1、常规分析项目 ZDFYJYK/SOP-A-02-2013 第 1 版 第 0 次修改第 1 页 共 7 页 1 检验目的指导脑脊液（CSF)常规测定。2 方法原理2.1 脑脊液是存在于脑室及蛛网膜下腔中的无色透明液体。由于脉络丛上皮细胞对血浆 中各种物质的选择性分泌和超滤作用，血浆中各种成分对血脑屏障的通透性各有不 同。其中最易通过血脑屏障的是氯、钠、镁离子及乙醇;其次为清蛋白、葡萄糖、钙 离子、乳酸、氨基酸、尿素和肌酐;纤维蛋白原、补体、抗体、某些药物、胆红素、胆固醇则极难或不能通过。中枢神经系统任何部位发生器质性病变时，如感染、炎症、肿瘤、外伤、水肿和阻塞等都可以引起脑脊液成分的改变。通过
2、对脑脊液理学检查，显微镜检查、化学和免疫学检查及脑脊液病原学检查，可对疾病的诊断、治疗和预后判断提供依据。2.2 脑脊液（CSF）常规测定内容包括:颜色、性状、有核细胞计数、红细胞计数、潘氏试验、细菌等。2.3 潘氏（pandys)试验：CSF 中的球蛋白与苯酚结合，形成不溶性的蛋白盐而产生白色混浊或沉淀。3 方法性能参数（如线性、检出限、测量区间、不确定度、准确性、精密度、灵敏度和特 1 颜色（COLOR) 6 中性粒细胞（NE)2 透明度（clearity) 7 淋巴细胞（LY）3 凝固性（coagulability） 8 单核细胞（MO）4 脑脊液有核细胞计数（CSFNUCL)9 潘氏试
3、验（pandys test）5 脑脊液红细胞计数（CSFRBC)常规分析项目 ZDFYJYK/SOP-A-02-2013 第 1 版 第 0 次修改第 2 页 共 7 页 4.标本类型4.1 标本类型：新鲜 CSF。4.2 标本拒收条件：拒收延迟室温 2h、冷藏 6h 未送达标本。4.3 标本保存与稳定性：一般室温 1h 内完成检验，久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检查。5.要求的容器、防腐剂或添加物、仪器、试剂或分析系统 5.1 标本容器：BD 无促凝成分红头管或洁净干燥带盖玻璃管。5.2 试剂5.2.1 试剂组分：生理盐水 0.9%Nacl 溶液白细胞稀释液 1%冰乙酸（1ml 分析纯
4、冰醋酸+蒸馏水至 100ml)A 液：曙红、甲醇刘氏快速瑞氏染色液B 液：亚甲蓝潘氏试剂 10%苯酚溶液（纯苯酚 10ml+蒸馏水至 100ml） 5.2.2 试剂存储和有效期：试剂名称 存储条件 有效期 开瓶有效期 位置生理盐水 室温 1 年 1 年 存货柜/血常规室操作台冰乙酸 室温 2 年 1 年 药品柜1%乙酸 冷藏 1 年 1 年 试剂冰箱10%苯酚溶液 室温 1 年 1 年 药品柜刘氏快速瑞氏染色液 室温 2 年 6 个月 药品柜/染色操作台5.3 仪器：OLYMPUS 光学显微镜，血细胞计数板。 6. 校准程序 （计量学溯源性）常规分析项目 ZDFYJYK/SOP-A-02-20
5、13 第 1 版 第 0 次修改第 3 页 共 7 页 不适用7. 质量控制，控制品使用水平和频率，允许限的纠正措施不适用8. 程序步骤 8.1 一般性状检查：轻轻混匀 CSF，观察量、颜色、有无凝块和透明度（一般细胞数300/l 个时或蛋白增加可产生混浊） ，并记录。8.2 显微镜检查8.2.1 细胞计数（无凝块标本）（1）清或微混标本：a) 混匀后直接冲入计数池，计数四角四大方格内细胞总数（包括 RBC，NUCL ） 。b) 用白细胞稀释液作 1：1 稀释，计数有核细胞数c) 红细胞数细胞总数有核细胞数（当白细胞数30 个/l 时，在白细胞计数池中直接分类至少 50 个白细胞）（2）混浊及
6、以上标本：a)稀释标本：于清洁试管中按上表进行稀释，用以计数细胞总数；b)溶解 RBC：于清洁试管中按上表进行稀释，用以计数有核细胞数；c)冲池；计数d)红细胞数=细胞总数有核细胞数8.2.2 有凝块或粘稠标本：（1）用吸管旋转并挤压凝块，挤出里面的液体及细胞。（2）2000rpm5min 离心，分离上清液和沉渣。（3 ）混匀沉渣，涂片，用高倍镜观察 NUCL、RBC。（4 ）报告每高倍镜视野的红细胞和有核细胞数。8.2.3 离心获取沉渣和上清液：将完成计数的 CSF 离心，2000rpm5min 离心, 吸出上 清液于另一试管，并在试管上编号。8.2.4 瑞氏染色：当 NUCL106/l 时
7、进行操作。将沉渣混匀涂片，厚薄根据有核外观 稀释 样本量 稀释液/溶解剂粉色/轻度混浊 1:20 20l 380l红色/混浊 1:50 10l 490l带血量极高/极度混浊 1:100 10l 990l常规分析项目 ZDFYJYK/SOP-A-02-2013 第 1 版 第 0 次修改第 4 页 共 7 页 细胞数而定，血性标本可考虑推片。待干后，瑞氏染色进行分类（分100 个 NUCL） ；如见有不能分类细胞或怀疑有恶性细胞时，应请示上级主管，由有经验的上级主管进行分析，并在报告时另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤细胞等。8.3 潘氏试验8.3.1 试验操作：取小试管一支，加入 10%的石碳酸
