1、（一）单纯固定液甲醛：1浓度：40%，气体2渗透力强，固定均匀，组织收缩小，3不能使白蛋白和核蛋白沉淀4保存脂类，必须用冷冻切片。是糖的保护剂5可固定高尔基体，线粒体重铬酸钾1. 浓度：1%-3%水溶液，有毒，橘红色结晶2. 穿透速度快，几乎不收缩，经乙醇脱水后明显收缩，3. 未酸化的重铬酸钾不能使蛋白质沉淀，但可使蛋白质变为脂溶剂。酸化后可使蛋白质沉淀，此时染色体可被保存，但线粒体破坏。4. 固定高尔基体和线粒体有良好效果。5. 酸性染料着色好，碱性染料着色差6. 固定的组织需经流水冲洗 12-24h，或用亚硫酸盐洗涤。苦味酸1. 黄色结晶体，是一种强酸，易燃易爆，配成饱和溶液储藏2. 穿透
2、慢，组织收缩明显，无明显硬化。3. 能沉淀一切蛋白质4对脂肪和类脂无固定作用。5. 可软化皮肤和火棉胶，不宜用火棉胶包埋6. 固定时间不宜超过 24h，7. 固定的组织应尽快放入 70%乙醇，滴加饱和碳酸锂或浓氨水，有助于除去苦味酸固定产生的黄色。升汞1. 浓度为 5%-7%的水溶液，针状结晶2穿透力低，只宜固定薄片组织，单独应用组织收缩明显3, 对蛋白质有固定作用，4. 对类脂和糖类无固定作用5. 临用时加冰醋酸醋酸1. 刺激性气味的无色液体，低于 15为冰醋酸5%的醋酸 PH 为 2-8，可抑制细菌和酶的活性，可防止自溶。2. 穿透力强3 不能沉淀白蛋白，球蛋白，但能沉淀核蛋白4 不能固定
3、脂肪和内酯，不能保存糖5 .固定线粒体和高尔基复合体不能用高浓度的醋酸，可较好的保存染色体6, 缺点是组织膨胀明显，尤其对于胶原纤维和纤维蛋白铬酸1. 为三氧化铬的水溶液，浓度 0.5%-1%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合2 穿透力弱，一般组织需固定 12-24h，固定的组织有收缩，3 能沉淀蛋白质，核蛋白固定良好。4 对脂肪无固定作用5 固定线粒体和高尔基复合体6. 宜避光保存，以防蛋白质溶解。7. 必须彻底流水冲洗（24h） 。锇酸（四氧化锇）1.淡黄色结晶，剧毒，浓度 1%-2%，强氧化剂，不能与乙醇，甲醛等混合2. 渗透力极弱，易使组织变硬，延长固定时间，组织的脆性增加，对染色不利
4、。3. 固定均匀，不沉淀蛋白质。4为脂类固定剂5. 适用于线粒体和内质网的固定6. 为电镜研究的必须固定剂。7. 固定目的不同，配方和浓度根据需要改变8. 固定后对碱性染料亲和力强，细胞核的染色效果好9. 应在临用前前几天配制以保证充分溶解。丙酮1易挥发，易燃的无色液体，可与水，醇，氯仿，醚混合2. 渗透力强，对核的固定差3. 可使蛋白质沉淀4. 作用基本与乙醇相同，但对糖原无固定作用5广泛用于酶组织化学中各种酶的固定乙醇1. 无色液体， ，还原剂，可与水无限相溶，有固定兼脱水作用用于固定的浓度为 80%-95%2渗透力弱，固定速度较慢，易使组织变脆，无水乙醇固定时，穿透速度快，渗透力差，使组
5、织收缩3.，能沉淀白蛋白，球蛋白，核蛋白4. 用于糖原的固定5. 50%以上乙醇可溶解脂肪和类脂体，并可溶解血红蛋白，对其他色素也有破坏。三氯醋酸1. 为无色易潮解的结晶体，水溶液为强酸性，易溶于醇和醚，应密封保存2. 也是一种良好的脱钙剂（二）混合固定液B-5 固定液（醋酸钠-升汞-甲醛）1多用于固定淋巴组织，2. 染色前应进行脱汞处理3. 配方：无水醋酸钠 1.25g，升汞 6g，甲醛 10ml，蒸馏水 90ml.Bouin 液1. 有一定毒性，应避免吸入或与皮肤接触2. 固定液偏酸，对抗原有一定损害，使组织收缩，不适宜标本的长期保存3. 固定效果好，组织细胞结构完整。细胞核着色鲜明，细胞
6、质着色较差。4. 对脂肪固定效果好，尤适用于含脂肪的淋巴结，乳腺组织和脂肪瘤标本5. 适用于结缔组织染色，尤其是三色染色更为理想。6. 配方：饱和苦味酸水溶液：甲醛水溶液：冰醋酸=15：5:：1Carnoy 液1有防止乙醇的硬化和收缩作用，增加渗透力，外膜致密的组织可用其固定2. 固定速度快，3mm 厚组织块 1h 内即可固定，大块组织不超过 4h。3，固定细胞质和细胞核，对于染色体固定佳，显示 DNA，RNA 效果好。4. 常用于糖原和尼氏体的固定5不能保存脂类，不适用脂肪染色。6. 配方：冰醋酸 10ml，氯仿 30ml，无水乙醇 60ml Muller 液1. 作用缓慢，固定均匀，组织收
