1、总游离氨基酸测定（完整版）实验原理： 游离氨基酸的游离氨基可与水合茚三酮作用，产生蓝紫色的化合物二酮茚二酮茚胺，产物的颜色深浅与游离氨基酸含量成正比，用分光光度计在 570nm 下测其含量。因蛋白质中的游离氨基酸也会产生同样反应，在测定前必须用蛋白质沉淀剂将其除掉.仪器与用具：100ml 容量瓶；漏斗；三角瓶 研钵；刻度吸管：0.1ml1、1ml2、2ml2、5ml1;沸水浴；具塞刻度试管 20ml10;分光光度计.一、试剂1.水合茚三铜：称重结晶的茚三铜 0.6g,装入烧杯，加入正丙醇 15ml，使其溶解加入正丁醇 30 ml、乙二醇 60 ml、乙酸-乙酸钠缓冲液（pH=5.4）9 ml,
2、混匀，棕色瓶冰箱保存，10 天内有效。2.乙酸-乙酸钠缓冲液（pH5.4）：称取化学纯乙酸钠 54.4g，加入无氨蒸馏水 100 ml，电炉加热至沸，使其体积减半，冷却后加冰乙酸 30 ml，加蒸馏水定容至 100 ml。3.氨基酸标准溶液：精确称取 80烘干至恒重的亮氨酸 0.0234g 溶于 10异丙醇并定容至 50ml。取此液 5ml 蒸馏水稀释到 50ml，即为 5g/ml 氨基酸标液。4.0.1%抗坏血酸：称取 0.050g 抗坏血酸，溶于 50 ml 蒸馏水中，即配即用。5.10乙酸二、标准曲线制备管口试剂1 2 3 4 5 6氨基酸标液5g/ml 0 0.2 0.4 0.6 0.
3、8 1.0无氨蒸馏水 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0水合茚三铜 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0抗坏血酸 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1每管含氮量 0 1 2 3 4 5加塞子密封于沸水中加热 15 分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用 60乙醇定容至 20ml，摇匀于 570nm 波长下比色。以吸光度为纵坐标，氨基氮 ug 数为横坐标，绘标准曲线三、实验步骤：1. 烟末 0.5g 于研钵中加入 5 ml10%乙酸， 研磨匀浆后用蒸馏水定容100 ml，用滤纸过滤到三角瓶中备用。2. 1ml 滤液加入到 20ml 干燥试管中，加 1 ml 蒸馏水，水合茚三铜3ml, 0.1%抗坏血酸 0.1ml, 加塞子密封于沸水中加热 15 分钟，取出后用冷水迅速冷却并不时摇动使加热时形成的红色被空气逐渐氧化褪去，待呈现兰紫色时，用 60乙醇定容至 20ml，摇匀于570nm 波长下比色。四. 计算：求三重复的平均值，由标准曲线得知各样的氨基酸 ug 数，代入公式计算。氨基酸含量（mg/g 干样）=氨基酸 ug 数（提取液总体积/ 测定体积） /（样品 g 数1000）
