1、人体生物利用度及生物等效性 (BA/BE),中国药科大学药代中心 杨劲,outline,生物利用度的定义 生物利用度研究的意义 生物利用度的历史 生物利用度定义和前提 生物利用度的研究过程 分析方法 实验设计：药品、受试者、采样时间 血浆、全血、血清 药动学参数 等效性检验,生物利用度 (Bioavailability BA),指药物活性成分从制剂中释放吸收进入体循环的相对速度(一般以Tmax、Cmax表示)和程度(以AUC表示) 相对程度 以静脉给药为标准：绝对生物利用度 以其他给药途径为标准：相对生物利用度,药物吸收程度,Fabs 药物释放，跨膜吸收，肠道菌群代谢等 FG PGP和3A4酶
2、，各种转运蛋白 FH 肝脏首过效应，肝脏内的转运蛋白,药物吸收速度的一般表达,为什么不用Ka值呢？ 求ka=吸收解析,由于药物吸收环节众多，并不存在单一指数方程来作为吸收函数理论值 不可能仅仅通过本身口服后的数据来区分吸收指数项和消除指数项，从而来进行吸收解析。(Excel课件) 所以吸收解析的时候最好要同时进行静脉给药实验的原因能够确切地知道药物的消除相的情况。 当药物静脉给药和口服给药消除情况不一致的时候，哪怕进行静脉注射也无法进行口服药物的吸收解析，例如口服给药存在肠肝循环，首过效应强等等情况下。,生物利用度研究的目的,不同制剂有不同的药时曲线，利用程度和利用速度可能都不一样。本图速度接
3、近，程度差别很大,最小中毒浓度,最小有效浓度,生物利用度研究的目的,不同处方的同一种类药品生物利用度不一样，变异不一样,量-效曲线,药物浓度的效应表达效率(形状参数),Repuesta Clinica/PD,Log Dosis,Development,Market,Research,Pharmaceutical R&D,Preclinical studies,Clinical studies,CHEMISTRY/PHARMA- COLOGY,IND*,PHASE I,PHASE II,PHASE III,NDA*,PHASE IV,Search for active substances To
4、xicology, efficacy studies on various types of animals,Regulatory review,Efficacy studies on healthy volunteers,Clinical studies on a limited scale,Comparative studies on a large number of patients,Regulatory review,Continued comparative studies,*Investigational New Drug Application for permission t
5、o administer a new drug to humans,50150 persons,100200 patients,5005,000 patients,Registration, market introduction,*New Drug Application Application for permission to market a new drug,KNOWLEDGE LEVEL,KNOWLEDGE LEVEL,24 yrs.,26 mos.,36 yrs.,13 yrs.,Approximately 10 years from idea to marketable dru
6、g,TIME SPAN,Discovery,Development,生物利用度在新药研发中的位置,生物利用度,生物利用度在仿制药品开发中的位置,相关法规的发展,1985年 新药审批办法 1999年 新药审批办法仿制药品审批办法 2002年 药品注册管理办法 2005年5月1日 药品注册管理办法 2007年10月1日 药品注册管理办法,相关法规的发展,1985年新药审批办法：改变剂型但不改变给药途径的新药，如属国家标准，可仅进行人体生物利用度的研究，免做临床验证。,1999年新药审批办法：四类新药应进行生物等效性试验生物利用度比较试验、随机对照的临床研究 1998年仿制药品审批办法：生物利用度/
