1、实验二 蠕虫学粪便检查法（二）一、 内容1 沉淀法（1）自然沉淀法（2）离心沉淀法2 锦纶筛兜集卵法3 幼虫培养法4 虫卵计数法（1）斯陶尔氏法（2）麦克马斯特氏法二、 参考资料1 蠕虫虫卵检查法（之二）（1）沉淀法：采用普通清水处理被检粪便，使虫卵沉淀集中，便于检查。本法适用于检查各种虫卵，而比重较大的虫卵，如吸虫卵，棘头虫卵等尤宜采用此法。本法根据需要和条件又可分为自然沉淀法和离心沉淀法。自然沉淀法取粪便约 510 克，放在干净的烧杯内，加水搅拌，充分混匀称悬浮液，然后用 40目铜丝筛过滤至另一干净量杯中，滤液静止 1015 分钟后，将上清液倒掉，再加水沉淀，再静止 1015 分钟，倒掉上
2、清液，如此反复多次，直至上清液澄清为止，把上清液倒掉，取沉渣做成涂片镜检。离心沉淀法取粪便 12 克，放在干净的小烧杯中，约加十倍量的水，充分混匀成悬浮液，再用 40 目钢丝筛过滤至另一干净的离心管中，放入离心机内，也可以用上法处理过的滤液倒入离心管中，放入离心机内，以 1500 转/分的速度离心 23 分钟，此时，因虫卵比重大，经离心后沉于管底，然后倒去上清液，取沉渣进行镜检。（2）锦纶筛兜集卵法：检查较大的虫卵时，虫卵直径再 60 微米以上，如片形吸虫、姜片吸虫、同盘科吸虫、日本分体吸虫等的虫卵，可取上述经 40 目铜丝筛过滤的滤液倒入 260 目的锦纶筛兜中过滤，反复用水冲洗，直到洗出液
3、体清澈透明为止，而后挑取兜中粪渣做抹片检查，可获得满意的结果。2幼虫培养法圆形目的线虫种类很多，其虫卵在形态和大小上都非常相似，镜检时很难区别，生前诊断时为了区别这些线虫的种类，常将含虫卵的粪便加以培养，待其中虫卵发育位第三期幼虫时，再行检查，根据第三期幼虫的形态进行鉴别，达到诊断的目的。最简单的方法是将待检的新鲜粪便塑成半球形，放在平皿中，并加少许水，如粪便已很稀，就不必加水，放在 2530温箱中（夏天在室温内）培养，根据具体情况，每天加少量水，使粪便保持一定的湿度，经 710 天，多数虫卵即可发育成第三期幼虫，并集中在皿盖上的水滴中，将幼虫吸出置载玻片上，放显微镜下检查。或将培养的幼虫连同
4、粪便一起用漏斗幼虫分离法（贝尔曼法）分离，取试管底下的沉淀物进行镜检，观察有无活动的幼虫存在。在搜集培养物进行幼虫分离的同时，还必须注意平皿壁周围的清理。因为有的第三期幼虫活动性很强，常常会离开粪便跑到潮湿的平皿壁上，因此除了注意检查平皿内的粪便以外，还须用水仔细冲洗平皿壁，将所得的液体和粪便一起倒入贝尔曼装置内，或单独用离心机分离后镜检。如果幼虫培养的目的不是为了诊断，而是为了科学研究，研究某种蠕虫或幼虫的生物学特性，那就必须事先将同种的虫卵或幼虫搜集在一起，放在平皿内，平皿内预先放好培养基，在 25-30温箱中进行培养，培养基可以用清水或生理盐水，但最好的培养基是无菌的粪便或粪汁，尤以粪汁
5、为好，因为粪汁培养虫卵或幼虫，可以直接将培养的虫卵或幼虫的平皿放在显微镜下，观察其发育情况。粪便或粪汁无菌的方法是在 100下煮沸消毒2 小时，然后用棉花过滤，再接种虫卵或幼虫，这样再观察过程中就比较清晰，容易鉴别。3.虫卵计数法：测定家畜每克粪便的虫卵数（E.P.G）本法主要用于生前判断某种消化道寄生虫的感染强度和某种药物的驱虫效果。例如，在治疗前 1 克粪便含有 1000 个虫卵，治疗后则减少到 100 个，那说明该药对某种寄生虫有一定的驱虫效果。当然这仅仅使一个大约的推断，因为粪便中的虫卵数目是随着寄生虫本身的年龄、雌虫的数目、是否其他寄生虫同时寄生以及家畜的年龄、体质、营养和气候条件的
6、影响等等因素的不同而有一定的差异。（1） 斯陶尔氏法（Stolls method）用自行标记有 56 毫升、60 毫升两个刻度的小三角烧瓶或大试管，先注入 56 毫升1/10N 氢氧化钠溶液（即 0.4%氢氧化钠水溶液） ，再加入待检粪便至 60 毫升处（即加入 4 克粪便） ，再加 10 个直径 3 毫米的小玻璃珠，盖上橡皮塞，振荡使粪便完全破碎混匀，然后很快用吸管吸取 0.15 毫升粪汁（内含粪便 0.01 克） ，滴于载玻片上，盖上2040 毫米的长盖玻片，在显微镜下计数虫卵，在计数时要顺序自盖玻片的一端数至另一端，每个视野不重复液也不漏掉，将所得的虫卵数乘以 100，即为 1 克粪便中
7、含有的虫卵数。为了获得正确的结果，须在每天的不同时间里检查三次，连续检查三天，然后取其平均数，这样可以减少误差。本法适用于大部分蠕虫卵的计数。（2） 麦克马斯特氏法（MeMasters method）此法需要特制的麦氏计数器（可以自制，计数室由二片载玻片制成，将其一片切去一条，使之较另一片窄一些，在较窄的玻片上刻以 1cm2 的方格二个，而后选取厚度1.5mm 的玻片切去小条垫于二玻片间，用玻璃黏合剂粘合，这样两玻片间每个方格的容量为 0.15cm3 ，即（0.15ml） 。方法：取粪便 2 克放入小三角烧瓶或其它玻璃容器内，加入饱和盐水 58 毫升，加入小玻璃珠 20 个，充分振荡，使成均匀粪液，用吸管吸取粪汁注入麦氏计数室里，置显微镜上，静置 12 分钟，然后在镜下计数 1cm2方格内的虫卵总数，求出两个刻度室中虫卵数的平均数，乘以 200 即为每克粪便中的虫卵数（每个方格中实际含原粪量是 0.152/600.005 克,故系数为 200）.本法只适用于可被饱和盐水浮起的各种虫卵。三、作业1. 检查蠕虫卵的方法由哪几种?根据检查目的,应怎样选用?为什么?2. 根据麦克马斯特氏法,写出你计数的结果.
