1、人骨膜素(POSTN)酶联免疫检测试剂盒使用说明书使用前仔细阅读本说明书。本酶联免疫试剂盒是基于生物素双抗体夹心技术原理，来检测人骨膜素 (POSTN)，只能用于研究用途，不得用于医学诊断。用 途： 用于人血清、血浆及相关液体样本中骨膜素(POSTN)的测定。工作原理本试剂盒采用的是生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定样品中人骨膜素(POSTN)的水平。向预先包被了人骨膜素(POSTN)单克隆抗体的酶标孔中加入骨膜素(POSTN)，温育；温育后，加入生物素标记的抗 POSTN 抗体，再与链霉亲和素-HRP 结合，形成免疫复合物，再经过温育和洗涤，去除未结合的酶，然后加入底物 A、B
2、 ，产生蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅与样品中人骨膜素(POSTN)的浓度呈正相关。试剂盒组成 1 标准品（48ng/ml） 0.5ml 7 显色剂 A 液 6ml2 标准品稀释液 3ml 8 显色剂 B 液 6ml3 酶标包被板 12 孔8 条 9 终止液 6ml4 链霉亲和素-HRP 6ml 10 说明书 1 份5 30 倍浓缩洗涤液 20ml 11 封板膜 2 张6 生物素标记的抗- POSTN 抗体1ml 12 密封袋 1 个需要而未提供的试剂和器材1 37恒温箱。2 标准规格酶标仪。3 精密移液器及一次性吸头4 蒸馏水，5 一次性试管6 吸水纸注意事项1 从 2-8
3、取出的试剂盒，在开启试剂盒之前要室温平衡至少 30 分钟。酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。3 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。4 为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和封板膜。5 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。6 底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。洗板方法手工洗板方法：甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将稀释后的洗涤液至少 0.35ml 注入孔内，浸泡 1-2 分钟。根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如
4、果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。标本要求 1不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。2标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20保存，但应避免反复冻融操作程序1 标准品的稀释：（本试剂盒提供原倍标准品一支，用户请按照说明自行在小试管中倍比稀释）：2 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3 加样：1）空白孔： 空白对照孔不加样品， 生物素标记的抗 POSTN 抗体，链霉亲和素 -H
5、RP，只加显色剂 A&B 和终止液， 其余各步操作相同； 2）标准品孔：加入 标准品 50l， 链霉素 -HRP50l（标准品中已事先整合好生物素抗体，故不加） ；3)待测样品孔:加入 样本 40l，然后各加入 抗 - POSTN 抗体 10l、 链酶亲和素 -HRP50l，盖上封板膜，轻轻振荡混匀，37温育 60 分钟。4 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。5 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。6 显色：每孔先加入显色剂 A 50l，再加入显色剂 B 50l，轻轻震荡混匀，37避光显色 10 分钟。7
6、终止：每孔加终止液 50l，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。8 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（ OD 值） 。 测定应在加终止液后 10 分钟以内进行。9.根据标准品的浓度及对应的 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的 OD 值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。操作程序总结：准备试剂，样品和标准品 24ng/ml （5 号标准品） 120l的原倍标准品加入 120l的标准品稀释液12ng/ml （4 号标准品） 120l的 5 号标准品加入 120l的标准品稀释液6ng/ml （3 号标准品） 120l的 4 号标准品加入 120l的标准品稀释液3ng/ml （2 号标准品） 120l的 3 号标准品加入 120l的标准品稀释液1.5ng/ml （1 号标准品） 120l的 2 号标准品加入 120l的标准品稀释液加入准备好的样品和标准品，生物素标记二抗和酶标试剂，37反应 60 分钟洗板 5 次，加入显色液 A、B，37显色 10 分钟加入终止液10 分钟之内读 OD 值计算检测范围：0.1ng/ml40ng/ml。规格： 96T/盒保存： 2-8 有效期： 6 个月（2-8） 。