7、生物等效性,2002年药品注册管理办法： 注册分类五：口服固体制剂生物等效性试验 注册分类六：口服固体制剂生物等效性试验,生物等效性试验规定 (药品注册管理办法2002.12.1),口服固体制剂应当进行生物等效性试验，一般为18至24例； 难以进行生物等效性试验的口服固体制剂及其他非口服固体制剂，应当进行临床试验； 速释、缓释、控释制剂应当进行单次和多次给药的人体药代动力学的对比研究和临床试验； 对于注册分类6中的口服固体制剂，可仅进行生物等效性试验，一般为18至24例；难以进行生物等效性试验的，可仅进行溶出度、释放度比较试验。分类6：已有国家药品标准的原料药或者制剂：仿制药品法律高度：管理办
8、法指导原则,药品注册管理办法2005.5.1,申请已有国家标准的药品注册，一般不需要进行临床试验；需要进行临床试验的，化学药品一般进行生物等效性试验； 一般不需要进行临床试验，但口服固体制剂应当进行生物等效性试验。 已有国家药品标准的非处方药的生产或者进口； 经国家食品药品监督管理局确定的非处方药改变剂型，但不改变适应症或者功能主治、给药剂量以及给药途径的药品,28号令药品注册管理办法 2007年10月1日执行,药物的临床试验（包括生物等效性试验），必须经过国家食品药品监督管理局批准，且必须执行药物临床试验质量管理规范 生物等效性试验，是指用生物利用度研究的方法，以药代动力学参数为指标，比较同
9、一种药物的相同或者不同剂型的制剂，在相同的试验条件下，其活性成份吸收程度和速度有无统计学差异的人体试验。 药物临床试验的受试例数应当符合临床试验的目的和相关统计学的要求，并且不得少于本办法附件规定的最低临床试验病例数。罕见病、特殊病种等情况，要求减少临床试验病例数或者免做临床试验的，应当在申请临床试验时提出，并经国家食品药品监督管理局审查批准。,指导原则和法规的关系,法律指导原则,生物等效性研究 (BioEquivalence BE),等效性研究的方法学 临床治疗效果：直接证明两药的差异的可接受性 血药浓度测定：通过两药释放、吸收的差异的可接受性，推测临床治疗效果差异的可接受性 生物等效性研究
10、：指药学等效制剂或可替换药物在相同试验条件下，服用相同剂量，其活性成分吸收程度和速度的差异无统计学意义(推测临床治疗效果差异的可接受性) 测定血药浓度方法学（生物利用度） 替代指标的应用应用条件？,BA和BE的关系,BE：求证两产品的生物等效性(例如受试者只选男性)规格、剂型、批次 BA：不同的产品可各不相同 剂型的筛选 处方、工艺的评价 新剂型（新给药途径）给药剂量的估计 性别差异(受试者选择男女各半),作用,新药研究阶段 : 比较改变新药处方、工艺后制剂是否能达到预期的生物利用度；确定处方和工艺合理性， 改变剂型，与原剂型比较来确定新剂型的给药剂量，也可通过BE 研究来证实新剂型与原剂型是
11、否等效 临床试验阶段： 寻找药物无效或者中毒的原因。例如验证同一药物的不同时期产品的一致性，包括早期和晚期的临床试验用药品，临床试验用药品（尤其是用于确定剂量的试验药）和拟上市药品等。 仿制药品，可通过BE 研究来证明仿制产品与原创药是否生物等效，是否可与原创药替换使用。,上市后阶段： 处方、工艺的评价和生产控制：处方组成成分、比例以及工艺等出现一定程度的变更时，进行BE 研究，以考察是否生物等效。以提高生物利用度为目的研发的新制剂，需要进行BA 研究，了解变更前后生物利用度的变化。,三个等效的关系,Pharmaceutical equivalence(含量，给药途径等) Bioequival
12、ence Therapeutic equivalence Noninferiorite（非劣效性研究） 生物等效性是为了替代临床试验。后者花费大，时间长，组织繁琐 从统计学上讲，半定量的临床数据的统计效率无法和药代的定量数据相比。所以，临床至少需要120对受试者，而等效性试验只需要20例受试者,药学等效,生物等效,临床等效,经济性,可靠性,药学等效 性药物,作用部位,吸收,分布,生物利用度,疗效,生物等效性,体循环,？,Bioequivalence Therapeutic equivalence的关系,疗效等效性 非劣效性,实验假设,生物利用度等效临床等效疗效不良反应其实有例外：,盐酸小檗碱口
