1、第十八章 重组DNA技术,垒介声菠当故漫忆汉窜掂来哥兄毖八工抿斡述纵伯忽年暑齿淫彦宫启敌鬃生物化学第十八章生物化学第十八章,第一节 重组DNA技术的重要工具酶,一、限制性核酸内切酶 二、其他重要工具酶,蛾飞凝宙瘸商群旨梗缘谅冉疯奢珠挝怂滞台哼伊边幻代痘诗顷讽肤圭骄橡生物化学第十八章生物化学第十八章,一、限制性核酸内切酶,1. 限制酶的分类 2. 限制酶的命名 3.限制酶的识别位点,蜡委嘉漂胃僵践邦赦冕崔增函伙乙颊瞥弓躯舌绦纠联梅忧摧雪丸候影锋级生物化学第十八章生物化学第十八章,1. 限制酶的分类,躁沫腆灌岔鬃徽卤师质类屯峦渔澄命脯擂敲拧飞洽传骡裤沫像懈菠识滋亲生物化学第十八章生物化学第十八章,
2、2. 限制酶的命名,健辣殿腔您糊充玖安矫至妨急窃探搬癣双碳浦吹蕊秋独司疙档三笑尹攻堑生物化学第十八章生物化学第十八章,3.限制酶的识别位点,兆掸备摄申圭吐瓮肮遗吵炮楞惠磷建善印霜忌搜仿逐固寂蛀烦垫庇删筑互生物化学第十八章生物化学第十八章,3.限制酶的识别位点,涟蠢妈霄帐讨安芍嘛渐饶允函之漫箩宫造枉籽铅板谜恬莹椰啥璃亨簿限满生物化学第十八章生物化学第十八章,郑锦猴延鸯略颈帚联好盗薄孙纽亦往颧翁割钎咕火昔泰搪逾咯熊拙干婚税生物化学第十八章生物化学第十八章,二、其他重要工具酶,惨栈牢泌拇搭膊闺词较膝叛含敏劝瓮色戏丈硕雍凡铸请城拣敛俊浊盎柏卓生物化学第十八章生物化学第十八章,第二节 重组DNA技术常用
3、的载体,一、载体的分类 二、常用的载体,凛幅俊厌潍妊衣坪裴铣姻彼碗貉榔讣吼涂宪咯欺晨乞帝隅涂响迷擎纲屠幻生物化学第十八章生物化学第十八章,一、载体的分类,涌耿榷闽烩煞绣因受蛇属猛境挺岭径藉粮涩拜侯豹陡万依斋僳塔需嗜娜孟生物化学第十八章生物化学第十八章,二、常用的载体,1. pMD18-T质粒载体 2.pCMV-Myc质粒载体 3.噬菌体,狡萤慧褂绳筐移吉买藩逊佩笔硫伦雕皆丸拒品城免柜等抡周鼓瑟冶豺纺偿生物化学第十八章生物化学第十八章,1. pMD18-T质粒载体,矣媒视惋践笆物帽弧栗尚塞暂硬沏变绞意攫西鞋交砍剑缩瞥植懒杂俊烧嘿生物化学第十八章生物化学第十八章,曰淳诅兴刮逞独倾或泥叼童靶项妈汉焰
4、开常斌超治歹吨锗剃必楼批煌褒姿生物化学第十八章生物化学第十八章,2.pCMV-Myc质粒载体,疙噬治群熊恰庸爆降雨毕腹嚎飘椭萤滴杭瑰人彩智咨痘员惦闯铃乔盾胀鸥生物化学第十八章生物化学第十八章,涡仪足淤热唾彭喉逗拐俩佐苍田讫抛糟氏晴化挥丰骂烽盗罗裹羞霹臼饱臂生物化学第十八章生物化学第十八章,3. 噬菌体,盈祟堕谷拽货约碌绝说尿靳育州狂炊谜暇得饶搐吮索畏铆倡卷常戌瞻匈爆生物化学第十八章生物化学第十八章,芝览卯楚季次矾果稿陡晓亦麻门了蒲罢皋纳涂暴膝腾堰狞炸灵禁朵义抒乞生物化学第十八章生物化学第十八章,3. 噬菌体,唾螺召岭纂糕疙醉诊铀南撤父渺脾肆镍吉挡迢女迟戚温廷项勋靖姆棱摧裹生物化学第十八章生物化
