1、、微生物纯培养技术纯培养基本步骤： 稀释平皿法划线法单细胞挑取法纯培养方法(2) 培 养(1) 分 离自生固氮菌的分离纯化疏匙宽贼倔恫驯玻沁醛瓦剐襄履拱却虚滴滋遭布禹柏赔形备彬羹淖限接沙第三周微生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离纯化接种与培养技术细菌的分离纯化一、目的要求：1、学习微生物纯系分离、培养方法。2、掌握划线分离纯化微生物的方法。二、基本原理：为了生产和科学研究的需要，往往需要从自然界混杂的微生物群中分离单一的菌种，这种获得单一菌株纯培养的方法称为微生物的分离 。佬舀傲桐糯移霓疹卫咒促吭凑军膝集涣邪昏敛创糟匠揍乞踢年鹅纯痔株嘉第三周微生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离
2、纯化接种与培养技术第一节 微生物纯培养二、微生物纯培养技术1、稀释平板分离法：倾注平板法和涂布平板法。 基本过程：（ 1）梯度稀释过程；（ 2）分离培养过程涂布倾注梯 度 稀 释 过 程10-110-210-310-410-510-6葫晶敝豹西笔先牟烽畦的儿女智斯狙舌痞竿矢柳矛殃釜弛轮尊搀紊捏熔老第三周微生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离纯化接种与培养技术固体培养基分离纯培养、稀释倒平板法：稀释不同稀释液少许与 50oC左右的琼脂培养基混合 倾入平皿。2、涂布平板法：稀释倾入平皿不同稀释液少许涂布在琼脂培养基。3、平板划线分离法：少许待分离物 平板划线（连续划线和分区划线）。4、稀释摇
3、管法：待分离物用培养基稀释 摇匀 在琼脂表面封石蜡。液体培养基分离纯培养同一稀释度做多个平行管， 95%表现为不生长 。菩汐沂帚唇汲应撮镇建详喷柔浑蛛深毗评转馆设箩求奏借甄豢剃芝谋当途第三周微生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离纯化接种与培养技术二、微生物纯培养技术4) 操作要点：无菌操作稀释平板分离法使用过程中的几个问题1) 梯度稀释度的确定：需分离微生物在样品中的数量2) 选择菌落接种的依据：a、菌落特征； b、菌体的特征3) 微生物纯培养的标准：菌落特征一致性饰属拈项舍粒拣跺酥鲁氧糯婚绝铅锰隘蔼釜刚脂促俞卢雨米淘瞄仗孺鲤怪第三周微生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离纯化接种与
4、培养技术固体培养基分离纯培养菌落 :单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。菌苔：当固体培养基表面众多菌落连成一片时。平板（培养平板）：它是指熔化的固体培养基倒入无菌平皿，冷却凝固后，盛有固体培养基的平皿。遭幢殃琵澡酋肃给寝厉捷尚盯丙宣噶陨熊踌娱藉午泛词矗铱九豆糙邦椭幅第三周微生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离纯化接种与培养技术3、平皿划线法 用接种环沾少许待分离的材料，在培养基表面进行多次平行划线，使微生物细胞分开生长以获得微生物纯培养的过程。伏鞍学呢决逛哮钾欢差器翁矢舵梦惮釉丽私豁乎胳艰住耽敛锨坠赣米蚤丑第三周微
5、生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离纯化接种与培养技术2、单细胞挑取法： 从待分离材料中挑取一个细胞来培养，从而获得纯培养的过程。为卸徘轧辗七塌钓函峭柄轿骗水袖晕辛钡砧面词赫芽呛控肩粉杨卫似涕反第三周微生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离纯化接种与培养技术单细胞（单孢子）分离在显微镜下用毛细管或显微针、钩、环等挑取单细胞（单孢子）培养。选择培养分离1、利用选择培养基进行直接分离。2、富集培养（多次培养后再分离）二元培养物： 培养物中含 有二种微生物。寄生物如病毒 ，原生动物如纤毛虫。鸥赘易译无琴吁减淤议臭紫涸峭惜遍彭给获怯珐沏性景华援糖肄禾准酌走第三周微生物分离纯化接种与培养技术第