13、服后抑制肠道菌群的转化二糖成单糖的功能，导致血糖降低,胃肠道粘膜保护剂:枸橼酸铋钾(例外的例外)生物利用度不能变大 此时生物利用度不是为了疗效，而是为了控制铋吸收后的不良反应,局部用药，只在局部发生作用，发挥疗效不经过血液循环系统,健康人等效=病人等效？单剂量等效=多剂量等效？,幽门螺旋杆菌,治疗有体外很好的效果， HP对于阿莫西林和克拉霉素敏感，但是临床实验表明并没有被完全彻底消灭，其中主要原因是药物在胃中停留的时间相当短，在胃粘液层和表层细胞处没有达到有效浓度！ 阿莫西林属于时间依赖性抗生素。,时间依赖型抗生素,时间依赖型，药物浓度超过MIC的45倍以上杀菌活性不再增加，例如-内酰胺类、大
14、环内酯类、克林霉素和万古霉素等,采用生物黏附剂技术后的阿莫西林微丸能有效在胃粘膜上黏附，1mg/kg时幽门螺旋杆菌消除率相当于10mg/kg普通制剂的消除率，而血药浓度和生物利用度前者远低于后者！,BA/BE originally indicated the rate and amount of administered drug that reached the blood intact (available at site of action) now expanded to include active metabolites Regulatory agencies have not e
15、stablished a single set of BE regulations (design, conduct, interpretation) that are universally acceptable,试验的目的,Determination of intra/ intersubject variability Bioequivalence of dosage form proposed for marketingDosage form proportionality study Food effect study Effect of changes in formulation
16、or manufacturing processBioequivalence study required for the purpose of filing an ANDA,生物利用度试验流程,实验方案,伦理委员会,临床批件,建立体内 分析方法,给药,取样测定,浓度时间 数据,数据处理 BAPP,统计结论,生物利用度试验流程,受试者体检 知情同意书,知情同意书要点,全面告知,充分理解,自主选择,BA和BE研究要点,确定试验目标 建立生物样本分析方法 设计试验方案 有效管理试验过程 分析试验数据 明确试验结论,试验过程的管理 GLP GCP,过程管理 人员管理 环境管理 医疗保障,方法学的建立
17、与确证,方法学质控 标准曲线 质控样品 SOP、GCP,方法的可靠性,数据的可靠性,结论的可靠性,建立一个准确测定体内药物或代谢产物的分析方法。生物样本与化学分析不同，这里涉及体内内源性化合物和药物体内代谢物的干扰，故分析方法考证是提供准确的生物利用度数据的基础。,2.体内样品的特点,(1)血浆药物物浓度低 如血浆中药物浓度很低，通常是g级ng级pg级fg级，而每次取血量又有限，因此常规的化学分析方法是不适合的。 (2)干扰因素多 蛋白质，内源性化合物，代谢产物，无机盐。 (3)个体差异大 同一受试者服同一剂量的药物，两次服药后测出的血药浓度可能不一样，这主要是由于个体生理因素影响药物吸收。检
18、测线性范围大 (4)样本量大 几百上千个样本。,为什么是血浆 血浆、全血、血清、尿液等 反应药效是首要考虑因素 环孢素A，K+等检测就不一样 微生物法检测的是血清,一个容易忽略的问题,检测的是血浆中总的药量 游离型药物药物效应 药物-血浆蛋白结合 弱酸：白蛋白 弱碱：酸性糖蛋白药物的血浆蛋白结合率-个体差异 原因：不明确 后果：药效，ADRs,3.基本要求及其考证,灵敏度(Sensitivity)检测限(LOD)定量限(LOQ) 精密度(Precision) 准确度(Accuracy) 特异性(Specificity)选择性 样品的稳定性，冻融实验，QC样品 标准曲线线性范围 重现性 耐用性稳