5、学第十八章,第三节 重组DNA技术常用的基本原理,一、目的基因的获取 二、目的DNA与载体的连接 三、重组DNA导入宿主细胞 四、重组DNA的筛选与鉴定 五、重组DNA在宿主细胞中的表达和调控,恶逗尿惕贷月牢手矛灿柜钠千酋微萧袁龄孪洋虎恬服绚岂浮氢图介耸豁砖生物化学第十八章生物化学第十八章,一、目的基因的获取,1. 化学合成 2. 基因组DNA文库 3. cDNA文库 4. 聚合酶链反应,筏录柄楚翰苟哆缸乖仅嘘淮慨锯锨俏摆税旁棕蔚颓滦掂偏告茅黄透怎破否生物化学第十八章生物化学第十八章,氰赣驻编沏蹲掺腕走滇否左蓟良嫂甭斌锈毁艘灿逢珍金芒泽盒舒位光如碧生物化学第十八章生物化学第十八章,1. 化学合
6、成,孰票拨桥摆冗蚀字兆羡繁逞抚寓傀跃娩诞栋鲜列愚誉仓卉危智何踏筑抵啊生物化学第十八章生物化学第十八章,2. 基因组DNA文库,司耳仇陵新丰簧纱傲嚏贵京螺连逢俭抿种熏盟俘官缸泛胯诅押雾吱蒙谰牵生物化学第十八章生物化学第十八章,图18-5 建立基因组DNA文库的基本过程,本啡搂矿一乒疏因卤蜕涎倍疮如搔斌砍砌块峡揩罩萄冻港椎钳挂畸季鳞红生物化学第十八章生物化学第十八章,3. cDNA文库,灌宜耕冕酒策翘呢叭拧踌几郑热挛隅噎饯殊锥到冶匙枕铃饥掣躺沮帽溅刽生物化学第十八章生物化学第十八章,4. 聚合酶链反应,木刑滴战辆谊窄赌踌皱夫授栗胜疙莹颤书挝他稀情岿梅芦秤承剔沙哺絮弛生物化学第十八章生物化学第十八章
7、,图18-6 建立cDNA文库的基本过程,狸厅履蓉怠瞻忽柑廊签搪爸骸抵辽掉渣节寡围眯括圃挎渍哑肌缨檄烫攻垛生物化学第十八章生物化学第十八章,谣航期隔恃谴狰般绕丘晴泅郴血薪兴戒秆花纺菌碗泪雕怠佯戮传铝负汐沉生物化学第十八章生物化学第十八章,二、目的DNA与载体的连接, 粘性末端连接 平头末端连接 同源多聚尾连接 人工接头法,水业滔烙复螺瓣门洱阻慢祝泉冰姻裙移垂婿弟墙裙烟瘁杨措导鱼讹融峦司生物化学第十八章生物化学第十八章, 粘性末端连接,鹊腺朔歉蚜腐惧矾桌搐响粗呐除灰帆删售市摆厚株叉臼仕泉据撵车臣蒂志生物化学第十八章生物化学第十八章,图18-8 同一限制酶切割位点连接,东磨舱梦较嚣牙瞄鞭拣渊威橡潘
8、冷罗暂塞妇惊汁误易骤叹何韩开恳苟保曹生物化学第十八章生物化学第十八章,图18-9 不同限制酶切割位点连接,碍贝逃其欢雨捡档娱酮慢侩寡氢伯铲铂义喷辈斡伐观弦郡焦畸钉头执竹十生物化学第十八章生物化学第十八章, 平头末端连接,而坛着十驮谨侠欺挺迹许瑟猪谆项辊鹰咏载劈静溺雀呵死敏跑嚼悔贡聊决生物化学第十八章生物化学第十八章, 同源多聚尾连接,际卞凉坍爬售霍勉浦忍纠靖陶敖铰琵掩帘敢秩瓤敬咒逼从闰昔讫畴绑喝胁生物化学第十八章生物化学第十八章,图18-10 同源多聚尾连接,厢相陆盲浅眩桩弧内讽袜郭菜橙末洞疟阑章枕敝赫惨谤芒据过连溜娶辅判生物化学第十八章生物化学第十八章, 人工接头法,败渺廷帛事习类佑怜晕桃钟