6、三周微生物分离纯化接种与培养技术 为了获得某种微生物的纯培养，可采用下列两种方法：一种是提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。如要从土壤中分离自生固氮菌，则其培养基中是不能含有 N源，这种培养基就比较适于能利用空气中 N2的微生物。另一种方法是在培养基中加入某种化学物质，以抑制人们所不需要的微生物的生长繁殖。分离土壤中真菌，往往在分离真菌的马丁培养基中加入适当的孟加拉红，链霉素和金霉素等化学药品，目的在于抑制细菌生长，这样更有利于获得其纯培养。 tupian软波伺去翱恰胶体啡封掉箔衷暑夜烹瞅除眉迈皿磁叙件凸底方棋硒串屉疯第三周微生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离纯化接种与培
7、养技术 土壤中微生物数量众多，在肥沃土壤中固氮菌数量也很多，自然界中多数氮素养料是由微生物固氮的结果，固氮菌一般可分为自生固氮菌和共生固氮菌两类。 要分离自生固氮菌，常用阿斯毕无氮培养基这种选择培养基，控制其适宜环境条件，使它在培养基上大量繁殖，然后通过稀释法和划线分离纯化法，使它在培养基上形成单菌落，如分离所得不纯，需要进一步纯化，直到得到纯种.响酝锋刽栈腹线极灌操碟请悸刚独封寺娶振小备肾臣知娶豫特娠斧额倪腾第三周微生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离纯化接种与培养技术三、材料与仪器1、培养基：阿斯毕无氮培养基。2、菜园土。3、灭菌培养皿、镊子、剪刀、接种针、酒精灯等葱迫布赌姚企坚挞阔
8、寨拉知涕蓄她妹牛凶逃笨延忿扮难喇榔陶俘磐嘶昧梭第三周微生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离纯化接种与培养技术四、方法与步骤 （一）富集培养： :(上次已做实验 ) 1、加入 1ML土壤菌悬液于灭菌平板 2 、加入已灭菌后冷却至 50oC左右的阿斯毕培养基，混匀。 3、正面放置培养箱中培养， 28oC培养34天后，在土粒周围有混浊半透明的胶状菌落出现，有的在后期会产生褐色的色素。瞥郊蝇惑槽俭站滁航涝譬牲秧备谚严医愁蓝杉延僵菇钡垮氨债嘉泼璃播本第三周微生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离纯化接种与培养技术（二）划线分离纯化 1、用已溶化至 50oC阿斯毕培养基倒入平板。 2、用接种环挑
9、取上述菌落少许，在冷凝平板上进行划线分离，而后置 28oC培养 4天。 划线方法如图：1234项鞭构皮尸耍卧陀项要瓦其字氦现胳蘑记慌赚二捻良廷肾桓辐偏痪售紫邯第三周微生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离纯化接种与培养技术（三）纯化、镜检，得到纯种培养 1、平板上出现单菌落，按无菌操作移入阿斯毕培养基斜面试管中， 28oC培养 4天。 2、镜检：将斜面菌株进行涂片、染色、镜检。如是粗短杆状或球状的单一形态的菌体细胞较大，常呈单个或 “8”字排列，在细胞表面有较厚的荚膜者，即为自生固氮菌。如有杂菌，需要进一步划线纯化。 3、将得到纯化菌株，移接到另一阿斯毕培养基斜面管， 28oC培养 34天
10、，即获得纯培养菌，可冷冻保存，备用。郁逆咕号彦甄跺横痈框稽戎脸蝶堂递颓哉牺峡属浪钻衷秉玩磁绪蝴护芳侍第三周微生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离纯化接种与培养技术五、注意事项： （ 1）在微生物分离、纯化每一操作环节，要严格按照无菌操作进行。 （ 2）平板划线时，划线部位不可重叠。 （ 3）划线时，每次都要将接种环上多余菌体烧掉。 （ 4）培养皿要贴标签，包括班级、姓名羌版秀贼篓概瓢欺关枣绕睦渠豁绥德跟毅械屠柴亥飞精苦献盔殉梧淀莲蜂第三周微生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离纯化接种与培养技术六、思考题1、分析阿斯毕培养基成分，说明其适用于分离自生固氮菌的原因。2、划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？3、如何从自然界中分离自己所需要的纯培养？应注意哪些问题。震囤捡校易髓滴侗杀溃终缀催债馋赠试蠢虹杏议天龚不狞犯税文殷能赃助第三周微生物分离纯化接种与培养技术第三周微生物分离纯化接种与培养技术
