 84.4 3.8 1 320

2、0 分装与保存：每管 200l，-70可保存一年。(2) 抗菌药物工作液制备青霉素：管号 原液 0 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1浓度(g/ml)3200 1600 800 400 200 100 50 25 12.5 6.25 3.12 1.56 0.784取量(l)200200200200200200200200200200200200 200溶剂(l) 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 2005四环素:管号 原液 0 1浓度 (g/ml) 3200 1600 800取量 (l)200200200溶剂 (l) 2

3、00 200 200大观霉素：管号 0 7 6 5 4 3 2 1浓度(g/ml) 25600 12800 6400 3200 1600 800 400 200取量(l)200200200200200200200200溶剂(l) 200 200 200 200 200 200 200 200头孢曲松:管号 原液 0 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1浓度(g/ml)2000 200 100 50 25 12.5 6.25 3.12 1.56 0.78 0.4 0.2取量(l)40200200200200200200200200200200200溶剂(l) 360 200 200 200

4、200 200 200 200 200 200 200 2006环丙沙星：管号 原液 0 13 12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1浓度(ug/ml)3200 1600 800 400 200 100 50 25 12.5 6.25 3.12 1.56 0.78 0.4 0.2取量(l)200200200200200200200200200200200200200200200溶剂(l) 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200 200(3) 抗菌药物梯度培养皿的制备 培养皿编号：按各抗菌药物浓度编号。 将配制

5、好的各抗菌药物工作液 150l加到各培养皿中，与 15ml 50预温的培养基充分混匀，平放在超净台内，半开培养皿盖至培养基凝固后，用塑料袋密封保存于 4冰箱。(4) 菌悬液接种与培养 多头接种针以及菌液板用高压法灭菌处理，其他配件用酒精消毒处理；使用前必须确认完全烘干。 按照仪器要求将菌悬液接种于各抗菌药物梯度培养皿，接种菌后置超净台内直至菌悬液渗入。 置 3536、5%10% CO2 一定湿度的环境中培养。 记录放置时间。 培养 1824 小时观察结果。(5) 结果判读 观察细菌生长情况：7- 记录结果读取时间。- 在适宜的光线下，观察对照培养皿的菌落生长情况，并对所有菌株进行初步鉴定（涂片

6、染色和氧化酶试验）。- 比较观察对照平皿和抗菌药物平皿， 进行判读：接种点内有 1 个以上菌落或呈菌苔状为生长；接种点内无任何菌落或呈薄雾印迹为无生长。 MIC 判读与 记录：- MIC 是指抗菌药物能够抑制细菌生长的最小抑菌药物浓度，表示单位为g/ml 。- 记录各抗菌药物浓度平皿上细菌生长情况，在 WHO 参考菌株及 MIC实验结果记录表用（+）表示生长， （-）表示无生长。- 每批实验结果必须由另外一名技术人员复读、 签 字，以确保 结果的准确性。 参考菌株的判读：- 本次测定的参考菌株 MIC 值在标准 MIC 值范围内或在标准 MIC 值1个浓度范围内表明本次试验有效。 - 本次测定

7、的参考菌株 MIC 值超出上述范围则表明本次试验无效，需重新配制抗菌药物平皿和测定。3. 内酰 胺酶测定(1) 纸片酸度定量法 将一小片滤纸置于空平皿中： 让滤纸吸足青霉素液（pH 值 8.0 的 0.05mol/L 磷酸盐缓冲液 100ml+0.2g 溴甲酚紫+5g 无 缓冲剂的 结晶青霉素）： 用接种环将 1020 个菌落涂到滤纸上，涂膜直径约为 5mm，35孵育 308分钟： 观察结果：产生 内酰 胺酶的淋球菌使滤纸颜色由紫变黄。(2) 产色头孢菌素法将头孢硝噻吩纸片置于空平皿中，用接种环将菌落涂到纸片上，3 分钟内观察有无颜色变化，变红者为 内酰胺酶阳性。9附件 3.5WHO 参考菌株

