问用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移.doc

1、问 ： 用 HPLC 进 行 分 析 时 保 留 时 间 有 时 发 生 漂 移 ， 有 时 发 生 快 速 变 化 ， 原 因 何在 ?如 何 解 决 ?答 ： 关 于 漂 移 问 题 ： 1 温 度 控 制 不 好 ， 解 决 方 法 是 采 用 恒 温 装 置 ， 保 持 柱 温 恒 定2 流 动 相 发 生 变 化 ， 解 决 办 法 是 防 止 流 动 相 发 生 蒸 发 、 反 应 等3 柱 子 未 平 衡 好 ， 需 对 柱 子 进 行 更 长 时 间 的 平 衡关 于 快 速 变 化 问 题 1 流 速 发 生 变 化 ， 解 决 办 法 是 重 新 设 定 流 速 ， 使 之

2、 保 持 稳 定2 泵 中 有 气 泡 ， 可 通 过 排 气 等 操 作 将 气 泡 赶 出 。3 流 动 相 不 合 适 ， 解 决 办 法 为 改 换 流 动 相 或 使 流 动 相 在 控 制 室 内 进 行 适 当 混合问 ： 色 质 联 用 中 毛 细 柱 的 选 择 应 注 意 什 么 问 题 ?答 ： 1 柱 效 要 高2 热 稳 定 性 好3 化 学 惰 性 强具 体 选 择 应 注 意 1 柱 极 性 。 根 据 分 析 样 品 选 择 不 同 极 性 的 柱 子 进 行 分 析2 柱 子 内 径 。 内 径 大 小 决 定 柱 容 量3 液 膜 厚 度 。 分 析 样 品

3、 温 度 一 不 一 样 ， 对 膜 厚 有 不 同 要 求 ， 温 度 高 液 膜 要 厚 ，温 度 低 液 膜 要 薄4 柱 长 度 。 柱 越 长 ， 柱 效 越 高 ， 分 离 效 果 越 好 ， 但 也 存 在 吸 附 问 题 ， 柱 子 过长 ， 分 析 时 间 长 ， 因 此 要 根 据 样 品 考 虑 柱 子 长 度5 外 涂 层 (柱 体 )的 选 择6 另 外 还 有 仪 器 型 号 、 分 析 对 象 等 因 素问 ： 液 相 色 谱 中 峰 出 现 拖 尾 或 出 现 双 峰 的 原 因 是 什 么 ?答 ： 1 筛 板 堵 塞 或 柱 失 效 ， 解 决 办 法 是

4、反 向 冲 洗 柱 子 ， 替 换 筛 板 或 更 换 柱子 。2 存 在 干 扰 峰 ， 解 决 办 法 为 使 用 较 长 的 柱 子 ， 改 换 流 动 相 或 更 换 选 择 性 好 的柱 子问 ： 从 那 些 方 面 可 以 简 单 判 别 毛 细 管 柱 子 的 热 稳 定 性 好 坏 ?答 ： 1 分 配 容 量 (或 容 量 因 子 )K， 好 的 柱 子 在 高 温 运 行 后 ， 分 配 容 量 K不 应 有 明 显 的 下 降 ， 否 则 ， 说 明 柱 子 的 热 稳 定 性 不 好 。2 理 论 塔 板 数 n， 热 稳 定 性 好 的 柱 子 经 受 高 温 后 ，

5、 理 论 塔 板 数 应 基 本 保 持 恒定3 柱 子 的 极 性 。 热 稳 定 性 好 的 柱 子 ， 高 温 前 后 极 性 变 化 不 大 ， 具 体 表 现 为 保留 指 数 I 值 没 有 大 的 变 化 。4 噪 声 。 热 稳 定 性 好 的 柱 子 在 高 温 下 使 用 后 ， 噪 声 不 能 增 加 .5 柱 子 的 去 活 层 ， 毛 细 管 柱 子 涂 固 定 液 前 内 部 一 般 要 用 去 活 性 试 剂 去 活 以 增加 惰 性 。 质 量 好 的 毛 细 管 柱 子 高 温 后 ， 去 活 层 不 应 该 变 化 ， 表 现 在 对 强 极 性 样品 或

