1、成 都 医 学 院 教 案 首 页2012-2013 年第 2 学期 2010 级预防医学本科专业 任课教师：杨威特讲授实验 5课程 卫生学检测技术 题目 2，6二氯酚靛酚滴定法测定维 生素 C 含量 学时练习行课时间 2013 年 6 月 7 日 第 1 至 5 节课次 第 8 次教 材 自编教材教 具 电 子 课 件教 学目 的要 求掌握：定量测定维生素 C 的原理和方法熟悉：微量滴定法的基本操作技术教学重点难点及其解决方案重点：定量测定维生素 C 的原理和方法难点：滴定终点的判断解决方案：通过实验让学生了解定量测定维生素 C 的原理和方法，并能采取过滤等方法排除影响判断滴定终点的干扰因素
2、。参 考资 料人民卫生出版社出版，梁康主编卫生理化检验技术华中科技大学出版社出版，运珞珈、朱业湘主编卫生理化检验与微生物学检验实 施情 况小 结教研室主任签名： 2013 年 月 日成 都 医 学 院 教 案 续 页教学过程、内容及时间分配 教学方法与手段2，6二氯酚靛酚滴定法测定维生素 C 含量一、目的1学习并掌握定量测定维生素 C 的原理和方法。2掌握微量滴定法的基本操作技术。二、原理维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid） 。它对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有对化学致癌
3、物的阻断作用。维生素 C 是具有 L 系糖构型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等） 、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更为丰富。维生素 C（抗坏血酸）具有很强的还原性，能将染料 2，6一二氯酚靛酚还原成无色，而抗坏血酸本身被氧化成脱氢抗坏血酸。氧化型 2，6 一二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉红色，在中性或碱性溶液中呈蓝色，当用此染料滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血酸未全部氧化前，则滴下染料立即被还原成无色，一旦溶液中的抗坏血酸全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液显示粉红色，此时为滴定终点，即表示溶液中的抗坏血酸刚刚被氧化
4、完全，从滴定时 2，6 一二氯酚靛酚标准液的消耗量，可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。三、材料、试剂与器具（一）新鲜的水果（二）试剂讲解法1、标准抗坏血酸溶液：准确称取 50 毫克纯抗坏血酸，溶于1%的草酸溶液中，并稀释至 500 毫升，贮棕色瓶，冷藏保存，最好临用时配制。 2、2% 草酸溶液：草酸 2 克，溶于 100 毫升蒸馏水中。3、1% 草酸溶液：1 克草酸溶于 100 毫升的蒸馏水中。4、0.01% 2,6 一二氯酚靛溶液：溶 50 毫克 2,6 一二氯酚靛于 300 毫升含有 104 克 NaHCO3 的热水中，冷却后加水稀释至 500 毫升，滤去不溶物，贮于棕色瓶内。 （4约可
5、保存 1 周）每次临用时以标准抗坏血酸溶液标定。（三）器具1、锥形瓶（50100 毫升）2、移液管（1 毫升，10 毫升）3、容量瓶（100 毫升）4、微量滴定管（3 毫升或 5 毫升）四、操作步骤（一）提取水洗净新鲜的水果，用吸水纸吸干表面水分，然后称取 5 克剪碎，加 2%的草酸 5 毫升，置研钵中研成浆，倒入 100 毫升的容量瓶内，用 2%草酸洗涤数次，最后定容至刻度，充分混匀后过滤，弃去最初几毫升滤液。（二）滴定1、标定 2，6 一二氯酚靛酚溶液的浓度：量取标准维生素 C 溶液 1ml,加 9ml 1%草酸加入 50ml 锥形瓶中，同时量取 10ml 草酸加入另一个 50ml 锥形瓶
6、中作空白对照，用已标定的 2，6 一二氯酚靛酚滴定至粉红色出现，15 秒不退色。记录所用的毫升数，计算每毫升 2，6 一二氯酚靛酚所能氧化维生素 C 的毫克数（K） 。2、样品的测定：讲解法演示法实践法取 50ml 锥形瓶 2 个，分别加入滤液 10ml，用已标定的2，6 一二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以微红色能保持 15 秒不退色为止，整个滴定过程宜迅速，不宜超过 2min，空白滴定方法同前，记录两次滴定所得的结果，求平均值。（三）结果计算根据实验数据计算出每 100g 样品的维生素 C 含量：维生素 C（mg/100g 样品）= 100123()VKW式中：V 1 为滴定样品液所用去染料体积
7、（ml）;V2 为滴定空白所用去染料体积（ml）;V3 为样品测定时所用滤液体积（10ml）;V 为样品提取液的总体积；K 为 1 毫升染料能氧化维生素 C 的量（mg）;W 为称取样品重量(g ) 。五、注意事项1.滴定时速度要尽可能快，因样品内一般都含有一些能将2，6 一二氯酚靛酚还原的其它物质，尽管它们还原比染料的能力一般较维生素 C 弱。2.滴定所用染料要在 14ml 之间，否则须增减样品量或将提取液适当稀释。3.抗坏血酸易溶于水，也极易被氯化，故提取抗坏血酸时，须抑制组织中氧化酶活性。2%草酸可抑制该酶，1%草酸则不能，三氯醋酸、偏磷酸、盐酸有同样功效。Fe 2+能还原二氯酚靛酚，如
8、用醋酸（8%即可）则 Fe2+不会很快与染料起作用。4.样品提取液应避免日光直射，否则会加速抗坏血酸的氧化。5.在生物组织内和组织提取物内，抗坏血酸还能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在。它们同样地具有维生素 C 的生理作用，但不能将 2，6 一二氯酚靛酚还原脱色。6.在生物组织提取物中，常有色素类物质存在，给滴定终点的观察造成困难。应加入适量白陶土乳液进行脱色过滤后再滴定。六、实验报告保留每次测定的有效数据，计算样品维生素 C 的含量并讨论分析结果的准确性，科学性。七、思考题1、要测得准确的维生素 C 值，实验过程中应注意哪些操作步骤，为什么？2、在测定过程中，样品的草酸提取液为什么不能暴露在光下？3、试简述维生素 C 的生理意义。