7、缩小2. 多用于媒染和硬化神经组织3. 固定过程中，需常更换新鲜的液体4.配方：重铬酸钾 2-2.5g，硫酸钠 1.0g，蒸馏水 100mlOrth 液1. 渗透力强，组织收缩小2. 应临时配置，在暗处固定，固定 24h 左右，固定液变为黑色时不可用，固定后流水冲洗 12-24h。3. 固定胚胎组织，神经组织。脂肪组织4. 配方：重铬酸钾 2.5g，硫酸钠 1.0g，蒸馏水 100ml，37%-40%的甲醛 10ml（用时加入）PFG 液1. 适用于多种肽类抗原的固定，多用于免疫电镜研究2. 对细胞抗原性和结构保存好3. 配方：对苯醌 20g，多聚甲醛 15g，25%戊二醛 40ml，0.1m
8、ol/L 二甲砷酸钠缓冲液 1000ml。PLP 和 PLPD 液1. 均含过碘酸盐2. 对细胞抗原性和结构保存好，适用于富含糖类组织的固定Rossman 液1. 对糖原固定好，固定 12-24h，用 95%的乙醇洗2. 配方：无水乙醇苦味酸饱和液 90ml，甲醛 10mlZenker 液1用于固定多种组织，对于病毒包涵体固定效果也较好2. 使细胞核和细胞质染色清晰，常用于三色染色，对免疫球蛋白染色最好3. 不适用含血量较多的标本，如充血的脾脏和肺梗死等标本4.不能用金属容器盛放，且固定后不能用金属镊夹取。4%多聚甲醛-0.1mol/L 磷酸缓冲液1. 适用于光镜免疫组织化学法，2. 动物先用
9、此液灌注固定，取材后再用该液浸泡固定3. 可用于标本的较长时间的保存4%多聚甲醛-磷酸二钠/氢氧化钠1. 适用于光镜和电镜免疫组织化学法，2. 用于免疫电镜时，应加入新鲜配置的戊二醛。使其终浓度为 0.5-1%3. 性质温和，可长期保存组织。 4配置后 PH 值应调至 7.2-7.4, 4 保存甲醛-钙液. 适用于固定脂肪组织和组织化学染色乙醇-甲醛液有脱水作用，对皮下组织中肥大细胞的固定好乙醚-乙醇液渗透性强，固定效果好，用于细胞涂片的固定。去除甲醛色素：Verocay 液脱汞盐结晶： Lugol 液脱黑色素： 0.25%高锰酸钾蓝化作用： 稀氨水组织的脱水（一）乙醇乙醇脱水的浓度：70%8
10、0%90%95%100%进行糖原和尿酸盐结晶染色的标本应直接用无水乙醇固定，更换一次无水乙醇脱水即可。（二）丙酮与乙醇作用相似，但对组织块的收缩作用比乙醇更严重，快速脱水或固定兼脱水时应用，脱水时间为 1-3h.丙酮可作为染色后的脱水剂，用于 DNA 和 RNA 染色。（三）异丙醇是乙醇的良好替代品，不含水，可代替无水乙醇使用，对火棉胶和染料不溶，因此不能用于火棉胶包埋和染料配制。（四）正丁醇和叔丁醇（电镜标本制作时常用作中间脱水剂。 ）正丁醇：无色液体，脱水能力较弱，可与水，乙醇和石蜡混合，因此，这种这种脱水的组织块可直接浸蜡包埋，叔丁醇：无毒，可与水，乙醇和二甲苯混合，与正丁醇相比，它不易
11、使组织收缩或变硬，而且脱水后可不经透明直接浸蜡，（五）还氧已环还氧已环能于水和乙醇混合，也能溶解石蜡，可代替乙醇进行脱水，也可代替二甲苯进行透明，不引起组织收缩和硬化，用于制备植物标本较好，易挥发，价格昂贵。（六）四氢呋喃易于水，乙醇，丙醇和苯类混溶，对组织渗透快，易挥发，无毒，可用作封片溶剂，对染料不溶。（七）环己酮环己酮无毒，与苯，二甲苯，氯仿和石蜡混合，可代替无水乙醇脱水后直接浸蜡，组织块不会变硬。（八）松脂醇可取代无水乙醇用作脱水剂和随后的浸透与包埋。树脂包埋法适用于：不脱钙骨髓活检组织，肝、肾穿刺活检和淋巴结组织等。常用的特殊染色技术一 结缔组织染色 Mallory 三色 Masso
12、n 三色 胶原纤维，网状纤维 蓝色 绿色 软骨，粘液，淀粉样 淡蓝色 神经胶质纤维，肌纤维 红色 红色髓鞘，红细胞 橘红色 橘红色显示胶原纤维，网状纤维，弹性纤维三联染色胶原纤维：红，网状纤维：黑，弹性纤维：绿色肌肉和红细胞：淡黄色二 胶原纤维染色（一） 显示胶原纤维，细胞，肌肉的染色法1 试剂：Ponceau（丽春红）染色液：丽春红水溶液 10-15ml，苦味酸饱和水溶液 85-90mlVictoria blue(维多利亚蓝)：维多利亚蓝，70%乙醇2 结果：胶原纤维： 红，细胞核和血细胞： 绿色肌肉： 黄色3 注意事项：Ponceau 染色后。不能与水接触，直接用无水乙醇冲洗脱水：胶原纤维
