ALK1在非小细胞肺癌组织中的表达及其临床意义.pdf

1、暨 南 大 学 硕 士 学 位 论 文题 名 （ 中 英 对 照 ） ：ALK1 在 非 小 细 胞 肺 癌 组 织 中 的 表 达 及 其 临 床 意 义Expression of Alk1 in non-small cell lung cancer and its clinicalsignificance作 者 姓 名 ： 刘 丹指 导 教 师 姓 名及 学 位 、 职 称 ： 吴 伟 东 医 学 博 士 副 主 任 医 师学 科 、 专 业 名 称 ： 外 科 学 （ 心 胸 外 科 学 ）学 位 类 型 （ 学 术 学 位 /专 业 学 位 ） ： 专 业 学 位论 文 提 交 日 期

2、 ： 2 0 1 6 年 0 4 月 1 2 日论 文 答 辩 日 期 ： 2 0 1 6 年 0 5 月 3 1 日答 辩 委 员 会 主 席 ： 李 洪 胜 教 授论 文 评 阅 人 ： 盲 审 1 ， 盲 审 2学 位 授 予 单 位 和 日 期 ： 暨 南 大 学 2 0 1 6 年 0 6 月万方数据独 创 性 声 明本 人 声 明 所 呈 交 的 学 位 论 文 是 本 人 在 导 师 指 导 下 进 行 的 研 究 工 作 及 取 得 的 研 究成 果 。 除 了 文 中 特 别 加 以 标 注 和 致 谢 的 地 方 外 ， 论 文 中 不 包 含 其 他 人 已 经 发 表

3、或 撰 写过 的 研 究 成 果 ， 也 不 包 含 为 获 得 暨 南 大 学 或 其 他 教 育 机 构 的 学 位 或 证 书 而 使用 过 的 材 料 。 与 我 一 同 工 作 的 同 志 对 本 研 究 所 做 的 任 何 贡 献 均 已 在 论 文 中 作 了 明 确 的说 明 并 表 示 谢 意 。学 位 论 文 作 者 签 名 ： 签 字 日 期 ： 年 月 日学 位 论 文 版 权 使 用 授 权 书本 学 位 论 文 作 者 完 全 了 解 暨 南 大 学 有 关 保 留 、 使 用 学 位 论 文 的 规 定 ，有 权 保 留 并 向 国 家 有 关 部 门 或 机 构

4、 送 交 论 文 的 复 印 件 和 磁 盘 ， 允 许 论 文 被 查 阅 和 借阅 。 本 人 授 权 暨 南 大 学 可 以 将 学 位 论 文 的 全 部 或 部 分 内 容 编 入 有 关 数 据 库 进行 检 索 ， 可 以 采 用 影 印 、 缩 印 或 扫 描 等 复 制 手 段 保 存 、 汇 编 学 位 论 文 。（ 保 密 的 学 位 论 文 在 解 密 后 适 用 本 授 权 书 ）学 位 论 文 作 者 签 名 ： 导 师 签 名 ：签 字 日 期 ： 年 月 日 签 字 日 期 ： 年 月 日学 位 论 文 作 者 毕 业 后 去 向 ：工 作 单 位 ： 电 话

5、：通 讯 地 址 ： 邮 编 ：万方数据IALK1在 非 小 细 胞 肺 癌 组 织 中 的 表 达 及 其 临 床 意 义中 文 摘 要研 究 背 景 ：肺 癌 是 世 界 上 是 最 常 见 的 肿 瘤 之 一 ， 也 是 恶 性 肿 瘤 中 死 亡 率 最 高 的 肿 瘤 ， 肺 癌 在全 球 的 死 亡 率 和 发 病 率 都 呈 逐 年 上 升 的 趋 势 ， 其 中 ， 排 在 恶 性 肿 瘤 发 病 率 和 死 亡 率 第一 位 的 是 男 性 肺 癌 ， 而 女 性 在 这 一 方 面 均 低 于 男 性 ， 据 统 计 ， 我 国 每 年 约 有 超 过 6 0多 万 的 人