8、水溶液约 5ml，用一次性吸管加一滴 CSF 上清液立即在黑色背景灯照下观察结果。8.3.2 结果判定：阴性：清晰透明。弱阳性（）：微呈白雾状，在黑色背景下才能看到。阳性（+）：灰白色云雾状。（2+）：白色浑浊。（3+)：白色浓絮状沉淀。（4+）：白色凝块。9. 计算结果原理 9.1 颜色9.1.1 红色：常见于穿刺损伤或出血性病变。为区别蛛网膜下腔出血和穿刺损伤应注意：(1)离心沉淀后：如上层液体呈黄色，隐血试验阳性，多为蛛网膜下腔出血，且出血时间已经超过 4 小时。如上层液体澄清无色，红细胞均沉管底，多为穿刺出血或因病变所致的新鲜出血。（2）红细胞皱缩，不仅见于陈旧性出血，在穿刺损伤引起出
9、血时也可看到，因脑脊液渗透压较血浆高所致。9.1.2 黄色：可因陈旧性蛛网膜下腔或脑室出血、椎管梗阻、化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、重症如核黄疸等引起。常规分析项目 ZDFYJYK/SOP-A-02-2013 第 1 版 第 0 次修改第 5 页 共 7 页 9.1.3 白色或灰白色：多因白细胞增加所致，常见于化脓性脑膜炎。9.1.4 褐色或黑色：常见于脑膜黑色素瘤。9.1.5 绿色：可见于绿脓假单胞菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎、高胆红素血症和脓性脑脊液。9.2 透明度：脑脊液混浊程度与细胞数量有关，脑脊液中细胞数超过 30010/L 时，可出现混浊。蛋白质含量增加或含大量微生物也可产
10、生混浊。9.3 凝固性：结核性脑膜炎静置 12-24 小时后，标本表面有纤细的网膜形成。蛛网膜下腔梗阻时，可产生黄色胶冻状。9.4 潘氏试验：有脑组织和脑脊髓膜疾患时常成阳性反应如化脓性脑脊髓膜炎、梅毒性中枢神经系统疾病、脊髓灰质炎、流行性脑炎等。脑出血时多呈阳性反应，如外伤性血液混入脑脊液中，亦呈阳性反应。9.5 细胞分类：9.5.1 中枢神经系统病变的 CSF，细胞可增多，其增多的程度及细胞的种类与病变的性质有关。9.5.2 中枢神经系统病毒感染、结核性或霉菌性脑脊髓膜炎时，细胞数可中度增加，常以淋巴细胞为主。9.5.3 细菌感染时（化脓性脑脊髓膜炎） ，细胞数显著增加，以中性粒细胞为主。
11、9.5.4 寄生虫病时，可见较多的嗜酸性粒细胞。9.5.4 脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数红细胞。 10. 生物参考区间 颜色（COLOR) 无色 透明度（clearity)透明凝固性（coagulability）无凝块 潘氏试验（pandys test）阴性 OR 弱阳性有核细胞计数（CSFNUCL)成人（0-8）10 6/L 中性粒细胞（NE) 成人（0-6%）常规分析项目 ZDFYJYK/SOP-A-02-2013 第 1 版 第 0 次修改第 6 页 共 7 页 （正常脑脊液中白细胞主要为淋巴细胞、单核细胞，之比约为 7:3，可含极少中性粒细胞） 。11.警告值、危急值（适用
12、时）12.检验结果可报告区间13.对超出可报告范围的结果的处理13.1 如检到细菌时应建议培养确认。13.2 有不能分类细胞，应请示上级主管，并另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤细胞。14.实验室解释 15.安全防护措施 15.1 所有样品按具有潜在传染性的标本处理。15.2 测定完成后，上清液及沉渣试管于 2000mg/L 有效氯消毒液浸泡 4 小时以上，倒入医疗废物下水槽，由医院统一消毒处理；塑料试管或容器等容器等医疗废弃物倒入黄色医疗垃圾袋，贴上标签并封口，由医院统一销毁处理。15.3 原液保存 48 小时或以上，倒入黄色医疗垃圾袋，贴上标签并封口，由医院统一销毁处理，并做记录。16.最常见的误差源。儿童（0-15）10 6/L新生儿（0-30）106/L新生儿（0-8%）成人（40-80%） 成人（15-45%）淋巴细胞（LY）新生儿（5-35%）单核细胞（MO）新生儿（50-90%）红细胞计数（CSFRBC) 010/L常规分析项目 ZDFYJYK/SOP-A-02-2013 第 1 版 第 0 次修改第 7 页 共 7 页 手工操作，主观性较强，细胞鉴别需要有经验。17.方法的局限性（如乳糜血、溶血、高胆红素血等干扰影响、交叉反应等） 18.参考文献18.1 全国临床检验操作规程-第三版19.有关引用程序与文件20.SOP 涉及的记录与表格