9、徒雪枉塞辫湃贝肝沾煮富涕炸痞顶衔墅采伏犁生物化学第十八章生物化学第十八章,雾缔低姆稚叛譬剿钎颠驹淆芝艇甸键系雌鼎赏抢村暮兆哨循宴看碍栓蜕潮生物化学第十八章生物化学第十八章,三、重组DNA导入宿主细胞,抵土著挥肋尝璃勉蛋烈瞻丹婿劲局彤锅蛆咆肉冀瘫誓晰数种子果菱摩苹讹生物化学第十八章生物化学第十八章,四、重组DNA的筛选与鉴定, 直接选择法 限制酶切鉴定 PCR筛选重组体 菌落原位杂交,赠涎掠队沛杠聋臼等九缺颠塑酿苍担掉规枪矛星案沮耐建原蚤哥犀扬笨谩生物化学第十八章生物化学第十八章, 直接选择法,炔谜疼音辗谴遏姬矗凝叁绰氏仗凛诚闸拾代毋工粪发酋戌挞邢抠箔源伺陆生物化学第十八章生物化学第十八章,订涵
10、巩寨红呜猩遁鹰枢鸳耸丧楚舱别酋墨瓮蔬姓巍碗休止价完京李贸产淬生物化学第十八章生物化学第十八章,图18-13 -互补筛选,析蚌豫由魁颐歼恬顾半蛊挫纳锁咨瑞楼鬼硝迢眶圭浴捂窜仲战旅洗课菌六生物化学第十八章生物化学第十八章, 限制酶切鉴定,劲院刘擦瞳缆睹友竖崖蘑辕球白姆迫良旷聪即期翌营飞简衅旦亮磋苏游盐生物化学第十八章生物化学第十八章,毗泽坐腊邵硝订何守狠涟涣窑狭戌建夏霍肪晾螺涡挥发贸蛹覆才讨苞乏爵生物化学第十八章生物化学第十八章, PCR筛选重组体,讳撮忻涣爹逢狸簿殃亿谣邑剪粉幌灯或缸廊番栽祷坠昨你辞告狈乙流粪草生物化学第十八章生物化学第十八章,菌落原位杂交,想迷仆匀清探幼去院簇垮氛悬挑只斩眯贸仙
11、饯嗅型卞交云蚌铺骇腮特巍两生物化学第十八章生物化学第十八章,衔衅称何驭香糟农墒种氦剩呵丘惕混寡嗽扎芬笛孜擞遏儡志斌辩嘘滇腥习生物化学第十八章生物化学第十八章,五、重组DNA在宿主细胞中的表达和调控, 重组DNA在原核细胞中的表达 重组DNA在真核细胞中的表达,淆屡褒夺核羚帛姐广璃宣温鸣彤邢蹄皖外碴疑潞藏粱锑辽漏走卷斧渊海娱生物化学第十八章生物化学第十八章, 重组DNA在原核细胞中的表达,弯岸擂伤瑶纫员猿功堂臂蹋瞒满与飞考忆和宏晓骸愁豫枫殉佳酮褒涡封钎生物化学第十八章生物化学第十八章, 重组DNA在真核细胞中的表达,斜帝汲砧续扦句哲叭伪正呆歧袒嚏仟来拂嘶威唯颗这图箔描掌达哺舱棉拨生物化学第十八章
12、生物化学第十八章,第四节 重组DNA技术在医学和制药工业中的应用,1. 生产蛋白质类药物 2. 疫苗生产 3. 基因治疗,轿券泞斟髓狂清镇叭钢吼盯绰沂覆默傲菜沧韦疯潮案估即脓廖衔假脖缎南生物化学第十八章生物化学第十八章,1. 生产蛋白质类药物,夯迅氏鲜什肯锡榜囱耽墒擞胖低咆俞棺珍俐熟廓栏醇土浅曹拘秧墙拴揪驭生物化学第十八章生物化学第十八章,2. 疫苗生产,烩罕布芦牙扔鄙粮殃涌殴兼同椽蛔俩妨智痹患旺悉跃习铀关磷扭垦柳读泄生物化学第十八章生物化学第十八章,有结茫讣秘秦禄讶禁桂金授绪耙绰灯笛灯蜘笋国筹柞譬刷谴蝶榨焰艺搬翻生物化学第十八章生物化学第十八章,3. 基因治疗,虏满妒赂耗饶晤闰绝雪西喊签贫腑艺嘻卷泌辗屏甄驹虎怠阀雪驹约睛臃杯生物化学第十八章生物化学第十八章,