6、 因 肺 癌 而 死 亡 ， 严 重 威 胁 着 我 国 人 民 的 生 命 健 康 及 生 活 质 量 。 目 前 肺 癌 的 主要 治 疗 手 段 包 括 手 术 切 除 、 常 规 药 物 化 疗 、 放 射 性 治 疗 ， 而 近 些 年 来 基 因 的 分 子 靶 向药 物 治 疗 也 逐 渐 成 为 了 肺 癌 治 疗 的 热 点 ， 并 且 取 得 了 较 大 的 成 功 ， 基 因 靶 向 治 疗 的 药物 也 逐 一 面 世 ， 甚 至 已 经 研 发 到 了 第 三 代 ， 但 这 些 新 研 发 的 药 物 主 要 针 对 的 是 同 一 类基 因 ， 如 表 皮 生 长

7、 因 子 受 体 （ epidermal growthfactorreceptor,EGFR） 、 棘 皮 动 物 微管 样 蛋 白 4-间 变 淋 巴 瘤 激 酶 （ EML4-ALK） 等 ， 一 旦 这 些 基 因 某 些 位 点 突 变 ， 产 生 耐药 性 ， 急 需 开 发 新 的 基 因 靶 向 药 物 ， 所 以 这 就 迫 使 我 们 要 寻 找 一 些 新 的 基 因 突 破 口 ，开 发 探 索 新 的 、 有 效 的 分 子 靶 点 从 而 完 善 肿 瘤 的 靶 向 治 疗 。目 的 :从 蛋 白 和 mRNA 水 平 探 讨 TGF-beta 信 号 通 路 中 的

8、 ALK1 在 非 小 细 胞 肺 癌(non-small celllungcancer， NSCLC)细 胞 组 织 中 的 表 达 情 况 ， 并 探 索 ALK1的 mRNA及 其 蛋 白 在 非 小 细 胞 肺 癌 细 胞 中 的 临 床 意 义 。方 法 :采 取 Western blot、 PCR 技 术 检 测 不 同 非 小 细 胞 肺 癌 细 胞 系 和 正 常 细 胞 系 间ALK1 表 达 量 情 况 ， 同 时 选 取 了 43例 非 小 细 胞 肺 癌 患 者 的 临 床 组 织 标 本 ， 利 用 PCR技 术 检 测 标 本 中 肺 癌 组 织 和 癌 旁 组 织

9、 中 ALK1的 mRNA表 达 情 况 ， 得 出 其 在 非 小 细胞 肺 癌 及 癌 旁 组 织 中 的 差 异 表 达 ， 并 分 析 ALK1 的 表 达 水 平 与 非 小 细 胞 肺 癌 临 床 病 理因 素 之 间 的 关 系 。结 果 ： 实 时 荧 光 定 量 PCR结 果 提 示 ， 在 肺 癌 A549和 H125细 胞 系 中 ， ALK1 基 因 的相 对 表 达 量 分 别 为 0.6330.068 和 0.5980.022， 较 正 常 组 BEAS-2B 细 胞 系 相 比（ 0.2920.014） ， ALK1基 因 表 达 量 较 正 常 组 显 著 上

10、调 （ P0.05） 。结 论 ： 相 对 于 正 常 肺 组 织 ， ALK1mRNA 及 蛋 白 在 非 小 细 胞 肺 癌 组 织 中 特 异 性 上 调 表达 ， 表 明 这 些 基 因 是 通 过 提 高 蛋 白 质 总 量 来 降 低 对 癌 细 胞 的 抑 制 作 用 ， 从 而 促 进 肿 瘤肺 发 生 发 展 。 同 时 可 以 推 测 ALK1 基 因 可 以 作 为 非 小 细 胞 肺 癌 分 子 靶 向 治 疗 的 一 个潜 在 靶 点 或 者 血 清 学 肿 瘤 标 志 物 。【 关 键 词 】 非 小 细 胞 肺 癌 ； TGF-beta信 号 通 路 ； 实 时