19、定性,灵敏度：检测限和定量限,用定量限(Low Limit of Quantitation，LLOQ)表示。 LLOQ是标准曲线上的最低浓度，它是通过准确度，精密度和变异性求出的，一般用ng/ml或g/ml表示。 要求 a.LLOQ能检出Cmax的1/101/20浓度 b.能测出35个生物半衰期的药物浓度,定量限的确定,规定预期精度的检测和定量限 制备空白加样的样品， 进样5次， 计算每个浓度%RSD 精度对浓度作图 在预期精度的浓度=定量限,20%,检测限LOD,Limit of Determination S/N3,精密度(Precision)(重复性和重现性),精密度用批间、批内变异系数
20、（RSD）来表示，RSDS/X100% 选在标准曲线范围内的高、中、低三个浓度进行试验，其中一个为LOQ或接近LOQ，一个为中间浓度，另一个为标准曲线的上限附近。 每一浓度至少重复5次以上，连续3天 要求：RSD15，在LOQ附近可放宽到20。,高中低浓度,低浓度3*LLOQ 高浓度：7590%的标准曲线最高浓度,第一批 第二批 第三批,批内变异,批间变异,分析批,包括待测样品、适当数目的标准样品和质控样品的完整系列 一天可以多个分析批 一个分析批也多日 一般一日一批,选择性(selectivity) 特异性(Specificity),选择性是指当有干扰物存在时准确测量被测物的能力，如果一个方
21、法对一个物质有响应，且能和其他干扰的响应区分开来，则称此方法有选择性。 校正曲线过原点 准确度: If accurate - also selective,色谱 分辨率 峰形 不同柱 不同条件(temp. , mobile phase ) 不同检测器 光谱方法(offline,on-line) 如:HPLC/CE中的DAD,介质效应,由于样品中存在的干扰物质，对影响造成的直接和间接影响 质谱检测，重点考察介质效应，防止离子淬灭效应,准确度(Accuracy),测试结果和真值的一致程度 在真实浓度的80120%范围内， RSD20 可用回收率表示。为保证方法学的准确性，要求在标准曲线范围内至少选
22、高、中、低三个浓度，重复5次，回收率要大于70，达不到要求应说明原因。一般RSD15%在低浓度时RSD20。,标准曲线,a.应覆盖整个待测样本的浓度范围，不得外推； b.应由58个浓度水平组成； c.不一定是直线，可以是二项式回归；尽量简单 c.直线回归截矩不应明显偏离原点 d.相关系数要求：色谱法大于0.99，生物法大于0.98；,标准曲线的权重,宽范围直线回归，要权重回归，要么没有做实验，要么更改了数据(低浓度准确性要求)！,稳定性（stability）,样品的稳定性试验 常温放置试验 冰箱冷冻放置试验 样品反复冻融试验 贮备液的稳定性试验 样品提取后流动相稳定性试验！ 稳定的程度和标准依
23、据试验要求而定,重现性,分析方法相同的情况下，间隔一段短时间后测定结果的分散程度 不同实验室间测定结果的分散程度,耐用性（durability ） (SFDA没有要求),尽管有些分析方法在文献中已有阐述，但因仪器试剂以及操作条件不同，常常不能重复文献的方法，故任一新试验均应在自己的工作实验室内重新论证一下方法的可靠性。 这要求药代动力学实验室除需有训练有素的科研人员外，还应有较完善分析方法质量控制标准，并且实验室管理应符合GLP要求。,影响耐用性的因素,不同室温和湿度 不同经验的操作者 不同性能的仪器 试剂的不同供应商 不同批号的柱子,标准方法可以改变多少-HPLC,pH of mobile
24、phase:0.2units Concentration of salts in buffer:10% Ratio of components in mobile phase: for min or component 30% rel or 2% absolute whatever is larger, but max10% Wave length of UV is detector: 3nm Column length:70% Column inner diameter:50% Particle size:can be reduce dup to 50% Flow rate:50% Colu
25、mn temperature:20DegC,标准样品 在生物介质中加入已知量的分析物配制的样品，用于建立标准曲线，计算质控样品和未知样品中分析的浓度 质控样品 即QC样品，在生物介质中加入已知量的分析物配制的样品，用于监测生物分析方法的重现性和评价每一分析批中未知样品分析结果的完整性和正确性 标准样品和质控样品必须分两次配制！最好不同人配制,4、分析常用方法,(1)色谱法：HPLC，GC，HPTLC，GC-MS，LC-MS联用，特点：分离和定量同步进行，特异性好，灵敏度高。,“没有必要的科研仪器与设备，就根本谈不上科学的发展。”,中科院自然科学史研究所研究员阎康年科学文化评论上,色谱/质谱联用