6、酸 碱 性 样 品 的 吸 附 性 不 能 增 加 。问 ： 为 什 么 进 样 器 内 的 玻 璃 衬 套 会 对 色 谱 行 为 造 成 影 响 ?答 ： 进 样 器 内 的 玻 璃 衬 套 主 要 有 下 列 作 用 ： 1 提 供 一 个 温 度 均 匀 的 汽 化 室 ， 防 止 局 部 过 热 。2 玻 璃 的 惰 性 不 如 不 锈 钢 好 ， 减 少 了 在 汽 化 期 间 样 品 分 解 的 可 能 性 。3 易 于 拆 换 清 洗 ， 以 保 持 清 洁 的 汽 化 室 表 面 ， 一 些 痕 量 非 挥 发 性 组 分 会 逐渐 积 累 残 存 于 汽 化 室 ， 高 温

7、 下 会 慢 慢 分 解 ， 使 基 流 增 加 ， 噪 声 增 大 ， 通 过 清 洗玻 璃 衬 套 可 以 消 除 这 种 影 响 。4 可 根 据 需 要 选 择 管 壁 厚 度 及 内 径 适 宜 的 玻 璃 衬 套 ， 以 改 变 汽 化 室 的 体 积 ，而 不 用 更 换 整 个 进 样 加 热 块 。 从 以 上 几 个 方 面 可 以 知 道 玻 璃 衬 套 对 色 谱 行 为 造成 影 响 的 原 因 。问 ： 毛 细 管 色 谱 分 流 进 样 时 ， 非 线 性 分 流 的 主 要 原 因 是 什 么 ?答 ： 1 进 样 器 温 度 太 低 ， 样 品 汽 化 不 完

8、 全 ， 发 生 分 级 分 流 。2 进 样 器 温 度 太 高 ， 某 些 组 分 可 能 发 生 热 分 解 ， 也 有 的 样 品 可 能 发 生 催 化 分解 ， 或 样 品 部 分 地 被 吸 附 在 进 样 器 内 表 面 上 。3 在 分 流 点 以 前 样 品 没 有 混 合 均 匀 或 混 合 不 充 分 。4 系 统 的 进 样 垫 ， 柱 接 头 等 地 方 漏 气 。问 ： HPLC 灵 敏 度 不 够 的 主 要 原 因 及 解 决 办 法答 ： 1 样 品 量 不 足 ： 解 决 办 法 为 增 加 样 品 量2 样 品 未 从 柱 子 中 流 出 ： 可 根 据

9、 样 品 的 化 学 性 质 改 变 流 动 相 或 柱 子3 样 品 与 检 测 器 不 匹 配 ： 根 据 样 品 化 学 性 质 调 整 波 长 或 改 换 检 测 器4 检 测 器 衰 减 太 多 ： 调 整 衰 减 即 可 。5 检 测 器 时 间 常 数 太 大 ： 解 决 办 法 为 降 低 时 间 参 数6 检 测 器 池 窗 污 染 ： 解 决 办 法 为 清 洗 池 窗 。7 检 测 池 中 有 气 泡 ： 解 决 办 法 为 排 气 。8 记 录 仪 测 压 范 围 不 当 ： 调 整 电 压 范 围 即 可 。9 流 动 相 流 量 不 合 适 ： 调 整 流 速 即