11、荧 光 定 量 PCR， 蛋 白 质 印 迹 ；ACVRL1； ALK1； 靶 向 治 疗万方数据IIIExpressionofAlk1innon-smallcelllungcanceranditsclinicalsignificanceAbstractBackground：Lungcancerisoneofthemostcommoncancer intheworld， anditsmortalityis alsothehighest among the malignant tumors.It is a trend that the mortality and morbidity of lun

12、gcancer increase gradually year by year.Male patients rank the first of the highest mortalityand morbidity of malignant tumors,while female patients are less than male in this regard.According to statistics,about more than 600,000 people die from lung cancer in Chinaannually,which is a serious threa

13、t to life and health of our people.The main treatment forlung cancer currently include surgery, conventional chemotherapy and radiationtherapy.The molecular targeted gene therapy of lung cancer has become a heated topicrecently,which has achieved great success.Gene-targeted drugs are available one b

14、yone,and even has developed to the third generation.But these newly developed drugs areprimarily for the same kind of genes such as EGFR, anaplastic lymphoma kinase, etc.Once these genetic locus mutate and get drug resistance,new gene-targeted drugs are onurgent need.Because of this,we are forced to

15、 look for some new geneticbreakthrough,develop and explore new and effective molecular targets in order to improvetumortargetingtherapy.Objective:To research the expression characteristics of ALK1 in TGF-beta signaling pathway ofnon-small cell lung cancer (NSCLC) tissues from protein and mRNAlevels,

16、 as well as toexploretheeffect andClinicalSignificanceintheoccurrenceofNSCLC.Methods:The Real-time quantitative-PCR and western blot method were used to detect the geneand protein expression of ALK1 in different non-small cell lung cancer cell Lines , andALK1 expression levels in 43 cases of NSCLC i

17、s determined by quantitative real-timepolymerase chain reaction (qRT-PCR) and analyze the relation of clinicopathologic万方数据IVfeatures with ALK1 expression in NSCLC patients. So as to observe the difference innon-small celllungcancerandnormal lungcells.Results:The result of ALK1 gene expression by Re

18、al-time PCR shows that ALK1 geneexpression in cell lines of A549(0.6330.068) and H125(0.5980.022) is significantlyhigherthanthecorrespondingnormalcell lines（ 0.2920.014） ,Andthewesternblot alsoshowed that the ALK1 protein is significantly higher than the normal one.,the ALK1relative expression inA54

19、9and H125cell lines is 2.46and2.12times of normal cell lines.ALK1 gene in 72.1%（ 31/43） shows high expression in NSCLC than the correspondingpara-carcinoma tissue. Meanwhile, ALK1 upregulated in NSCLC with cell differentiationdegree（ P=0.033） anddistant metastasis（ P=0.031） andTNMstage(P=0.000)arecl

20、oselyrelated.And thereis no correlationwithpatientsgender,age, tumorsize andnumber,CEAlevelandlymphnodemetastasis.Conclusions：The expression of ALK1 is up-regulated in NSCLC tissues ,Indicated that these genesreduce the Inhibition of cancer cells by increase the amount of protein,So the highexpressi

21、on of ALK1 in TGF-beta signaling pathway has Close relationship with theNSCLC, Providing a new underlying direction of targeted therapy or being a new tumormarkerinserumfortheNSCLC.Key words：NSCLC； TGF-betasignalingpathway； quantitativereal-time polymerasechain reaction(qRT-PCR)； westernblot； ACVRL1