26、技术的 相对适用范围,方法的建立,1、借鉴别人的方法 查阅文献 J Chromatography B 荷兰 Rapid Communications in Mass Spectrometry 加拿大 J Pharmaceutical and biomedical Analysis 美国 Biomedical chrogaography（？） 药学学报 药物分析杂志 中国临床药理学杂志 中国药科大学学报 中国临床药理学与治疗学杂志,2 根据药物的化学结构 分子的极性 ，酸碱性，稳定性 优先考虑色谱 检测器 质谱 紫外 荧光 电化学,样品的稳定性,-20大部分药物 -80 阿莫西林，阿司匹（pH）
27、等 加稳定剂：卡托普利等 立即测试：维生素C等(2个月可以做空白血浆，所以人体需要每天补充),样品预处理,液液提取 液固提取 沉淀蛋白 在线提取,色谱条件选择,色谱柱 流动相组成 pH值和缓冲盐 流速,内标选择,色谱行为接近 检测器响应相近 提取回收率相近,质谱条件,准分子离子 碱性化合物 (-NH2) (M+H)+酸性化合物 (-CO2H, -OH) (M-H)-,各种条件和参数进一步优化,选择性、灵敏度、线性关系、重现性 实际样品的预试验,其他因素,血浆蛋白结合 生物样品测试的安全防护(艾滋病毒，乙肝病毒-手套) 挥干有机溶剂：苯禁用,(2)光谱法，同位素法，免疫学方法,同位素法虽然灵敏度
28、高，但由于特异性较差，不作首选。采用该法应考虑： a.放射化学及化学纯度； b.标记物的稳定性； c.代谢产物的干扰。 可结合HPLC和TLC法联合应用。 免疫学方法如放免和酶免法，均可能存在药物代谢产物的交叉干扰，且试剂盒较难制备，所以不作首选。 环孢素A的检测采用TDX(偏振荧光免疫方法) ：HPLC和TDX差好几倍,(3)微生物学方法(抗生素),分析方法的质量保证体系,标准曲线和QC分别配置，QC不低于未知浓度的5%，且均匀分布在未知浓度检测全过程，最多允许1/3不同浓度的质控样品超限。 独立的质量保证人员 未知浓度样品的考核，一般同一受试者地样品在同一批内完成 建立一般性和特殊性的标准
29、操作规程 包括测试原始图和数据，包括QC样品 质量检查报告(内部文件，虽然方法不完美，但不影响方法的通过),实验药品的选择,受试样品 (1) 体外释放度，稳定性和含量合格； (2) 安全性符合要求； (3) 必须有主管部门的批文； (4) 受试制剂应为中试放大产品，经稳定性检查合格，报送生产的同批制剂。,临床批件样稿 国家药品食品监督管理局下属药品注册司颁发 原始编号，受理号，批件号 两年内实验必须开始，否则批件失效,参比制剂进行相对生物利用度研究时，首先应考虑选择国内已上市的相同剂型的市场主导制剂或被仿制的制剂作为标准参比制剂。只有在国内外没有相应制剂时，才考虑选用其它类型的不改变给药途径制
30、剂为参比制剂。 (好的处方特征),FDA参比制剂目录:orange book,FDA建议使用该报告中的药品进行等效评估 http:/www.fda.gov/cder/orange/default.htm,日本“薬品品質再評価” 工程,1998年起对已经上市的药物进行评价，出版再评价的药品目录（主要是难溶性药物，约860个）,主要手段是提高体外溶出标准，后期进行生物利用度试验比较 医療用医薬品品質情報集：只有上榜药品才有资格作为参比制剂 日本厚生省医薬安全局審査管理課,受试者条件,（1） 性别：男性。 （2） 年龄:一般1840 周岁，同一批受试者年龄不宜相差10 岁以上。 （3） 体重：正常受
31、试者的体重一般不应低于50kg。按体质指数(Body Mass Index , BMI)体重（kg）身高2（m2）计算，一般应在标准体重范围内。同一批受试者体重（kg）不宜悬殊过大。 （4） 受试者应经过全面体检，身体健康，无心、肝、肾、消化道、神经系统、精神异常及代谢异常等病史；体格检查示血压、心率、心电图、呼吸状况、肝、肾功能和血象无异常，避免药物体内过程受到疾病干扰。 （5） 为避免其他药物干扰，试验前两周内及试验期间禁服任何其他药物。 （6） 实验期间禁烟、酒及含咖啡因的饮料，或某些可能影响代谢的果汁等，以免干扰药物体内代谢。 （7） 受试者应无烟、酒嗜好。 （8） 精神状态：良好。