13、切片的厚度需 6um,: Victoria blue 染色液应盛染色缸内，进行染色。（二）天狼星红苦味酸染色法1.试剂：天狼星红饱和苦味酸液： 0.5%天狼星红 10ml，苦味酸饱和水溶液,90ml天青石蓝液：天青石兰，铁明矾，蒸馏水，甘油，浓盐酸 2 结果：胶原纤维： 红，细胞核和血细胞： 绿色其他： 黄色3 注意事项：细胞核复染可以用 Harris 苏木精淡染：必须用偏光显微镜观察 三 网状纤维染色（一）Gomori 银染色法1.结果：网状纤维： 黑色胶原纤维： 红，背景： 黄色3 注意事项： 氨性银溶液：必须器皿洗干净，滴加氨水不能过量，冰箱保存 氧化液存放时间不能过长，以免失去氧化作用
14、 丽春红复染用滴染方便，无水乙醇冲洗要倾斜（二）James 染色法1.结果：网状纤维： 黑色胶原纤维： 红，背景： 淡黄色3 注意事项： 5%硝酸银使用时不能滴染 二氨银配制时，氨水要一滴一滴的加，以免浓氨水加的太多 甲醛液要新配制四：弹性纤维染色（一）维多利亚蓝染色结果：弹力纤维： 蓝色细胞核： 红色注意事项：配制的溶液放置 2 周成熟后使用（二）Gomori 醛复红染色法1 试剂：醛复红染液：碱性复红 0.5g，浓盐酸 1ml，70%乙醇 100ml，三聚乙醛 1ml室温下静置 1-2 日，待变为紫色即成熟，于冰箱保存备用。橘黄 G 染液：2：对特殊的蛋白质及含硫酸根的粘多糖有很强的亲和力
15、，和弹力纤维结合很紧。对肥大细胞颗粒，脂褐素，HBsAg,胃主细胞，胰岛的 细胞，脑垂体的嗜碱性细胞也能很好着色。3 固定液：以甲醛生理盐水固定的染色效果最佳。结果：弹力纤维 深紫色粘液 紫色五 显示弹性，胶原纤维的双重组合染色结果：弹力纤维： 蓝绿色胶原纤维： 红色背景： 淡黄色注意事项：维多利亚蓝液可每次反复使用，溶液在室温中保存可用数年。六 肌肉组织染色 （一）横纹肌组织染色Mallory 磷钨酸苏木精染色法（PTAH）1. 结果：横纹肌 蓝色胶原纤维，网状纤维： 黄色或玫瑰红色心肌（缺血缺氧）： 紫蓝色或棕黄色2注意事项：此液经阳光处理数周后至数月才成熟，置冰箱内保存可使用多年时间。可
16、加入 0.15 高锰酸钾，加快促使成熟95%乙醇分化时应注意在切片上保留一定的红色，然后用无水乙醇快速脱水，冷风稍干燥后封固。早期心肌病变组织染色（一）Nagar Olsen结果：缺氧心肌，红细胞 红色正常心肌 黄色或黄棕色细胞核 蓝色（二）Poley 显示缺氧心肌染色法结果：缺氧心肌 红色胞核 紫色其他： 绿色七：糖类染色糖原染色：过碘酸-Schiff(PAS) 染色法1 结果：糖原及其他 PAS 反应阳性物质 红色细胞核 蓝色2.注意事项：过碘酸是一种氧化剂染色前将 Schiff 试剂取出后，适应室温后再进行染色八粘液物质（粘多糖）染色中性粘多糖多见于：胃粘膜的表面上皮，十二指肠腺，颌下腺
17、，前列腺上皮，结肠的杯状细胞。强硫酸化粘多糖多见于：皮肤，动脉和肺、软骨、角膜及肥大细胞弱硫酸化粘多糖多见于：颌下腺、结肠、气管、支气管的杯状细胞粘液物染色用于：肿瘤方面的胃癌，粘液瘤和粘液肉瘤，软骨粘液样纤维瘤、横纹肌肉瘤、动脉粥样硬化和胶原病及慢性胃炎的肠化（一）Mowry 阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS ）染色法1 结果： 中性粘液物质 红色酸性粘液物质 蓝色混合性粘液物质 紫红色 2 注意事项：切片中不能涂白胶或火棉胶 Schiff 试剂保存于冰箱中备用，滴染法，用过的不能回收使用。阿尔辛蓝染色 30 分钟，或更长（二）Schiff 阿尔辛蓝地衣红染色法1 结果：胃粘膜肠化生上皮和胃肠
18、肿瘤的酸性粘多糖： 蓝色中性粘多糖： 棕色2.注意事项： 高锰酸钾氧化液必须新配制使用 地衣红染色液冰箱保存，可反复使用 地衣红染色时间 4h,阿尔辛蓝染色 5 分钟，时间不能长。九 黑色素染色黑色素见于：恶性黑色素瘤，淋巴结肿瘤，色素性神经瘤，皮肤性淋巴结炎，皮肤异色病，红斑狼疮，扁平苔藓，神经性黑色素病变，假性黑变病色素的大肠，阑尾，小肠（一）MassonFontana 黑色素浸银染色法结果：黑色素及嗜银细胞颗粒 黑色胶原纤维 红色背景 浅黄色（二）Lillie 亚铁染色法结果：黑色素 暗绿色背景 浅绿肌纤维和背景 黄色注意事项：硫酸亚铁和铁氰化钾染色液需临用时配制，不能存放，也可使含铁血