22、； Alk1； targetedtherapy万方数据V目 录中 文 摘 要 （ ）英 文 摘 要 （ ）目 录 （ ）第 一 章 前 言 （ 1）第 二 章 实 验 方 法 和 材 料 （ 5）2.1RT-PCR 法 测 定 ALK1 mRNA 表 达 量 （ 5）2.2westernblot法 测 定 ALK1 蛋 白 表 达 量 （ 10）2.3 PCR法 检 测 肺 癌 及 癌 旁 组 织 中 ALK1 表 达 情 况 （ 13）第 三 章 实 验 结 果 （ 16）3.1RT-PCR 检 测 ALK1 mRNA 表 达 水 平 的 比 较 （ 16）3.2Westernblot法 检

23、 测 ALK1 蛋 白 相 对 表 达 量 （ 18）3.3ALK1 基 因 在 肺 癌 及 癌 旁 组 织 标 本 中 的 表 达 情 况 （ 20）3 .4 ALK1 基 因 表 达 水 平 与 肺 癌 临 床 病 理 因 素 之 间 的 相 关 性 （ 21）第 四 章 讨 论 （ 22）第 五 章 结 论 （ 27）参 考 文 献 （ 28）部 分 缩 略 词 （ 32）在 学 期 间 发 表 论 文 （ 33）致 谢 （ 34）万方数据暨 南 大 学 硕 士 学 位 论 文 ALK1 在 非 小 细 胞 肺 癌 组 织 中 的 表 达 及 其 临 床 意 义1第 一 章 前 言肺 癌

24、 是 呼 吸 系 统 中 最 常 见 的 恶 性 肿 瘤 ， 发 病 率 居 恶 性 肿 瘤 中 第 一 位 ， 近 些 年 来 ,随着 工 业 化 发 展 ， 环 境 污 染 日 益 加 重 ,世 界 各 国 肺 癌 的 发 病 率 和 死 亡 率 都 有 逐 年 递 增 的 趋向 1,尤 其 是 在 中 国 等 发 展 中 国 家 尤 为 明 显 2-3， 世 界 卫 生 组 织 曾 报 道 ， 2015 年 ， 中 国 约有 280多 万 人 死 于 各 种 恶 性 肿 瘤 ， 平 均 每 天 死 亡 约 7500 人 ， 其 中 肺 癌 占 近 30%。 肺 癌 患者 中 男 性 发

25、病 率 及 死 亡 率 均 占 所 有 恶 性 肿 瘤 中 的 第 一 位 ， 女 性 发 病 率 占 第 二 位 ， 死 亡 率也 占 第 二 位 ； 在 所 有 肺 癌 中 ， 非 小 细 胞 肺 癌 占 绝 大 部 分 ， 约 占 80%以 上 ， 并 有 上 升 的 趋势 ， 是 恶 性 肿 瘤 中 增 幅 最 大 的 一 种4.肺 癌 的 发 病 机 制 目 前 尚 未 完 全 明 确 ， 但 大 量 国 内 外研 究 报 道 证 明 ， 引 起 肺 癌 最 主 要 的 死 亡 原 因 是 肺 癌 的 侵 袭 性 转 移 5， 这 也 是 当 今 肺 癌 治疗 的 主 要 侧 重 点

26、 及 难 点 。 所 以 ， 肺 癌 的 治 疗 及 早 期 控 制 逐 渐 成 为 了 世 界 各 国 广 泛 关 注 的问 题 ， 当 前 ， 肺 癌 除 了 常 规 治 疗 方 法 外 ， 近 些 年 来 基 因 的 靶 向 治 疗 持 续 成 为 肿 瘤 治 疗 的热 点 ， 而 且 取 得 了 较 大 的 成 功 ， 然 而 即 使 随 着 这 些 新 技 术 、 新 肿 瘤 药 物 的 不 断 开 发 利 用 ，肺 癌 的 5年 生 存 率 仍 偏 低 ， 约 15%， 复 发 率 居 高 不 下6-7。 随 着 肿 瘤 发 病 机 制 研 究 的 不 断深 入 ， 分 子 靶 向

