1、木瓜蛋白酶酶活力测定1、 原理蛋白酶在一定温度与 pH 条件下，水解酪蛋白底物，然后加入三氯乙酸终止酶反应，并使未水解的酪蛋白沉淀出去，滤液对紫外光有吸收，可用紫外分光光度法测定，根据吸收度计算酶活力。2、 酶活力定义在一定条件下，每分钟水解酪蛋白生成 1ug 酪氨酸所需的酶的量，为 1 个酶活力单位（U） 。3、仪器和设备 恒温水浴（37 0.2）紫 外 分 光 光 度 计4、 试 剂 和 溶 液4.1、酶稀释液称取 L-半胱氨酸盐酸盐（C 3H7NO2SHCLH2O）5.27g，氯化钠（NaCL）23.4g，加水 500ml 溶解，另取乙二胺四乙酸二钠 2.23g 加水 200ml 溶解，
2、合并两液混匀，用0.1mol/l 氢氧化钠溶液或 0.1mol/l 盐酸溶液调至 pH=5.5，加水稀释至 1000ml。42、0.05mol/l 磷酸氢二钠溶液称取磷酸氢二钠（Na 2HPO412H2O）17.89g，加水溶解，并定容至 1000ml。4.3、酪蛋白溶液称取经硅胶干燥器忠干燥至衡重的酪蛋白 0.6g（精确到 0.0002g） ，置烧杯中，假如0.05mol/l 磷酸氢二钠溶液 80ml。在沸水浴忠边加热边搅拌，直至完全溶解，冷却后，用0.1mol/l 盐酸调至 pH=7.0,转移到 100ml 容量瓶中，加水至刻度。临用现配。4.4、三氯乙酸溶液称取三氯乙酸 8.995g，加
3、无水乙酸钠 14.97g，冰乙酸 9.45ml 加适量水溶解后，加水使成 500ml，振摇均匀。4.5、酪氨酸标准溶液称取于 105 干 燥 至 衡 重 的 酪 氨 酸 50mg（ 精 确 0.0002g） 用 0.1mol/l盐 酸 溶 解 ， 移 入 100ml容量 瓶 中 ， 并 用 0.1mol l盐 酸 调 至 刻 度 ， 摇 匀 ， 即 可 得 含 酪 氨 酸 50ug ml的 溶 液 。4.6、 试 样 溶 液称 取 木 瓜 蛋 白 酶 0.9g（ 精 确 0.0002g） 置 于 研 钵 中 ， 加 入 少 量 酶 稀 释 液 研 磨 20min， 用 酶 稀 释 液移 至 2
4、50ml容 量 瓶 中 ， 加 酶 稀 释 液 至 刻 度 ， 充 分 摇 匀 ； 取 出 上 述 液 体1ml以 酶 稀 释 液 稀 释 ， 定 容20ml， 充 分 摇 匀 ， 供 测 试 用 （ 60min内 使 用 ） 。5、 测 定 步 骤吸 取 试 样 溶 液 1.00ml置 于 10ml具 塞 比 色 管 中 ， 于 37 0.2 水 浴 中 保 温 10min， 加 入 在 370.2 水 浴 中 预 热 的 酪 蛋 白 溶 液 5.00ml， 摇 匀 ， 置 37 0.2 水 浴 中 ， 反 应 十 分 钟 ， 加 入 在 370.2 水 浴 中 预 热 的 三 氯 乙 酸
5、溶 液 5.00ml， 摇 匀 ， 于 37 0.2 水 浴 中 放 置 40min， 用 干 燥 滤 纸 滤 过 ，取 滤 液 ， 在 2h内 在 波 长 为 275nm处 用 蒸 馏 水 做 参 比 测 出 滤 液 的 吸 光 度 A1。空 白 试 验 ： 吸 取 式 样 溶 液 1.00ml置 于 10ml具 塞 比 色 管 中 ， 于 37 0.2 水 浴 中 保 温 10min， 加入 在 37 0.2 水 浴 中 预 热 的 三 氯 乙 酸 溶 液 5.00ml， 摇 匀 ， 反 应 10min， 加 入 在 37 0.2 水 浴 中预 热 的 酪 蛋 白 溶 液 5.00ml，
6、摇 匀 ， 于 37 0.2 水 浴 中 放 置 40min， 用 干 燥 滤 纸 滤 过 ， 取 滤 液 ， 在 2h内 在 波 长 为 275nm初 拥 蒸 馏 水 为 参 比 册 数 滤 液 的 吸 光 度 A2。酪 氨 酸 标 准 溶 液 的 吸 光 度 ： 用 蒸 馏 水 做 参 比 ， 在 波 长275nm处 测 定 50ug/ml酪 氨 酸 标 准 溶 液 的 吸光 度 A3。6、 结 果 计 算木 瓜 蛋 白 酶 活 力 X1（ U g） 按 公 式 计 算 ：X1= 023)(mAn式 中 ：A1-木 瓜 蛋 白 酶 的 吸 光 度 ；A2-空 白 试 验 的 吸 光 度 ；A3-酪 氨 酸 标 准 溶 液 的 吸 光 度 ；m1-对 照 品 溶 液 每 毫 升 中 含 酪 氨 酸 的 量 ， 单 位 为 微 克 ；m2-试 样 的 质 量 ， 单 位 为 克 ；n-试 样 溶 液 的 稀 释 倍 数 。7、 允 许 差二 次 平 行 测 定 结 果 的 相 对 误 差 应 不 大 于 10%， 取 其 算 术 平 均 值 为 测 定 结 果 。