8、及淋球菌临床分离株 MIC 实验结果记录表记录时间： 实验人员： 核读人员： 青霉素（P），四环素（ T）及 内酰胺酶：平皿号 P1 P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8 P9 P10 P11T1浓度(g/ml) 0.0078 0.0156 0.0312 0.0625 0.125 0.25 0.5 1 2 4 8 8内酰胺酶ABCDE合计大观霉素（S ）：平皿号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7浓度（g/ml） 2 4 8 16 32 64 128ABCDE12合计10头孢曲松（CE）:平皿号 CE1 CE2 CE3 CE4 CE5 CE6 CE7 CE8 CE9 CE10浓度（g

9、/ml） 0.002 0.004 0.0078 0.0156 0.0312 0.0625 0.125 0.25 0.50 1ABCDE12合计环丙沙星（CI）：平皿号 CI1 CI2 CI3 CI4 CI5 CI6 CI7 CI8 CI9 CI10 CI11CI12CI13浓度(g/ml)0.0020.004 0.0078 0.0156 0.0312 0.0625 0.125 0.25 0.50 1 2 4 8ABCDE12合计1112附件 3.6淋球菌临床分离株对各监测药物 MIC 结果统计表青霉素： 浓 度( g/ml) 0.0078 0.0156 0.0312 0.0625 0.125

10、0.25 0.5 1 2 4 8 总数菌株数四环素/内酰胺酶:浓度(g/ml) 8 内酰胺酶 总数菌株数大观霉素：浓度(g/ml) 2 4 8 16 32 64 128 总数菌株数头孢曲松:浓度(g/ml 0.002 0.004 0.0078 0.0156 0.0312 0.0625 0.125 0.25 0.50 1 总数菌株数环丙沙星：浓 度( g/ml) 0.002 0.004 0.0078 0.0156 0.0312 0.0625 0.125 0.25 0.50 1 2 4 8 总数菌株数13附件 3.7抗菌药物敏感性的判断标准敏感(S) 中敏(IS) 耐药(R)四环素 0.5 116

11、（TRNG）大观霉素 64 128头孢曲松 0.03 0.06-0.5 1环丙沙星 0.03 0.06-0.5 114附件 3.8 淋球菌临床分离株对各监测药物敏感性结果统计表内 酰胺酶 药敏情况抗菌药物 菌数 耐药 中敏 敏感青霉素大观霉素环丙沙星头孢曲松TRNG 四环素15附件 3.9 参考菌株的 MIC 值青霉素 四环素 大观霉素 头孢曲松 环丙沙星参考菌株 MIC 范畴 MIC 范畴 MIC 范畴 MIC 范畴 MIC 范畴WHO A 0008 S 0.25 128 R 0.0005 S 0.016 SWHO B 006 LS 0.25 8 S 0.004 S 0.016 SWHO C

12、 0.5 LS 1 16 S 0.016 S 0.016 SWHO D 1 R 4 16 S 0.016 S 0.03 SWHO E 2 PPNG 1 16 S 0.004 S 0.016 SWHO F 0.016 S 8 64 S 0.03 S 0.016 SWHO G 0.5 LS 32 TRNG 64 S 0.03 S 0.25 LSWHO H 0.25 LS 8 64 S 0.03 S 2 RWHO I 2 R 8 64 S 0.03 S 0.5 LSWHO J 2 PPNG 8 64 S 0.03 S 8 HLRWHO L 2R(CMRNG)64 S 0.125 LS 16 HLRW

13、HO O 32R(PPNG)1024 R 0.016 S 0.03 SWHO Q 1R(CMRNG)64 S 0.03 S 1 R S=敏感 LS=低敏 R=耐药 PPNG=产青霉素酶淋球菌 TRNG=质粒介导的耐四环素淋球菌 HLR=高度耐药16附件 3.10 淋球菌质控菌株药物敏感性检测结果报告表质控菌株号： 监测单位名称 实验人员： 实验日期 (年/ 月/日)质控菌株敏感性范畴（g/ml）青霉素敏感(S)/低敏(LS)耐药(R)/PPNG头孢曲松敏感(S)低敏(LS)环丙沙星敏感(S)/低敏(LS)耐药(R)大观霉素敏感(S)/耐药(R)四环素TRNG/非 TRNG1MIC 值敏感性范畴