27、 治 疗 已 经 取 得 了 显 著 疗 效 ， 美 国 临 床 肿 瘤 学 会 （ American Society ofClinical Oncology,ASCO） 大 会 也 曾 宣 布 肿 瘤 诊 疗 已 经 进 入 分 子 靶 向 治 疗 的 时 代 ， 然 而目 前 这 些 靶 点 的 分 子 抑 制 剂 药 物 有 限 ， 治 疗 上 仍 受 到 局 限 ， 因 此 ， 迫 切 需 要 我 们 开 发 探索 新 的 、 有 效 的 分 子 靶 点 从 而 完 善 肿 瘤 的 靶 向 治 疗 。我 们 利 用 网 络 数 据 库 检 索 非 小 细 胞 肺 癌 样 本 mRNA

28、表 达 检 测 基 因 芯 片 数 据 ， 筛 选出 差 异 表 达 基 因 ， 并 开 展 GO及 pathway富 集 分 析 ， 从 中 筛 选 得 到 非 小 细 胞 肺 癌 中 1557个 表 达 下 调 基 因 （ logFC2,P3） ：ALK1/ACVRL1 基 因 qPCR 扩 增 引 物Gene Primer Sequence(5-3) Tm LengthACVRL1 ForwardReverse CGAGGGATGAACAGTCCTGGGTCATGTCTGAGGCGATGAAG 61.760.5 97bpGAPDH ForwardReverse AACGGATTTGGTC

29、GTATTGGGCCTGGAAGATGGTGATGGGAT 60.0 211bp（ 2） 实 时 荧 光 定 量 PCR 反 应反 应 体 系 的 配 制 ， 反 应 参 数 参 考 TaKaRa SYBR Premix ExTaq II (Perfect RealTime)试 剂 盒 说 明 进 行 ， Real Time PCR 的 扩 增 曲 线 和 融 解 曲 线 应 用 Bio-Rad CFX96Real-Time PCRSystem的 操 作 方 法 进 行 。qRT-PCR反 应 体 系 (20ul):万方数据暨 南 大 学 硕 士 学 位 论 文 ALK1 在 非 小 细 胞

30、肺 癌 组 织 中 的 表 达 及 其 临 床 意 义9试 剂 使 用 量 （ l）SYBRPremixExTaqTM （ 2） 10.0PCRForwardPrimer（ 10M） 0.8PCRReversePrimer（ 10M） 0.8cDNA 模 板 2dH2O 6.4Total 20注 ： 反 应 液 配 制 在 冰 上 进 行Bio-RadCFX96 Real-TimePCR扩 增 标 准 程 序 参 数 如 下 ：(3)PCR 产 物 的 定 量取 5l阳 性 标 准 品 ， 稀 释 后 ， 制 备 5 个 标 准 品 梯 度 。 在 每 检 测 细 胞 内 mRNA 时 也要

31、同 时 检 测 所 制 备 的 梯 度 标 准 品 ， 绘 制 曲 线 并 计 算 表 达 量 。 以 灭 菌 双 蒸 水 作 为 阴 性 指 控标 准 品 。 以 GAPDH 为 内 对 照 ,荧 光 定 量 PCR 检 测 各 基 因 mRNA 的 表 达 ,检 测 各 模 版 的Ct值 ， 以 基 因 扩 增 产 物 与 内 参 GAPDH基 因 扩 增 产 物 的 差 值 及 2的 差 值 次 方 代 表 各 基 因在 各 样 本 中 的 表 达 量 。 即 CT=CT目 的 基 因 -CT内 参 基 因 ； 基 因 的 相 对 表 达 量 =2- CT。每 组 实 验 重 复 3次

32、,最 后 取 平 均 数 做 最 后 的 实 验 结 果 。万方数据暨 南 大 学 硕 士 学 位 论 文 ALK1 在 非 小 细 胞 肺 癌 组 织 中 的 表 达 及 其 临 床 意 义1 02.1.3.统 计 学 分 析本 实 验 所 得 数 据 均 用 均 数 标 准 差 (xs)表 示 ， 运 用 统 计 软 件 SPSS13.0进 行 统 计 分析 ， 各 基 因 在 肿 瘤 以 及 正 常 组 织 中 mRNA水 平 的 表 达 均 数 采 用 t检 验 分 析 比 较 ， 检 验 水准 =0.05， 以 P0.05， 见 表 4） 。表 4： ALK1基 因 表 达 水 平