19、黄素呈阳性，可用结合铁反应法来鉴别十 含铁血黄素染色Perls blue(普鲁士南)反应显示三价铁结果：含铁血黄素 蓝色其他组织 浅红色注意事项： 器皿应洁净，操作中避免与铁接触，洗涤需用蒸馏水 陈旧标本染色效果不好，必要时可用 0.25%高锰酸钾处理切片 20-60 分钟，再用草酸漂白。 组织固定不能使用酸性固定液。十一 胆色素染色：三氯醋酸染色方法结果：胆色素 绿色其他 复染的红色或黄色注意事项：不适用的固定液：Helly，Zenker 等含铬固定液纤维蛋白染色（一）MSB 染色法（马休黄猩红蓝法）结果：纤维蛋白 红色陈旧性纤维蛋白 紫色细胞核 蓝色红细胞 黄色注意事项：可以使用 Mass
20、on 三色法进行对照染色亮结晶猩红 6R 染料可用酸性复红代替。（二）Gram 甲紫染色法结果：纤维蛋白 蓝黑色，背景 红色淀粉样物质染色（一）刚果红染色法结果：淀粉样物质： 红色细胞核 蓝色注意事项：苏木精染色的细胞核不能深淀粉样物质可以结合偏光的方法得到良好的效果 ，其色彩呈绿色双折光性。无水乙醇有脱色作用，脱水后即用冷风干燥，再透明封固（二）Jurgens 甲紫染色法：结果：淀粉样物质 红色或紫红色细胞核 蓝色 真菌染色（一）Grocott 六胺银染色结果：菌丝和孢子 黑褐色，细胞核 红色背景 淡绿色（二）高碘酸复红染色法结果：真菌 紫红色，红细胞 浅黄色细菌染色一 Gram 碱性复红结
21、晶紫染色法：结果：G + 蓝色G，细胞核 红色，注意事项： 苯胺油苯酚复红液是一种不稳定的混合液，染色液表面易产生氧化结晶，染色应适当加热防止氧化物质污染切片。 二甲苯苯胺油分化后，必须用二甲苯洗除 结晶紫溶于乙醇，草酸铵溶于蒸馏水二 ZiehlNeelsen 抗酸杆菌染色法结果： 抗酸杆菌 红色 背景 灰蓝色注意事项： 苯酚复红液，必须加温 37-40,时，秩序染色 15-20 分钟 亚甲蓝复染后用 95%乙醇快速分化，防止过度脱色三 Warthinstarry 胃幽门螺杆菌染色法结果：胃幽门螺杆菌呈棕黑色或黑色，背景淡黄色注意事项：1%硝酸银液内 1h 左右（温箱 56）四 螺旋体染色 G
22、iemsa 染色法结果 螺旋体及细菌呈蓝到淡紫色，细胞质呈蓝色，红细胞呈橘黄色注意事项：放入 Giemsa 染色工作液中需要 8-18h 或更长五 HBsAg 染色（一） Shikata 地衣红染色法 结果：HBsAg 阳性呈棕色注意事项 高锰酸钾须新配制 地衣红染色液 PH 应为 1.2-1.6（二）醛复红改良染色法结果：HBsAg 阳性呈紫色 ，结缔组织呈红色，红细胞及基质呈黄色（三）维多利亚蓝染色法结果：HBsAg 阳性呈蓝绿色 ，细胞核红色注意事项： 维多利亚蓝染液中需放置 12-24h.神经组织染色神经细胞尼氏小体染色法（一）焦油紫染色法结果：尼氏小体 紫色胶质细胞 淡紫色背景 无色
23、(二) Einarson 棓酸青蓝染色法结果：尼氏小体 黑蓝，紫色核 蓝色背景 浅灰色（三）甲苯胺蓝染色法：结果：尼氏小体 深蓝色核 淡蓝色背景 无色神经纤维染色方法（一）Hol,mes 神经纤维染色方法结果：神经纤维 黑色背景 灰紫色（二）Bielschowsky 神经纤维染色结果：神经纤维 黑色背景 紫色（三）Von Braunmubl 神经纤维，扣结，老年斑染色方法结果：神经纤维和扣结 黑色老年斑 黑色背景 浅灰色（四）Eager 退变神经纤维的染色方法结果：退变神经纤维 黑色背景 浅棕色神经髓鞘染色方法（一）Weigert 髓鞘染色方法结果：髓鞘 黑紫色， 背景：淡灰色（二）Weil