14、2. MIC 值敏感性范畴3MIC 值敏感性范畴4. MIC 值敏感性范畴5MIC 值敏感性范畴6. MIC 值敏感性范畴17附件 4性病病例报告资料分析方案、数据来源（一）性病监测点管理机构：从中国疾病预防控制信息系统中的疾病监测信息报告管理系统、中国疾病预 防控制基本信息系 统选择本监测点报告的性病和人口等相关数据进行分析。（二）省级性病监测点管理机构：从中国疾病预防控制信息系统中的疾病监测信息报告管理系统、中国疾病 预防控制基本信息系统分别下载本省国家级性病监测点报告的性病和人口等相关数据，汇总后进行相关指标分析。、指标计算(一)发病率1. 性病总发病率性病总发病率(/10 万)=5 种

15、性病总报告病例数/当地平均人口数 10 万。当地平均人口数(年初人口数+年末人口数)/22. 分病种发病率分性病病种发病率(/10 万)=某种性病报告病例数/当地平均人口数 10 万3. 分性别发病率男性性病发病率(/10 万) 男性性病 报告病例数/当地男性平均人口数10 万女性性病发病率(/10 万) 女性性病 报告病例数/当地女性平均人口数10 万4. 分年龄别发病率某年龄别发病率(/10 万) 某年 龄别性病报告病例数/当地该年龄别平均人口数10 万5. 胎传梅毒发病率胎传梅毒发病率(/10 万) 胎 传梅毒报告病例数/当地活产数10 万。(二)标化发病率用于不同地区之间性病发病率比较

16、，要求采用直接法进行标化，即以标准人口的年龄别人口数，或标准人口的年龄别构成进行计算。标化发病率(/10 万) 被标 化地区性病预期发病数/标准人口总数10 万。18被标化地区性病预期发病数(标准人口某年龄别人口数被标化地区该年龄别发病率)或标化发病率(/10 万) (被标化地区某年龄别按标准人口年龄构成的分配发病率)被标化地区某年龄别按标准人口年龄构成的分配发病率(/10 万)标准人口某年龄别构成比 被标化地区该 年龄别发病率(三)增长率1. 增长率报告病例数的增长率(%)( 本期性病报告病例数-上期性病 报告病例数)/上期性病报告病例数100%。报告发病率的增长率(%)( 本期性病报告发病

17、率-上期性病 报告发病率)/上期性病报告发病率100%。2. 年平均增长率年均增长率(%) 10%1na其中 a1为年初的 发病数或 发病率，a n为年末的发病数或发病率， （n-1）为开（n-1）方。(四)构成比1. 年龄构成某年龄组的构成比(%)某年龄组的性病报告病例数/ 各年龄组性病报告病例数总和100%2. 病种构成某性病的构成比(%)某性病的报告病例数/5 种性病 报告病例数总和100%。(五)性别比性别比男性性病报告病例数女性性病报告病例数。、分析内容(一)时间分布1. 某季/年性病报告病例数与上年同期比较季分析：分析 5 种性病本年某季的报告病例数较上年同季的增减情况，分析结果以

18、图表的方式表示，参见表 1。表 1. 某年某季性病病例数汇总及与上年同季比较19本年某季 上年同季病种 病例数 构成 (%) 病例数 构成(%)病例数增减()梅毒一期二期三期隐性胎传淋病生殖道沙眼衣原体感染尖锐湿疣生殖器疱疹合计年分析：分析 5 种性病本年的报告病例数、报告发病率较上年增减情况，分析结果以图表的方式表示，参见 表 2。表 2. 本年性病病例数、 发病率与上年同期比较本年 上年病种 病例数 构成(%)发病率(1/10 万) 病例数构成(%)发病率(1/10 万)病例数/发病率增减()梅毒一期二期三期隐性胎传淋病生殖道沙眼衣原体感染20尖锐湿疣生殖器疱疹合计2. 本年某季性病报告病

19、例数与本年上季相比分析 5 种性病本年某季报告病例数较本年上季增减情况，分析结果以图表的方式表示，参见表 3。表 3. 某年某季性病病例数汇总及与本年上季比较本年某季 本年上季病种 病例数 构成 (%) 病例数 构成(%)病例数增减()梅毒一期二期三期隐性胎传淋病生殖道沙眼衣原体感染尖锐湿疣生殖器疱疹合计3. 本年截止本期累计发病数与上年同期累计发病数比较分析 5 种性病从本年 1 月 1 日截止本期的累计发病数与上年 1 月 1 日截止上年同期累计发病数的增减情况，分析结果以图表的方式表示，参见表 4。表 4. 本年截止本期累计发病数汇总及与上年同期比较本年初截止本期的累计 上年初截止上年同