33、与 肺 癌 临 床 病 理 因 素 之 间 的 关 系ALK1 表 达 上 调临 床 病 理 因 素 病 例 数 是 （ %） 否 （ %） 2值 P值性 别男 30 21（ 70%） 9（ 30%） 0.009 0.925女 13 10（ 76.3%） 3（ 23.1%）年 龄 60 23 18（ 78.3%） 5（ 21.7%） 0.935 0.33460 20 13（ 65%） 7（ 35%）分 化 程 度高 -中 分 化 27 23（ 85.2%） 4（ 14.8%） 4.557 0.033低 分 化 16 8（ 50%） 8（ 50%）肿 瘤 大 小 3cm 15 9（ 60%） 6

34、（ 40%） 1.674 0.1963cm 28 22（ 78.6%） 6（ 21.4%）肿 瘤 结 节单 个 23 16（ 69.6%） 7（ 30.4%） 0.157 0.692多 个 20 15（ 75%） 5（ 25%）CEA值升 高 30 22（ 73.3%） 8（ 26.7%） 0.000 1.000正 常 13 9（ 69.2%） 4（ 30.8%）远 处 转 移有 12 12（ 100%） 0 ( 0% ) 4.663 0.031无 31 19（ 61.3%） 12（ 38.7%）淋 巴 结 转 移有 22 14（ 63.6%） 8（ 36.4%） 0.856 0.355无 2

35、1 17（ 81%） 4（ 19%）TNM分 期I-II 期 18 6(33.3%) 12(66.7%)19.923 0.000III-IV 期 25 25（ 100%） 0 ( 0% )万方数据暨 南 大 学 硕 士 学 位 论 文 ALK1 在 非 小 细 胞 肺 癌 组 织 中 的 表 达 及 其 临 床 意 义2 2第 四 章 讨 论在 世 界 范 围 内 ， 死 亡 率 最 高 的 恶 性 肿 瘤 仍 然 是 肺 癌 ， 肺 癌 的 新 发 患 者 每 年 大 约 有 160万 ， 死 亡 约 有 140万 2 4 ， 其 中 绝 大 部 分 是 非 小 细 胞 肺 癌 。 随 着

36、医 疗 水 平 的 不 断 进 步 和 诊疗 水 平 的 不 断 提 高 ， 越 来 越 多 的 肺 癌 患 者 被 早 期 发 现 、 早 期 诊 断 及 早 期 治 疗 ， 但 是 由 于术 后 患 者 肺 癌 的 不 断 复 发 、 转 移 以 及 浸 润 所 引 起 的 肿 瘤 恶 病 质 使 得 肺 癌 患 者 的 预 后 仍 然比 较 差 ， 5年 生 存 率 仍 然 相 对 较 低 2 5 。2015 年 1 月 份 ， 美 国 提 出 了 一 个 新 的 概 念 ， 即 精 准 医 疗 计 划 （ Precisionmedicineinitiative） ， 意 味 着 精 准

37、 医 疗 时 代 的 到 来2 6 -2 7 ， 在 非 小 细 胞 肺 癌 方 面 ， 所 谓 精 准 医 疗 计划 就 是 把 研 究 重 点 转 为 基 于 肿 瘤 分 子 特 性 的 分 子 靶 向 研 究 治 疗 ， 研 究 的 对 象 主 要 是 靶 向药 物 的 耐 药 机 制 和 怎 么 解 决 耐 药 问 题 的 相 关 研 究 ， 同 时 利 用 新 的 肿 瘤 细 胞 以 及 重 建 新 的动 物 模 型 来 快 速 高 效 的 预 测 药 物 疗 效 、 免 疫 治 疗 以 及 液 体 活 检 技 术 的 治 疗 研 究 等 ， 所 以肺 癌 的 早 期 诊 断 及 分