24、髓鞘染色方法结果：髓鞘 蓝黑色， 背景：淡灰色（三）Kultshitzky 髓鞘染色方法结果： 结果：髓鞘 蓝黑色， 背景：淡黄色（四）Luol fast blue 髓鞘染色方法结果：髓鞘 蓝色核仁 紫色尼氏小体 紫色 （五）变色酸 2R-亮绿髓鞘染色方法结果：神经髓鞘呈深红色；轴索和间质呈绿色，脱髓鞘纤维不着色。注：变色酸 2R 染液浓度在 0.30.6为好，可根据质量不同而增减。染色液置 4冰箱内保存，可反复使用，用前回温。（六）Marchi 退变髓鞘染色方法结果：退变髓鞘 黑色背景 浅棕色（七）锇酸 萘胺结果：变性髓鞘及脂肪： 黑色正常髓鞘 红色红细胞 淡红色结缔组织 蓝色神经胶质细胞染
25、色方法（一）Cajal 星形细胞染色方法（冷冻切片）结果：原浆形及纤维性星形细胞 紫黑色（二）Naounenko 和 Feigin 改良的 Cajal 染色方法（石蜡切片）结果：星形细胞 紫黑色背景 粉红色（三）Weil 及 Davenport 小胶质细胞及少胶质细胞染色方法结果：神经胶质细胞及少突胶质细胞 黑色背景 黄棕色（四）Naou menko 及 Feigin 小胶质细胞石蜡切片染色方法结果：小胶质细胞： 黑色背景 灰色 神经内分泌细胞染色亲银反应（一）lillie Masson 二胺银染色方法结果：亲银细胞颗粒 黑色 细胞核 红色 背景 淡灰黄色（二）Gomori Burtner 六
26、胺银法结果：亲银细胞 黑色 背景细胞 浅红色嗜银反应：（一）De Grandi 改良硝酸银反应法结果：嗜银细胞颗粒 棕黑色胞核 红色（二）碱性重氮反应：结果：嗜银细胞颗粒 橘红色至红色 细胞核 蓝色胞质 黄色 嗜铬细胞染色（一）Giemsa 改良染色方法结果： 嗜铬细胞 红色至紫红色皮质细胞 蓝色红细胞 粉红色（二）Wiesel 染色方法结果：嗜铬细胞 黄绿色细胞核 红色其他 蓝色肥大细胞染色一 甲苯胺蓝改良染色方法结果： 肥大细胞： 红紫色细胞核 蓝色二 醛复红法结果： 肥大细胞颗粒 深紫色红细胞 橘黄色其他 黄色 DNA 染色（Feulgen 法）结果：DNA 紫红色细胞质及其他成分 绿色
27、染色方法 胶原纤维，网状纤维软骨，粘液，淀粉样神经胶质纤维，肌纤维髓鞘，红细胞Mallory 三色 蓝 淡蓝 红 黄Masson 三色 绿 红 黄胶原纤维 网状纤维 弹性纤维 肌肉和红细胞结缔组织染色显示胶原纤维，网状纤维，弹性纤维三联染色 红 黑 绿 黄胶原纤维 细胞核和血细胞肌肉显示胶原纤维，细胞，肌肉的染色法红绿 黄胶原纤维染色天狼星红苦味酸染色法红 绿 黄网状纤维 胶原纤维 背景Gomori 银染色法 黑 红 黄网状纤维染色James 染色法 黑 红 淡黄弹力纤维 细胞核 粘液 背景维多利亚蓝染色 蓝 红Gomori 醛复红染色 深紫 紫弹性纤维染色显示弹性，胶原纤维的双重组合染色蓝绿
28、色 胶原纤维红色淡黄色横纹肌 胶原纤维，网状纤维心肌（缺血缺氧）横纹肌组织染色 Mallory 磷钨酸苏木精染色法蓝 黄色或玫瑰红色紫蓝色或棕黄色（PTAH）缺氧心肌，红细胞正常心肌 细胞核 其他NagarOlsen 红 黄或黄棕色 蓝早期心肌病变组织染色Poley 缺氧心肌染色法 红 紫 绿糖原及其他 PAS 反应阳性物质细胞核糖类染色 过碘酸-Schiff(PAS) 红 蓝中性粘液物 酸性粘液物混合性粘液物Mowry 阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）红 蓝 紫红粘液物质（粘多糖）染色Schiff 阿尔辛蓝地衣红棕 蓝黑色素及嗜银细胞颗粒胶原纤维背景 肌纤维MassonFontana 浸银染
29、色黑 红 浅黄黑色素染色Lillie 亚铁染色 暗绿色 浅绿 黄 含铁血黄素 其他含铁血黄素染色 Perls blue(普鲁士南 ) 蓝 浅红胆色素 其他胆色素 三氯醋酸染色方法 绿 红 或 黄不适用的固定液：Helly，Zenker 等含铬固定液纤维蛋白 陈旧性纤维蛋白细胞核 红细胞 背景MSB 染色法（马休黄猩红蓝法）红 紫 蓝 黄纤维蛋白染色Gram 甲紫染色法 蓝黑 红淀粉样物质 细胞核刚果红染色法 红 蓝淀粉样 物质染色 Jurgens 甲紫染色法 红或紫红色 蓝菌丝和孢子 背景 细胞核 红细胞Grocott 六胺银染色 黑褐 淡绿 红真菌染色高碘酸复红染色法 紫红 浅黄色幽门菌 抗