20、期累计病种病例数 构成(%) 病例数 构成(%)病例数增减()梅毒一期二期三期21隐性胎传淋病生殖道沙眼衣原体感染尖锐湿疣生殖器疱疹合计4. 本年按季报告病例数及年发病趋势线图季分析：按发病日期，以线图的形式绘制出本年度从第 1 季度至本季度的性病报告病例数线图，在同一图中 绘制出历年从 1 至 4 季度的性病报告病例数线图比较发病趋势。年分析：绘制历年至本年的 5 种性病发病率线图。(二)人群分布1. 性别季分析：分析男女两性 5 种性病的报告发病数及与上年同期比较(见表 5)，并计算男女两性性病报告发病数的性别比。表 5 某年某季不同性别性病报告病例数汇总及与上年同期比较男性（病例数） 女

21、性（病例数）病种 本年(某季 )上年( 同季) 增减（% ） 本年(某季) 上年(同季) 增减（ %）梅毒淋病生殖道沙眼衣原体感染尖锐湿疣22生殖器疱疹合计年分析：分析男女两性 5 种性病的报告病例数及与上年比较(见表 5)，计算男女两性性别比。分析男性和女性的性病构成比及发病率(见表 6)，可以在同一个图表中以直条图的方式表达。同时分析历年男性与女性的性病发病趋势，绘制趋势线图。23表 6 某年不同性别性病报告病例数、构成及发病率汇总男性 女性病种 病例数 构成(%) 发病率(1/10 万)病例数 构成(%) 发病率(1/10 万)梅毒淋病生殖道沙眼衣原体感染尖锐湿疣生殖器疱疹合计2. 年龄

22、年龄分组一般以 5 岁为一组进行划分，性病分析的年龄组划分要求：0-，1-，5-，10-，15-，20-，25-，30-，35-，40-，45-，50-，55-，60-。分析某年 /季各年龄组性病的发病数、发 病率及与上年同期的比较(见表 7)。年度分析还应分析不同性别各年龄组性病的发病情况及与上年的比较(见表 8)。表 7 某年 /季性病报告病例数、发病率年龄分布及比较某年/季 某年 /季年龄 病例数 构成(%) 发病率(1/10 万)病例数构成(%)发病率(1/10 万)病例数增减(%)0-1-5-10-15-20-25-30-2435-40-45-50-55-60-不详合计表 8 某年不

23、同性别性病报告病例数、发病率年龄分布男性 女性年龄 病例数 发病率(1/10 万) 病例数 发病率 (1/10 万)0-1-5-10-15-20-25-30-35-40-45-50-55-60-合计(三)地区分布对于性病监测点管理机构，可分析不同医院报告的性病病例数及其变化情况。对于省级性病监测点管理机构，可分析省皮防中心可收集全省各监测点的资料，分析本省不同监测点性病发病数及其变化趋势。见表 9。表 9 某年 /季性病报告病例数、发病率地区分布某年 /季 某年 /季地区 病例数 构成(%)发病率(1/10 万) 病例数构成(%)发病率(1/10 万)病例数/发病率增减(%)25合计(五)疫情

24、特点及 变化的解释 影响性病疫情变化(上升或下降)的因素很多，需要对性病疫情特点及变化情况进行解释，并提出合理的建议 ，必要 时进行专题调查。常见影响性病疫情变化的因素有：性病疫情上升或下降，开展了大规模性病筛查工作，疫情管理人员、疫情管理力度、性病 诊疗机构 诊断水平或检测能力、报告资料来源、疫情收集工具、报告方法、病例定 义、病人求医行为、当地社会政治环境(如扫黄行动) 等发生了明显的变化。、疫情分析报告的撰写格式 性病疫情分析报告的撰写格式包括：前言或疫情概要、时间分布、地区分布、人群分布、讨论( 问题与建议)、小结。要求 语言简练，数字分析与图表表达合理恰当。着重分析性病“ 三间分布”

