1、皮上划痕用鼠疫活疫苗Pishang Huahenyong Shuyi HuoyimiaoPlague Vaccine （Live） for Percutaneous Scarification本品系用鼠疫杆菌的弱毒菌株经培养后收集菌体，加入稳定剂冻干制成。用于预防鼠疫。1 基本要求生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。2 制造2.1 菌种生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。2.1.1 名称及来源采用鼠疫杆菌弱毒菌株 EV 株。2.1.2 种子批的建立应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。2.1.3 种子批的传代工作种
2、子批菌种启开至疫苗生产，传代应不超过 3 代。2.1.4 种子批菌种的检定2.1.4.1 培养特性在琼脂平皿上，3537培养 4448 小时之菌落应为粗糙型，在肉汤培养基的液面有薄菌膜，管底有沉淀物，肉汤透明。2.1.4.2 染色镜检涂片染色镜检，为革兰阴性杆菌。2.1.4.3 生化反应发酵葡萄糖，产酸不产气；石蕊牛乳轻度变红；在甘油培养基内不产酸不产气（附录 ） 。2.1.4.4 噬菌体裂解试验将 EV 菌种涂于琼脂平皿上，加入稀释度为 10-6以上的鼠疫噬菌体 1 滴，于 28培养4448 小时，噬菌体流过处应无本菌生长。2.1.4.5 特异性毒性试验选用体重 300400g 豚鼠 3 只
3、，每只皮下注射含菌 1.21010（于 2830培养4448 小时）的培养物。在注射后第 6 天解剖 1 只，第 21 天解剖 2 只。肉眼检查注射部位、脾、肝和肺，并用脾、肝、肺及心血进行培养，其中心血和肺经培养应无本菌生长。肉眼检查病变，注射部位可见充血，浸润变为脓疡，肝和脾可有丘疹状结节，肺部不应有鼠疫特异病变为合格。肺部如有显著病变时，应用同数量豚鼠复试，若仍有显著病变时，菌种应废弃。2.1.4.6 免疫力试验选用体重 200250g 的豚鼠 10 只，每只皮下注射含菌 7.0105（于 2830培养4448 小时）的培养物，于 2025 天后进行攻击，每只皮下感染鼠疫强毒菌 200M
4、LD。同时用 3 组豚鼠作对照，每组 3 只，各组豚鼠分别皮下注射 0.5MLD、1MLD 及 2MLD 的毒菌。免疫组及对照组至少观察 25 天。免疫动物存活不少于 8 只；而对照动物注射 0.5MLD 部分死亡，注射 1MLD 或 2MLD 全部死亡时，免疫力试验为合格。2.1.5 种子批保存种子批应冻干保存于 8 以下。2.2 原液2.2.1 生产用种子2.2.1.1 第 1 代菌种将工作种子批菌种启开后，接种于厚金格尔琼脂培养基上，于 2830培养 4448小时为第 1 代，置 28保存可使用 15 天。2.2.1.2 第 2 代菌种用生理氯化钠溶液将第 1 代菌种洗下，接种足够量的种
5、子瓶，于 2830培养4448 小时为第 2 代， 培养物经肉眼纯菌检查合格后，弃去凝固水，用无菌生理氯化钠溶液制成菌悬液。 由此制备适宜数量的生产用种子。2.2.1.3 第 3 代菌种在第 2 代菌种不够的情况下，用生理氯化钠溶液将第 2 代菌种洗下，接种足够量的种子瓶，于 2830培养 4448 小时为第 3 代， 培养物经肉眼纯菌检查合格后，弃去凝固水，用无菌生理氯化钠溶液制成菌悬液。 由此制备适宜数量的生产用种子。2.2.2 生产用培养基采用厚金格尔琼脂培养基（pH6.87.2）或经批准的其他培养基。2.2.3 菌种接种和培养将第 2 代或第 3 代生产用种子接种 2.2.2 项培养基