30、酸杆菌 G+ G 背景Gram 碱性复红结晶紫染色法蓝 红ZiehlNeelsen 抗酸杆菌染色法红 灰蓝色细菌染色Warthinstarry 胃幽门螺杆菌染色法棕黑或黑 淡黄色染色方法 项 目螺旋体细菌 细胞质 红细胞螺旋体染色 Giemsa 染色法 蓝到淡紫色 蓝 橘黄色HBsAg 颗粒 细胞核 红细胞 结缔组织Shikata 地衣红染色 棕色醛复红改良染色法 紫色 黄 红HBsAg 染色维多利亚蓝染色法 蓝绿色 红尼氏小体 核 背景 胶质细胞焦油紫染色法 紫 无色 淡紫Einarson 棓酸青蓝 黑蓝紫色 蓝 浅灰色神经细胞尼氏小体染色法 甲苯胺蓝染色法 深蓝色 淡蓝 无色神经纤维 背景
31、 老年斑扣结Holmes 神经纤维 黑 灰紫Bielschowsky 神经 黑 紫Von Braunmubl 神经纤维，扣结，老年黑 浅灰色 黑神经纤维染色方法Eager 退变神经纤维 黑色 浅棕色髓鞘 背景 核仁 尼氏小体Weigert 髓鞘染色方 黑紫 淡灰Weil 髓鞘染色方法 蓝黑 淡灰Kultshitzky 髓鞘染 蓝黑 淡黄Luol fast blue 蓝 紫 紫髓鞘 脱髓鞘纤 背景 轴索间质变色酸 2R-亮绿髓鞘深红 不着色 绿色Marchi 退变髓鞘染色方法黑色（退变） 浅棕色神经髓鞘染色方法锇酸 萘胺 黑色（变性）红色（正常）红细胞（淡红）结缔组织（蓝色）原浆形及纤维性星形细
32、胞神经胶质细胞少突胶质背景 小胶质细胞Cajal 星形细胞（冷冻） 紫黑色改良的 Cajal 染色 紫黑色 粉红Weil 及 Davenport 小胶质细胞及少胶质细胞黑色 黄棕神经胶质细胞染色方法Naou menko 及 Feigin 小胶质细胞灰 黑色亲（嗜）细胞颗粒细胞核 背景 胞质lillieMasson 二胺银黑 红 淡灰黄亲银反应GomoriBurtner 六胺银法黑 浅红De Grandi 改良硝酸银反应棕黑色 红神经内分泌细胞染色嗜银反应碱性重氮反应 橘红色至红色 蓝色 黄色嗜铬细胞 皮质细胞 红细胞 细胞核嗜铬细胞染色 Giemsa 改良 红色至紫红色 蓝 粉红Wiesel
33、染色方法 黄绿色 蓝（其他） 红色肥大细胞 细胞核 红细胞 其他甲苯胺蓝改良 红紫色 蓝色肥大细胞染色醛复红法 深紫色 橘黄 黄DNA 细胞质DNA染色 Feulgen 法 紫红色 绿色免疫细胞化学技术标记物应具有以下的特点： 能与抗体形成比较牢固的共价键结合 不影响抗体与抗原的结合 放大的效益高 发光火显色反应要在抗原与抗体结合的原位并且鲜明，有良好的对比。理想的标记酶： 酶的活性高并且稳定 终产物稳定，不扩散，有良好的定位 酶与抗体和结合不影响 AgAb 的特异性反应 在组织与体液中不存在内源性的酶底物效果好又应用最多的是辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶异硫氰酸荧光素： 为明亮的黄绿色荧光四甲基
34、异硫氰酸罗丹明： 为橙红色荧光免疫组织化学主要染色方法的原理（一）直接法（又称一步法） 特异性高，敏感性低原理：用已知的特异性抗体与荧光素或酶结合，直接与待测组织中的抗原反应。特点：将荧光素或酶标记在第一抗体上（二）间接法（又称夹心法）原理：第一步：以未标记的特异性抗体（第一抗体）与组织或细胞中的抗原反应，洗去未与抗原结合的第一抗体后，第二步：再以荧光素或酶标记的第二抗体与第一抗体结合，如何进行显色或荧光检查。特点：将荧光素或酶标记在第二抗体上优点： 不用标记第一抗体 第一抗体的工作稀释度高 敏感性增强 应用范围更广 特异性低于直接法（三）未标记抗体法1 酶桥法酶桥法使用的三种抗体中的第 1，
35、第 3 两种抗体为同种动物所产生。在染色的关键是第 2 抗体（桥抗体）必须以较高的浓度过量使用优点：提高了反应的敏感性，缺点：背景染色较重。2 PAP 法将游离酶和抗酶抗体在使用前先制成稳定的酶抗酶抗体复合物，在稀释后使用。PAP 法的关键在于 PAP 复合物中的抗酶抗体必须与第一抗体为同种动物所产生。第 2 抗体（桥抗体）必须过量（四）亲和素生物素方法1 亲和素生物素过氧化物酶复合物技术（ABC）通过 ABC 复合物中亲和素桥梁的作用，将 ABC 复合物与生物素化的抗体结合在一起，达到检测抗原的目的。与 PAP 法比较， ABC 法最大的优点是敏感性高，是 PAP 法的 20-40 倍其次是