25、 的特点及重点或突出的 问题26附件 5性病监测相关资料收集实施方案相关资料收集是指收集与性病疫情监测有关的各类现有（其他部门或项目已经获得）信息，不需要重复调查 而获得，避免在人力和物力上造成不必要的浪费。、 目的为分析和掌握性病疫情状况提供补充信息。、 原则在信息收集过程中，需要与有关部门协调配合，尊重这些部门在资料收集中所付出的劳动，赢得他们的了解和支持。同时，要做好 资 料信息保密工作，保护个人隐私。、 内容与方法1. 人口统计学资料和社会经济发展指标来自人口统计年鉴和中国疾病预防控制基本信息系统，包括人口 统计学资料（如年龄组人口数及构成、性别人口数及构成、民族别人口数及构成、流动人

26、口数、孕产妇数、出生率、死亡率、人口自然增长率等）、社会经济发展与性病防治 经费投入资料（如国内生产总值、人均国内生产总值、人均收入等），以及疾病预 防控制的相关信息。2. 相关机构或项目的性病筛查或检测资料：采用表 1 收集相关人群的性病筛查或检测结果。相关人群主要包括：血站献血人群；产前门诊孕产妇；外科手术病人；妇教所、劳 教所和戒毒所人群；征兵体检人群；出入境人群；从业体检人群；HIV 哨点监测人群；以及各类项目调查的人群。病种主要包括：基于实验室诊断的梅毒、淋病和生殖道沙眼衣原体感染。3. 重点人群数量：采用表 2 收集当地公安司法机关登记的暗娼和吸毒者人数资料，以及近期估计的暗娼/

27、吸毒者和男性同性性接触者人数。274. 收集单位为县（区）性病监测点管理机构28表 1 相关人群性病筛查结果统计表省 监测点 年度 筛查/检测人数 阳性数机构或项目名称人 群 病种 筛查方法男性 女性 合计 男性 女性 合计填表单位：_ 填表人：_ 审核人：_注：请指明性病的种类与筛查的方法（包括阳性结果的判断方法），如果有多种性病的筛查结果， 则分别填写。如果没有分性别的资料，则只填写合 计数。 从业人员体检资料应按从 业人员类型分类填写。HIV 哨点监测人群应按不同人群分开填写。应指明 筛查/检测机构，或有关 项目名称，不同机构或项目的筛查/检测资料应分开填写。29表 2 重点人群登记和估

28、计人数省 监测点 年度 登记情况 估计情况人 群 登记年份登记数 估计年份估计数 估计范围 估计方法填表单位：_ 填表人：_ 审核人：_注：登记人数是指公安机关当年登记在册的人数，如没有当年的 则使用最近的登记数。30附件 6性病疫情漏报调查实施方案、 目的 (一) 校正性病报告发病率。(一) 及时发现性病疫情报告管理中的薄弱环节，提出改进措施，提高疫情报告质量。、 调查病种包括梅毒、淋病、生殖道沙眼衣原体感染、尖锐湿疣和生殖器疱疹。、 调查方法与要求性病疫情漏报调查应按属地管理原则，确保覆盖不同级别、不同类型的提供性病诊疗服务的医疗机构。监测点内有资质的提供性病诊疗服务的医疗机构不多于 5

29、家时全部调查。如多于 5 家， 则至少选取属地的 1 家皮肤性病防治机构(如果没有则不进行调查)、2 家公立综合医院(皮肤性病门诊和妇产科门诊)、1 家妇幼保健院、1 家其他类型医院（如街道卫生院、私人诊所等）进 行调查。性病监测点管理机构组织有关人员进行性病疫情漏报调查。在随机抽取被调查的医疗机构本年度 3 个月份全部性病报告病例清单中的 100 张中华人民共和国传染病报告卡（不足 100 张时全部抽取）后，到该机构相关科室(如防保科、皮肤性病科、泌尿科、妇产科、男性科、检验科室等)查询门诊日志、 检验记录、传染病登记簿，并与病例清单进行对比，记录漏 报的病例数，并将 结果按附表记录。 、 调查频度监测点性病监测管理机构在每年的 910 月组织 1 次性病疫情漏报调查。