10、可 。10 检 测 器 与 记 录 仪 超 出 校 正 曲 线 ： 解 决 办 法 为 检 查 记 录 仪 与 检 测 器 ， 重 作校 正 曲 线 。问 ： 做 HPLC 分 析 时 ， 柱 压 不 稳 定 ， 原 因 何 在 ?如 何 解 决 ?答 ： 原 因 可 能 有 ： 1 泵 内 有 空 气 ， 解 决 的 办 法 是 清 除 泵 内 空 气 ， 对 溶 剂 进 行 脱 气 处 理 ；2 比 例 阀 失 效 ， 更 换 比 例 阀 即 可 。3 泵 密 封 垫 损 坏 ， 更 换 密 封 垫 即 可 。4 溶 剂 中 的 气 泡 ， 解 决 的 办 法 是 对 溶 剂 脱 气 ，

11、必 要 时 改 变 脱 气 方 法 ；5 系 统 检 漏 ， 找 出 漏 点 ， 密 封 即 可 。6 梯 度 洗 脱 ， 这 时 压 力 波 动 是 正 常 的 。问 ： 做 PGS MS 分 析 时 ， 如 何 防 止 焦 油 状 污 染 物 进 入 毛 细 柱 ?答 ： 聚 合 物 ， 尤 其 是 一 些 含 氮 、 硫 及 卤 素 的 高 分 子 裂 解 时 ， 常 有 焦 油 状 物质 产 生 。 为 防 止 这 种 焦 油 状 物 质 进 入 毛 细 柱 造 成 污 染 而 使 柱 性 能 下 降 ， 可 采 用保 护 预 柱 ， 即 在 裂 解 器 与 毛 细 柱 之 间 接 一

12、 填 充 预 柱 ， 通 过 控 制 预 柱 温 度 而 使 焦油 状 物 质 滞 留 在 预 柱 内 ， 预 注 可 置 于 GC 气 化 室 内 ， 这 样 既 容 易 控 制 温 度 ，又 减 少 系 统 的 死 体 积 ， 当 然 ， 预 柱 填 料 需 经 常 更 换 。问 ： 我 最 近 更 换 了 另 一 种 牌 号 的 ODS 柱 ， 虽 然 分 离 情 况 仍 可 以 ， 但 保 留时 间 不 能 重 现 ， 为 什 么 ?答 ： 这 是 因 为 被 分 析 物 可 能 具 有 形 成 氢 健 的 能 力 。 尽 管 过 去 几 年 来 ， 填 料的 制 造 技 术 有 了

13、极 大 的 提 高 ， 但 不 同 的 厂 商 的 ODS 填 料 表 面 硅 醇 基 的 浓 度不 同 。 正 是 这 些 硅 醇 基 可 能 与 样 品 发 生 相 互 作 用 。 因 此 ， 同 一 被 分 析 物 中 的 各组 分 在 不 同 牌 号 的 ODS 柱 上 的 相 对 保 留 时 间 就 可 能 不 同 。 在 流 动 相 中 加 入 少量 竞 争 物 ， 如 三 乙 基 胺 (TEA)， 将 会 使 硅 醇 基 的 成 键 能 力 饱 和 ， 从 而 保 证 不 同牌 号 柱 子 上 的 相 对 保 留 时 间 具 有 较 好 的 重 现 性 。问 ： 我 购 买 的

14、HPLC 柱 验 收 测 试 时 柱 压 过 高 ， 请 问 为 什 么 ?答 ： 柱 压 过 高 是 HPLC 柱 用 户 最 常 碰 到 的 问 题 。 其 原 因 有 多 方 面 ， 而 且 常常 并 不 是 柱 子 本 身 的 问 题 ， 您 可 按 下 面 步 骤 检 查 问 题 的 起 因 。1 拆 去 保 护 柱 ， 看 柱 压 是 否 还 高 ， 否 则 是 保 护 柱 的 问 题 ， 若 柱 压 仍 高 ， 再 检查 ；2 把 色 谱 柱 从 仪 器 上 取 下 ， 看 压 力 是 否 下 降 ， 否 则 是 管 路 堵 塞 ， 需 清 洗 ， 若压 力 下 降 ， 再 检