36、背景清晰。SP 法与 ABC 法比较，特异性更高2 酶标亲和素生物素技术（BA LAB）制备生物素化抗体和酶标亲和素，利用生物素亲和素的亲和作用，将酶标亲和素连接到抗原抗体复合物上，以显示被检测的抗原。3 桥联亲和素生物素技术（BAB， BRAB）是用生物素分别标记抗体和酶，然后以亲和素为桥，将两者连接在一起对照常用的对照方法包括：阳性对照，阴性对照，阻断实验， ，空白对照，替代对照，自身对照，吸收实验阳性细胞的染色特征：阳性细胞染色分布有 3 种类型：胞质，细胞核，细胞膜表面阳性细胞可分为灶性和弥漫性染色强度不一可定位于单个细胞，且与阴性细胞相互交杂分布。切片边缘，刀痕或皱褶区域，坏死或挤压
37、的细胞区，胶原结缔组织等表现为相同的染色强度，不能判断为阳性免疫荧光细胞化学染色方法荧光抗体法：用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法荧光抗原法：用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法对照：抗原对照，抗血清对照，灭活补体对照。染色结果判读对照试验： 吸收实验：应用尚无文献报道的抗血清/自己制备的抗血清进行 IHC 染色时，需用相应的饱和抗原吸收血清后，在孵育标本。判断结果的可信性（结果应为阴性） 交叉实验 替代实验 置换实验 阳性对照动物实验技术实验动物的抓取一 小鼠用左手拇指和食指抓住两耳和颈部皮肤，其余三指和手掌心夹住背部皮肤和尾部小鼠的灌胃针长 4-5cm,直径 1mm.插入深度为
38、3-4cm,常用灌胃量 0.2-0.8ml皮内注射量：最多不得超过 0.05ml.皮下注射部位：背部肌内注射：股部腹腔注射：0.1-0.2ml/10g 静脉注射：多用尾静脉，用温水浸泡尾部或乙醇擦拭，使血管扩张，4 号细针一次注射量为 0.05-0.1ml/10g，尽可能从尾端开始向尾根部移动注射，脑内注射：0.02-0.03ml 注射针垂直刺入 2-3mm,二 大鼠大鼠捉持方法与小鼠相似。大鼠容易被激怒咬人，捉持时左手应戴防护手套。另一种方法：张开左手虎口，迅速将拇指，食指插入大鼠腋下，虎口向前，其余三指及掌心握住大鼠身体中端，并使其保持仰卧位，之后调整左手拇指位置，紧抵在下颌骨上。大鼠的灌
39、胃针长 6-8cm,直径 1.2mm. 插入深度为 4-6cm,常用灌胃量 1-4ml皮内注射量：最多不得超过 0.1ml.皮下注射部位：背部，左侧下腹部肌内注射：股部腹腔注射：1-2ml/100g 静脉注射：多用尾静脉，用温水浸泡尾部或乙醇擦拭，使血管扩张，4 号细针一次注射量为 0.05-0.1ml/10g，尽可能从尾端开始向尾根部移动注射，脑内注射：0.03-0.05ml 注射针垂直刺入 2-3mm,三 家兔一只手抓住兔颈背部皮肤，将兔轻轻提起，另一只手托住臀部，使兔呈蹲坐姿势。切不可用手握持双耳提起兔子家兔的固定：盒式固定：常用于经口给药，兔耳血管注射、采血或观察兔耳血管变化等。台式固
40、定：常用于颈部，胸部手术，兔静脉采血或测量血压，呼吸等实验架式固定：常用作热原值实验一次灌胃能耐受的最大容积 兔为 80-150ml 猫为 50-150ml皮内注射量：最多不得超过 0.1ml.皮下注射部位：背部或耳根部肌内注射：两侧臀部或股部肌肉腹腔注射：5ml,部位：下腹部近腹白线左右两侧约 1cm 处。静脉注射：耳缘静脉注射脑内注射：0.05-0.1ml 注射针垂直刺入 3mm,兔，猫致死法：空气栓塞法：静脉内注入 20-40ml 空气即可致死。四 犬要用特制的钳式长柄犬夹夹住颈部，使犬头向上，颈部拉直，再套上犬链。急性实验用犬，可用犬夹夹住犬颈部后，将它压倒在地，由助手将其四肢固定好。
41、实验需要麻醉时，把麻醉完善后的犬固定在手术台或实验台上，应及时解去嘴上的带子，以利动物呼吸，避免由于鼻腔被粘液阻塞而造成窒息。一次灌胃量不能超过 200ml皮下注射部位：大腿外侧肌内注射：两侧臀部或股部肌肉腹腔注射：5-10ml ，部位：脐后腹白线侧 1-2cm静脉注射：前肢，皮下，头静脉或后肢小隐静脉注射大鼠和小鼠的采血方法1 尾尖采血 2 眼眶后静脉丛采血 3 摘眼球采血4 断头采血 5 颈静脉和颈动脉采血 6 股静脉和股动脉采血7 心脏采血:用左手触摸左侧第 3-5 肋间处，选择心脏冲动最明显处穿刺，一般选择胸骨左缘外 1cm 第 4 肋间用 6 号半针头的注射器，垂直刺入心脏，可随针接