32、（9） 对本试验研究药物无过敏史者。 （10） 知情同意，志愿受试。获得知情同意书过程符合GCP规定。,比较药物制剂在人体内吸收速度和程度，受试者的选择应当尽量使个体间和体体内差异减到最小，降低试验的偶然变异，有助于突出制剂间的差异。,生理因素对药动学参数的影响,体重、年龄、肾功能对一级药动学参数的影响,体重对分布容积的影响公式,其中P为分配系数（脂溶性）；p为蛋白结合率；BW为体重(以g计算),性别差异,治疗周期性偏头痛的药物佐米曲普坦在男性与女性之间服用2.5mg或5mg佐米曲普坦的药动力学参数有明显差异。女性的平均Cmax和AUC值比男性高。在10mg较高剂量时差异更显著：6个健康女性得
33、数值（25.2ug/L和173.8 ug / L.h）几乎是6位健康男性（16ug/L和88.9ug/L.h）的2倍。,H1受体拮抗剂地洛他定，普萘洛尔，苯二氮卓类药物，维拉帕米，阿斯匹林，对乙酰氨基酚，利多卡因，氨茶碱，利福平等均有性别差异的报道。报道结果均为和男性相比，女性达峰浓度增加，AUC增加。可能是女性对药物的消除能力低于男性。,遗传因素代谢酶的多态性,口服酒石酸美多心安200mg 弱异喹胍代谢者(PM)浓度明显高于强异喹胍代谢者(EM) 代谢酶CYP2D6酶的缺陷造成PM,CYP2C9(代表药物：美芬妥因，苯二氮卓类，奥美拉唑) CYP2D6(最多，代表药物：异喹胍，普萘洛尔，奋乃
34、静、阿米替林、阿米夫胺，右美沙芬等) CYP2E1(毒理方面重要酶系，底物大多为致癌前体物和毒物前体物，药物包括氯唑沙宗，乙醇，对乙酰氨基酚) CYP3A4(阿普唑仑，西立伐他丁，环孢霉素，红霉素，三唑仑，硝苯地平),病理因素对药动学参数的影响,疾病往往是引起药物不同效应的主要原因。对许多药物来说，造成药物效应的差异的主要原因是药动学参数的差异,肝脏疾病对药动学参数的影响,1、肝硬化病人病情严重程度和氧化代谢酶和某些结合性酶活性的下降存在一定的相关关系，清除率下降。 2、肝硬化，白蛋白的合成减少，使药物的白蛋白结合率下降，导致分布容积增加，导致低清除率药物消除增加。 3、高抽提比的药物(肝脏代
35、谢该药物能力强)，肝硬化能导致生物利用度升高。 4、阻塞型黄疸药物消除减慢，尤其以胆道排泄为主要消除途径的药物。,肾功能不全对药动学参数的影响,肾功能减退病人的药物尿排泄通常会下降，下降程度取决于肾功能减退的程度。清除率降低特别是人工肾病人,比较药物制剂在人体内吸收速度和程度，受试者的选择应当尽量使个体间差异减到最小，降低试验的偶然变异，有助于突出制剂间的差异。 伦理学要求和试验要求发生矛盾怎么办？,赫尔辛基宣言 DECLARATION OF HELSINKI,52nd WMA General Assembly, Edinburgh, Scotland, October 2000 Note o
36、f Clarification on Paragraph 29 added by the WMA General Assembly, Washington 2002 Note of Clarification on Paragraph 30 added by the WMA General Assembly, Tokyo 2004,2000年赫尔辛基宣言相关要点,每一项涉及人体的生物医学研究，必须仔细评估对受试者可能预见到的危险性，并与可能预见的受试者和其他人的受益比较后方可进行。 关注受试者的利益，必须总是超过科学与社会的利益。 对涉及人体的试验，学术上的或社会的利益绝不应该优先于受试者的健
37、康 安慰剂的使用(抗生素不得使用安慰剂),伦理要求和实验要求,基于伦理考虑，雌激素类的药物应选择健康女性受试者。 如待测药物存在已知的不良反应，例如抗肿瘤药物中的烷化剂，可能带来安全性担忧，也可考虑选择患者作为受试者。 有强烈的首剂效应的药物也应选择病人。首剂效应系指首剂药物引起强烈效应的现象。,氯氮平具有耐受性。慢慢加大剂量，病人能够承受其治疗剂量，但是首剂即给予治疗剂量，病人会发生严重的不良反应。FDA建议病人治疗，一开始采用25 mg片剂的一半12.5 mg，一天一次或两次，然后剂量每天增加25-50 mg ，如果耐受良好，2周后才可以采用治疗300 to 400 mg每天。如果病人30