15、查 。3 将 柱 子 的 进 出 口 反 过 来 接 在 仪 器 上 ， 用 10 倍 柱 体 积 的 流 动 相 冲 洗 柱 子 ，(此 时 不 要 连 接 检 测 器 ， 以 防 固 体 颗 粒 进 入 流 动 性 )。 这 时 ， 如 果 柱 压 仍 不 下降 ， 再 检 查 ； 4 更 换 柱 子 入 口 筛 板 ， 若 柱 压 下 降 ， 说 明 你 的 溶 剂 或 样 品 含 有 颗 粒 杂 质 ， 正是 这 些 杂 质 将 筛 板 堵 塞 引 起 压 力 上 升 。 若 柱 压 还 高 ， 请 与 厂 商 联 系 。 一 般 情 况下 ， 在 进 样 器 与 保 护 柱 之 间

16、接 一 个 在 线 过 滤 器 便 可 避 免 柱 压 过 高 的 问 题 ，SGE 提 供 的 Rheodyne 7315 型 过 滤 器 就 是 解 决 这 一 问 题 的 最 佳 选 择 。问 ： 高 温 毛 细 柱 的 使 用 寿 命 一 般 为 多 长 ?答 ： 毛 细 柱 寿 命 除 决 定 于 柱 子 本 身 的 性 能 外 ， 在 很 大 程 度 上 取 决 于 使 用 情况 ， 比 如 使 用 温 度 、 样 品 状 态 ， 进 样 量 等 ， 如 果 在 其 使 用 温 度 范 围 内 ， 样 品 干净 ， 色 谱 柱 不 被 污 染 的 情 况 下 ， 柱 子 寿 命 一

17、 般 在 23 年 之 间 。问 ： 如 毛 细 管 柱 被 污 染 ， 柱 效 和 分 辨 率 降 低 ， 有 何 方 法 使 它 恢 复 ?是 否可 通 过 老 化 来 解 决 ?答 ： 根 据 柱 污 染 程 度 可 采 取 不 同 的 方 法 来 解 决 ， 如 果 污 染 不 严 重 ， 污 染 物沸 点 不 是 太 高 ， 可 通 过 老 化 来 解 决 ， 但 老 化 温 度 不 可 超 过 柱 子 的 最 高 使 用 温 度 ，且 一 般 要 较 长 时 间 (830 小 时 )， 如 果 污 染 较 严 重 ， 或 通 过 老 化 仍 不 能 使 柱 性能 恢 复 ， 那 就

18、 必 须 采 用 溶 剂 清 洗 ， 通 常 是 用 5 倍 柱 容 积 的 溶 剂 (如 正 戊 烷 ，二 氯 甲 烷 等 )通 过 色 谱 柱 。 当 然 ， 清 洗 溶 剂 用 的 越 多 ， 对 柱 性 能 的 损 坏 越 大 ，清 洗 完 后 ， 在 通 载 气 老 化 一 定 时 间 ， 如 果 柱 性 能 恢 复 ， 便 可 继 续 使 用 。 必 须 指出 ： 只 有 交 联 柱 才 能 清 洗 ， 对 于 非 交 联 柱 ， 清 洗 柱 会 彻 底 失 效 ， 因 为 固 定 液 被洗 掉 了 ， 至 于 清 洗 用 溶 剂 的 选 择 ， 可 参 考 说 明 书 。问 ： BPX70 毛 细 管 柱 是 否 可 用 于 GC MS 分 析 ?答 ： 完 全 可 以 ， BPX70 为 极 性 柱 ， 使 用 温 度 范 围 宽 (25260 )， 程 序升 温 可 达 290 ， 流 失 低 ， 适 合 于 分 析 脂 肪 酸 甲 酯 的 各 种 位 置 和 几 何 异 构 体 ，药 物 异 构 体 ， 碳 水 化 合 物 等 。 因 BPX70 为 交 联 住 ， 故 用 于 GC MS 很 稳定 ， 污 染 后 可 清 洗 再 生 。