6、上，于 2830培养 4448 小时后，逐瓶肉眼检查，有杂菌者废弃。2.2.4 采集合并用由蔗糖、明胶、硫脲、味精及尿素组成的稳定剂洗下菌苔（洗菌前弃去凝固水）或将菌苔刮入上述稳定剂内，进行纯菌试验，合格后方可合并制成原液。2.2.5 原液检定按 3.1 项进行。2.3 半成品2.3.1 配制根据 3.1.2 项测定的原液浓度，用稳定剂稀释至每 1 ml 含菌 1.61010。2.3.2 半成品检定按 3.2 项进行。2.4 成品2.4.1 分批应符合“生物制品分批规程”规定。2.4.2 分装与冻干应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。分装后应立即冻干，可真空封口，亦可充氮封口。2.4.3 规
7、格按标示量复溶后每瓶 0.5ml（10 次人用剂量） ，含菌 8.0109； 按标示量复溶后每瓶1.0ml（ 20 次人用剂量） ，含菌 1.61010。每 1 次人用剂量含活菌数应不低于 2.0108。2.4.4 包装应符合“生物制品包装规程”规定。3 检定3.1 原液检定3.1.1 纯菌检查按附录 A 方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，应符合鼠疫 EV 菌株特征，不得有杂菌。3.1.2 浓度测定用国家药品检定机构分发的浓度测定用参考品，以分光光度法或其它方法测定浓度。3.2 半成品检定纯菌检查按 3.1.1 项进行。3.3 成品检定除水分测定外，按标示量加入氯化钠注射液复溶后，进行其余各项
8、检定。3.3.1 鉴别试验按 2.1.4.4 项进行。3.3.2 物理检查3.3.2.1 外观应为白色或淡黄色疏松体，按标示量加入生理氯化钠溶液后，应在半分钟内复溶，并呈均匀悬液。3.3.2.2 装量差异按附录 A 中装量差异项进行，应符合规定。3.3.3 水分应不高于 3.0%（附录 D） 。3.3.4 纯菌检查按 3.1.1 项进行。3.3.5 菌落和菌形检查应呈典型粗糙型菌落，涂片染色镜检，为革兰阴性杆菌。3.3.6 浓度测定用国家药品检定机构分发的浓度测定用参考品，以分光光度法测定浓度，每 1 次人用剂量含菌数不高于 9.5108。3.3.7 活菌数测定取本品 3 瓶，混匀并稀释至菌数
9、为 1.0103/ml，接种 5 个平皿，每个平皿接种0.1ml。均匀涂抹后置 2830培养 23 天。每 1 次人用剂量活菌数应 不低于 2.0108。3.3.8 效力测定取每 5 批疫苗中的首批进行效力测定。用体重 250300g 豚鼠 10 只，每只皮下注射含菌 5.0107，注射后 2025 天以 200MLD 的鼠疫毒菌进行皮下攻击。同时有 3 组豚鼠作对照，每组 3 只，分别于各组豚鼠皮下注射 0.5MLD、1MLD 和 2MLD。各组动物于注射后，观察 25 天。免疫动物存活不少于 8 只；而对照组动物注射 0.5MLD 部分死亡，注射 1MLD或 2MLD 全部死亡时，效力测定
10、为合格。3.3.9 特异性毒性检查取体重 250350g 豚鼠 2 只，每只皮下注射含菌 1.21010的本品，第 6 天称体重，体重减轻应不超过 20，并取其中 1 只解剖，另 1 只观察到 21 天解剖。检查项目及要求同 2.1.4.4 项。3.3.10 稀释剂稀释剂为氯化钠注射液。4 保存、运输及有效期于 28避光保存和运输，自 生产 之日起有效期为 1 年。5 使用说明应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。皮上划痕用鼠疫活疫苗使用说明药品名称 通用名：皮上划痕用鼠疫活疫苗 英文名称：Plague Vaccine for Percutaneous Scarification (li