42、触心脏的感觉随时调整刺入方向和深度豚鼠采血方法1 心脏采血 2 耳缘采血 3 足静脉采血兔的采血方法1 耳（中央）动脉采血 2 耳缘静脉采血 3 外颈静脉采血 4 颈动脉采血 5 股静脉采血 6 心脏采血（不超过 20-25ml）犬的采血方法1 前后肢皮下静脉采血 2 股动脉采血 3 心脏采血4 颈静脉采血 5 耳缘静脉采血 羊的采血方法1 颈静脉采血 2 前后肢皮下静脉采血一般一次可取 50-100ml 试验动物用药量的确定1 药物剂量按 mg/kg 或 g/kg 计算2 用药量未知时可先用致死量的 1/101/5 进行尝试。3 动物的耐受性比人大。假设人的用药量为 1，小鼠，大鼠尾 255
43、0，兔、豚鼠为 15-20，犬、猫为 5-104 给药途径不同，所用剂量也不同5 根据动物年龄不同给不同的剂量。实验动物处死措施大鼠和小鼠：1 脊椎脱臼法 2 断头法 3 击打法 4 急性大失血法 5 化学致死法犬、猫、兔、豚鼠1 空气栓塞法 2 急性失血法 3 破坏延髓法4 开放性气胸法 5 化学药物致死法试验动物表面麻醉常用：利多卡因对大鼠进行吸入麻醉应选用：乙醚试验动物的编号，标记和被毛去除方法一 编号和标记方法常用的编号标记溶液：3%-5%苦味酸溶液 黄色0.5%中性红或品红溶液 红色2%硝酸银溶液 咖啡色 煤焦油乙醇溶液 黑色甲紫溶液 紫色1 号： 左前腿 5 号 背部2 号： 左腹
44、部 6 号 尾部3 号： 左后腿 7 号 右前腿 4 号 头顶部 8 号 右腰部9 号 右后腿试验动物被毛的去除 剪毛法 拔毛法 剃毛法 脱毛法肾活检标本制作技术标本的处理：1 一次可获取 1.0-1.5cmx0.1cm，在解剖显微镜下，肾小球呈针尖大小的红色点状2 标本分配：分为三部分，一般 0.4cm 做光镜，0.4cm 做免疫病理， 0.2cm 做电镜3 保存：光镜标本：10%甲醛固定液中电镜标本：2.5%戊二醛内于 4冰箱内固定免疫荧光：放在滴有生理盐水的小纱布垫上，连同纱垫置入干净的青霉素小瓶，再把小瓶放入进冰桶以上动作要快，在 1-2 分钟内完成。避免组织自溶，固定液要求新鲜。一
45、免疫荧光技制片1 暂时不处理，应将标本放在70冰箱内保存2 切片：冷室内20冷冻切片，厚度要求 3-4m,切 10 片备用，光镜观察有无肾小球，如无，则不需染色。一般检查项目有：1 IgA，IgM，IgG， IgE，抗 和 轻链，以及补体 C3，C1q,C2，C4 以及备解素用于证实免疫反应球蛋白种类和补体激活的途径。2 检查纤维蛋白原和白蛋白可帮助确定肾病变的性质和有无凝血机制。3 特异性抗原和抗体：HBsAg，抗 DNA 等用以发现肾炎相关性抗原。以异硫氰荧光素或四乙基罗达明等作为标记制作荧光抗体。石蜡切片进行免疫荧光检查：1 IgM，纤维蛋白原和 HBsAg 不受影响，2 IgA，IgG
46、 强度减弱3 补体往往消失固定：缓冲甲醛，磷酸氢二钠和 FAA 固定液，在以上固定液中室温需 45 分钟脱水：梯度乙醇：70%乙醇80%乙醇90%乙醇无水乙醇染色：HE：细胞核： 紫蓝色细胞质，基底膜，胶原纤维： 粉红色PAS：胞核： 蓝色基底膜、肾小球系膜基质、胶原纤维、细胞质： 红色PASM 染色基底膜、网状纤维 黑色细胞核 紫蓝色背景 粉红色PASMMasson 复合染色肾小球基底膜 黑色沉积物 红色纤维蛋白染色基底膜 蓝色免疫复合物 粉红色纤维蛋白 红色细胞核 黑色电子显微镜标本的制作一 取材：标本每块 1mm3, 应含有肾小球.二 固定：立即放人 2.5%戊二醛内，于 4冰箱固定 4h 后放人 0.05mol/L 磷酸盐缓冲液冲洗 3h,再放入 1%锇酸于室温下固定 1h三 脱水包埋50%乙醇65%乙醇75%乙醇85%乙醇95%乙醇无水乙醇无水乙醇四 超薄切片先切 1m 半薄片，再 0.5%亚甲蓝染 5 分钟，再用超薄切片机切成 50nm 超薄片五 染色：用醋酸铀和铅双重染色1%5%醋酸铀（PH4.2）室温下染 2030 分钟，再以枸橼酸铅室温下复染 30 分钟。