38、0 and 600 mg每天依然有良好的耐受性，可以持续增加剂量到600 and 900 mg每天，以获得最优疗效。最大给药剂量不得超过900 mg 每天。,在1996年的指导原则中，FDA建议氯氮平采用25 mg片剂的一半的剂量，以健康受试者为试验对象进行生物等效性实验。however, the safety concerns associated with the use of clozapine in healthy subjects are significant, and it is recommended that this practice not be continued. 2
39、005年初FDA对以前的指导原则进行了修订，规定,对涉及人体的试验，学术上的或社会的利益绝不应该优先于受试者的健康。 赫尔辛基宣言，是由于在纳粹时代残忍地进行人体医学试验（如用俘虏做活体高空试验、冷冻试验和克隆人试验等）而促成诞生的，长期以来一直被看作是临床研究伦理道德规范的基石。最新的宣言中规定：每一项涉及人体的生物医学研究，必须仔细评估对受试者可能预见到的危险性，并与可能预见的受试者和其他人的受益比较后方可进行。关注受试者的利益，必须总是超过科学与社会的利益。,试验设计方案,双交叉实验设计(最常用) 三交叉实验设计(食物影响等) 平行实验设计(长半衰期药物，特殊情况)） 重复的交叉实验设计
40、,双交叉实验设计,randomized two-period two-sequence two-formulation cross-over design,平行实验设计,将受试者随机（注意体重，年龄均一性）等分成两组，一组先服用受试制剂，后服用标准参比制剂；另一组先服用标准参比制剂，后服用受试制剂。即在同一受试者中于不同时期服用受试制剂和标准参比制剂(crossover design)生物利用度和生物等效性研究的数据的特征是个体差异大，对每位受试者都连续接受两次或更多次的处理，相当于自身对照，可以将制剂因素对药物吸收的影响与其他因素区分开来，减少了不同试验周期和个体间差异对试验结果的影响。,洗
41、脱期和后遗效应,两个周期至少要间隔药物7-10个半衰期，通常间隔离1-2周洗脱期washing period。设定清洗期是为了消除两制剂的互相干扰，避免上个周期内的处理影响到随后一周期的处理中:后遗(Carryover)效应。清洗期一般不应短于7 个消除半衰期。,后遗效应,清洗期不够长，第一轮服药在血液中的残留对第二轮产生干扰。存在不等性残留效应，第二轮数据就无效了,Advantage of cross over design Variability advantage due to correlation between observations from the same individu
42、al 个体内变异个体间变异 Disadvantages of cross over design Time of completion of study is longer Missing data can cause analytical headache Compliance can be difficult Possibility of carryover effect,三交叉实验设计,平行设计 长半衰期药物采用,Drugs with long half-lives,长半衰期药物采血可以截止到36h，这时候吸收已经基本停止，但是为了保险起见，FDA指导原则中规定的时间为72h。样本量可能
43、要增加,代谢性药物相互作用中,设计S在有和没有I的情况下的浓度。并没有一个确定的完全正确的研究方案。 随机交叉法（如，先，后，先，后） 单序列交叉法（如，先，后或反之） 平行设计（一组用另一组用） 还有以下可供选择的给药方案（S/I）： 单剂量单剂量，单剂量多剂量，多剂量单剂量，多剂量多剂量。 对此方案的选择包括对很多因素的考虑：是用于急性或慢性治疗；安全性考虑，包括这个药物是否是窄治疗窗药物；药动和药效的性质；需要评估其诱导和抑制作用。,重复的交叉实验设计 Replicated Crossover design,four-period，two-sequence， two-formulatio