11、ve)汉语拼音： Pishang Huahen Yong Shuyi Huo Yimiao成分和性状本品系用鼠疫菌弱毒菌株经培养后收集菌体， 加入稳定剂冻干制成。为白色或淡黄色疏松体，加入氯化钠注射液后在半分钟内完全溶解。辅料：按批准的执行。接种对象疫区或通过疫区的人员。作用与用途接种本疫苗后，可使机体产生免疫应答。用于预防鼠疫。规格每瓶 10 次人用剂量,含菌 8.0109或 20 次人用剂量含菌 1.61010。每 1 次人用剂量活菌数应大于 3.6108。用法用量 免疫程序和剂量 按标示量加入氯化钠注射液溶解。每瓶 20 次人用剂量者加入 1.0ml，10 次人用剂量者加入 0.5ml，
12、溶解后应在 3 小时内用完。 在上臂外侧三角肌上部附着处皮上划痕接种。在接种部位滴加上疫苗(每 1 次人用剂量 0.05ml)。用消毒针划成“井”字，划痕长度约 11.5cm，应以划破表皮稍见血迹为宜。划痕处用针涂压 10 余次，使菌液充分进入划痕内。接种后局部应裸露至少 5 分钟。 14 周岁以下儿童，疫苗滴 2 处划 2 个“井”字，14 周岁以上者疫苗滴于 3 处划 3个“井”字。 “井”字间隔 23cm。 接种人员每年应免疫 1 次。不良反应接种后反应轻微，少数人划痕处会出现浸润，一般不影响活动，个别人体温可能稍有增高，一般可自行消退。常见不良反应：1 接种后 24 小时内，在注射部位
13、可能感到疼痛和触痛，注射局部红肿浸润弱、中度反应 ,多数情况下于 23 天内自动消失。2 接种者在接种疫苗后 1 2 周内，可能出现一过性发热反应。其中大多数的发热反应为轻度发热反应，持续 12 天后可自行缓解，一般不需处理，必要时适当休息，多喝开水，注意保暖，防止继发感染；对于中度发热反应或发热时间超过 48 小时者，可给予物理或药物方法进行对症处理。罕见不良反应：严重发热反应，应给予物理及药物方法进行对症处理，以防高热惊厥。极罕见不良反应：淋巴结肿大，血管神经性水肿。禁忌 患严重疾病、免疫缺陷症及用免疫抑制剂治疗者；1 已知对该疫苗的任何组份过敏者。2 患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的
14、急性发作期和发热者。3 免疫缺陷、免疫功能低下或正在接受免疫抑制治疗者。4 妊娠期或 6 个月内的哺乳期妇女。注意事项(3) 疫苗瓶有裂纹或标签不清者，均不得使用。1 本品仅供皮上划痕用，严禁注射。2 以下情况者慎用：家族和个人有惊厥史者、患慢性疾病者、有癫痫史者、过敏体质者、6 个月以上的哺乳期妇女。3 疫苗瓶有裂纹、标签不清或失效者、疫苗复溶后出现异常浑浊者均不得使用。4 疫苗开启后应立即使用，如需放置，应置 2 8 ，并于一小时内用完，剩余均应废弃。5 应备有肾上腺素等药物，以供偶有发生的严重过敏反应时急救用，接受注射者在注射后应在现场观察至少 30 分钟。6 接种本品和注射免疫球蛋白应至少间隔 31 个月以上，以免影响免疫效果。7 开启疫苗瓶和接种时，切勿使消毒剂接触疫苗。8 消毒皮肤只可用酒精，不可用碘酒，并在酒精挥发干后再行接种。9 本品与抗生素同时应用时可能影响疫苗的免疫效果。10 本品为减毒活疫苗，不推荐在该疾病流行季节使用。贮藏 于28避光保存和运输有效期1年。 12个月执行标准 批准文号生产企业企业名称：生产地址：邮政编码：电话号码：传真号码：网址： 参考文献