38、 子 靶 向 治 疗 是 其 不 可 或 缺 的 一 部 分 。目 前 肺 癌 的 主 要 肿 瘤 标 志 物 有 神 经 元 特 异 性 烯 醇 化 酶 （ NSE） 、 组 织 多 肽 抗 原 （ TPA） 、癌 胚 抗 原 （ CEA） 、 组 织 多 肽 特 异 性 抗 原 （ TPS） 、 鳞 癌 细 胞 抗 原 （ SCC-Ag） 细 胞 角 蛋白 （ CYFRA21-1） 等 ， 但 各 自 的 特 异 性 和 敏 感 性 都 不 是 特 别 高 ， 都 有 一 定 的 假 阳 性 和 假阴 性 率 ， 这 给 肺 癌 早 期 的 无 创 检 查 带 来 了 难 度 和 挑 战

39、。 另 外 一 方 面 ， 肺 腺 癌 目 前 的 靶 向药 物 主 要 是 根 据 EGFR 突 变 和 EML4-ALK 重 排 作 为 药 物 研 究 主 要 的 靶 点 ， 其 余 靶 点 还有 RET重 排 、 ROSl重 排 等 ， 而 肺 鳞 癌 的 分 子 靶 向 治 疗 研 究 发 展 比 较 滞 后 ， 目 前 主 要 研究 的 靶 点 有 成 纤 维 细 胞 生 长 因 子 受 体 1(FGFR1)、 PIK3CA等 2 8 ， 现 在 面 临 的 一 个 主 要 挑战 是 对 于 这 些 已 经 面 世 的 基 因 靶 向 药 物 ， 虽 然 对 部 分 存 在 特 定

40、 基 因 突 变 的 肿 瘤 具 有 良 好的 靶 向 治 疗 作 用 ， 但 是 因 为 这 些 肿 瘤 中 可 能 存 在 着 多 种 耐 药 机 制 以 及 其 之 间 的 相 互 作 用2 9 ， 使 得 这 些 靶 向 药 物 很 容 易 产 生 原 发 性 或 者 获 得 性 耐 药 3 0 -3 2 。 所 以 ,这 些 都 从 一 方 面 要求 我 们 能 够 寻 找 到 一 些 新 的 肺 癌 分 子 标 志 物 或 者 新 的 分 子 靶 点 来 进 一 步 完 善 肺 癌 的 靶向 治 疗 。本 项 目 利 用 网 络 数 据 库 检 索 非 小 细 胞 肺 癌 样 本

41、中 mRNA 表 达 检 测 基 因 芯 片 数 据 ，筛 选 出 差 异 表 达 基 因 ， 并 开 展 pathway及 Go富 集 分 析 ， 从 中 筛 选 得 到 非 小 细 胞 肺 癌 中多 个 相 关 基 因 ， 通 过 肿 瘤 基 因 分 子 进 行 功 能 富 集 分 析 发 现 其 中 TGF-beta信 号 通 路 中 的ALK1 处 于 信 号 转 导 通 路 的 上 游 ， 在 通 路 中 起 到 核 心 作 用 ， 因 此 我 们 对 ALK1 基 因 展 开研 究 ， 主 要 研 究 该 基 因 在 正 常 肺 细 胞 和 肺 癌 细 胞 以 及 非 小 细 胞

42、肺 癌 组 织 和 癌 旁 组 织 中 的万方数据暨 南 大 学 硕 士 学 位 论 文 ALK1 在 非 小 细 胞 肺 癌 组 织 中 的 表 达 及 其 临 床 意 义2 3差 异 表 达 ， 通 过 这 之 间 的 关 系 来 表 明 ALK1在 非 小 细 胞 肺 癌 中 可 能 发 挥 的 作 用 及 ALK1在 非 小 细 胞 肺 癌 分 子 靶 向 治 疗 或 者 肿 瘤 标 志 物 中 的 潜 在 价 值 ， 为 非 小 细 胞 肺 癌 的 分 子 靶向 治 疗 提 供 理 论 基 础 。ALK1(ACVRL1)是 ActivinRI 的 一 种 激 酶 形 式 ， 也 是