44、n cross-over design,给药方案和给药剂量,药物剂量一般与临床剂量一致。有时血药浓度检测方法灵敏度有限，可适当增加剂量，但应以安全为前提设计剂量，不得超过最大临床剂量，以防止可能会给受试者带来不应有的不良反应。 受试制剂和参比制剂最好用等剂量，不能等剂量应说明原因，计算生物利用度时应作剂量调整(线性范围？),参比制剂：100mg/片，每日4次，每次2100mg，服药时间6：00、12：00、18：00、24：00，连续给药3日。采血时间：第24日晨6：00服药前采血一次，第4日于服药后0.5，1，1.5，2，3，4，5，6h采血。 受试制剂：200mg/粒，每日2次，每次220
45、0mg，服药时间6：00，18：00，连续给药3日。采血时间：第24日晨6：00服药前采血一次，第4日于服药后0.5，1，2，3，4，5，6，8，10，12h采血。,给药条件,受试者禁食过夜（10小时以上），于次日早晨空腹服用受试制剂或参比制剂，药物用250毫升温开水送服。服药后12小时以后方能饮水，4小时以后允许进统一饮食；受试者服药后避免剧活动，但不得卧位（特殊情况例外，如眩晕等）；取血应在临床监护室进行。(为什么),饮食因素,食物可能引起胃肠道的生理变化： 胃排空延迟 刺激胆汁分泌 pH改变 内脏血流量增加 最新的实验结果发现，脂肪能够抑制转运蛋白食物也可改变内脏新陈代谢情况并与药物发生
46、物理或化学上的相互作用 (四环素和牛奶同时服用，四环素和钙离子形成难溶性复合物，生物利用度降低；长期素食使部分代谢酶的表达受影响),Peptide Transporters,Transport di or tri peptides Critical role in the absorption of protein digestion products Driving force: proton gradient (secondary active transporter) Saturable and concentration dependent Pharmacological role:
47、mechanism for absorption of a variety of drugs peptidomimetics ( lactam antibiotics) ACE inhibitors, renin inhibitors, thrombin inhibitors, cephalosporins, bestatin,食物对吸收影响取决于,药物的理化性质（如脂溶性） 药物的药动性质（如吸收部位，吸收的速度、程度，首过效应） 药物成分从制剂中的溶出度 用餐和服药时间在刚用完餐马上服药时，食物对药物影响是最大的。食物的营养成分，液体含量，温度，热量可以影响到生理变化的程度，而这些生理变化
48、可以影响到药物的吸收 食物组成高热量、高脂肪、高密度的食物可能对BA有着最大的影响。,时间点的设计和血样采集,a. 取空白血样； b. 一个完整的血药浓度时间曲线应包括吸收相、平衡相和消除相； c. 每个相内应有取样点。（分布如下：吸收相、平衡相各23个点，消除相应有56个点），对于血药浓度时间曲线变化规律不明显的制剂，如缓释制剂，取样点应增加。15min达峰？ d. 采样期间至少应为35个半衰期或采样持续至Cmax的1/101/20以后。取样期间应考虑受试者的休息。 矛盾：点越多越准确受试者的休息、经济成本,时间点的设计和血样采集,以较少的采样，尽可能获取血药浓度经时曲线的变化形态信息，如峰
49、时间、峰浓度、拐点、变化趋势等 经验证明，对于m个参数的模型，采样点个数n至少为2m+1，例如二房室口服有5个待定参数，测11个点以上比较可靠。,血药浓度和药代动力学参数分析,主要参数： AUC、Cmax、tmax和t1/2 t1/2可采用计算机曲线拟合，也可以通过尾端曲线求算消除速率常数，t1/2=0.693/k Cmax、tmax一般采用实测值； AUC：梯形法计算，其中tn-的AUC用Ctn/k计算，且AUCn-应小于20% 建议同时给出其它参数如MRT等。 速度的表达(Ka的相关参数)，改变Ka后，tmax和Cmax都有变化 见excel文件,生物等效性评价的统计学方法,等效性判断的标准： 统计分析：多因素方差分析(必要条件，不是充分条件)双单侧T检验90置信区间 等效判断标准：AUC0t、Cmax,