43、TGF-信 号 通 路 中 的 一 员 ， 它是 activinA 的 一 种 激 酶 型 受 体 ， 在 activinA发 挥 其 生 物 学 作 用 时 ， 首 先 要 和 细 胞 膜 上II 型 受 体 先 结 合 ， 然 后 再 激 活 I 型 受 体 （ ALK1） 使 其 磷 酸 化 ， 再 向 细 胞 核 内 传 递 激 活信 号 33-34,activinA也 被 认 为 是 一 种 抑 癌 基 因 ， 它 可 以 参 与 调 节 细 胞 的 分 化 、 增 值 、 损伤 修 复 以 及 参 与 调 节 了 肿 瘤 细 胞 生 长 和 凋 亡 的 过 程35， ALK1与 a

44、ctivinA之 间 有 着 重 要的 联 系 ， 在 activinA信 号 传 导 的 过 程 中 发 挥 了 积 极 的 作 用 。有 研 究 表 明 ， activinA作 为 一 种 抑 癌 基 因 可 以 抑 制 多 种 肿 瘤 细 胞 的 生 长 ， 而 ALK1作 为 其 受 体 也 发 挥 着 重 要 的 作 用 。 关 于 ALK1 基 因 现 在 较 多 的 相 关 研 究 是 ALK1 基 因 突变 所 引 起 的 一 种 遗 传 性 毛 细 血 管 扩 张 症 ， 其 主 要 特 征 是 容 易 引 起 毛 细 血 管 的 扩 张 、 动 静脉 畸 形 以 及 出 血

45、 17。 现 代 肿 瘤 学 认 为 ， 肿 瘤 的 发 生 、 发 展 以 及 浸 润 和 转 移 最 重 要 的 一 步是 实 体 肿 瘤 内 血 管 的 形 成 ， 因 为 肿 瘤 血 管 为 肿 瘤 提 供 了 充 足 的 细 胞 营 养 及 氧 分 ， 另 一 方面 ， 肿 瘤 细 胞 还 可 以 内 渗 到 血 液 系 统 ， 从 而 导 致 肿 瘤 转 移 ， 所 以 肿 瘤 血 管 对 肿 瘤 的 发 生 、发 展 、 侵 袭 以 及 浸 润 起 着 决 定 性 作 用36， 因 此 ALK1 作 为 TGF-和 BMP9的 一 种 配 体 ，通 过 它 可 以 激 活 并 启

46、 动 细 胞 内 一 连 串 生 物 学 信 号 ， 主 要 通 过 促 进 血 管 内 皮 细 胞 增 值 ， 刺激 肿 瘤 血 管 形 成 ， 为 肿 瘤 提 供 营 养 ， 所 以 对 肿 瘤 内 部 血 管 形 成 及 发 生 发 挥 着 重 要 的 作 用 ，了 解 这 种 机 制 后 对 现 代 以 抗 血 管 生 成 的 肿 瘤 治 疗 有 重 要 的 意 义 37。 另 有 学 者 研 究 发 现 ，以 老 鼠 为 研 究 对 象 ， 当 抑 制 细 胞 内 ALK1 受 体 表 达 时 ,发 现 老 鼠 的 肿 瘤 血 管 生 长 受 到 抑制 ， 肿 瘤 几 乎 停 止 生 长 ， 这 说 明 通 过 抑 制 ALK1受 体 的 表 达 在 某 种 程 度 上 可 以 阻 止 肿 瘤的 浸 润 生 长 ， 这 也 是 抗 肿 瘤 治 疗 战 略 中 极 为 关 键 的 一 步19-20。 而