1、第十三章 紫外可见 分光光度法,紫外可见 分光光度法,第一节 概述,通过测定被测物质在特定波长或一定波长范围内光的吸收度，对该物质进行定性和定量分析的方法称为分光光度法，包括紫外可见分光光度法、红外分光光度法、原子吸收分光光度法等。,灵敏度高 准确度较高 适用范围广 操作简便快捷，设备成本低。,分光光度法的特点,第二节 基本原理,一、吸收光谱的分类 10200nm的远紫外光谱； 200400nm的近紫外光谱； 400750nm的可见光谱； 0.752.5um的近红外光谱 2.55.0um的中红外光谱 5.01000um的中红外光谱,二、溶液颜色与光吸收的关系,溶液颜色决定与吸收光的颜色溶液的颜
2、色与吸收光的颜色互补最大吸收波长：指某物质光的吸收曲线中光吸收程度最大处的波长,三、光的吸收定律,光的吸收定律：A=lg（I0/It）=kbc lg（I0/It）光通过溶液时被吸收的程度,通常用A表示，称为吸收度 k比例系数 b液层厚度 C溶液的浓度,三、光的吸收定律,光的吸收定律：A=kbc朗伯定律：光的吸收与吸收层厚度成正比比耳定律：光的吸收与溶液浓度成正比 透射比：透过光强度与入射光强度之比。用T表示 T= I0/It 相关公式:A= lg（I0/It）= lg(1/T),四、摩尔吸收系数,摩尔吸收系数在入射光波长一定的条件下，溶液浓度为1mol/l、液层厚度为1cm时的吸收度。 比吸收
3、系数在入射光波长一定的条件下，溶液浓度为1%、液层厚度为1cm时的吸收度。 反映物质对特定波长光的吸收能力,四、摩尔吸收系数,精密称取干燥失重为5.0% 的维生素B12 0.0075g，置50ml量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀，定量稀释5倍后，照分光光度法于361nm处测得吸收度为0.580。已知本品药品标准给定的吸收系数为207，求其百分比含量。,四、摩尔吸收系数,解：,五、吸收度的加和性,P92 A总=A1+A2+A3+A4+A5,六、光吸收定律的使用范围,偏离吸收定律的原因入射光为非单色光溶液的化学反应。,第三节 目视比色法,用目力观测比较溶液的深浅，确定物质含量的分析方法优点：简单、
4、操作方便 缺点：准确度差 应用：限量分析。,第四节 紫外可见分光光度仪器,一 主要部件P96光源单色器吸收池 检测器测量系统,第四节 紫外可见分光光度仪器,一 主要部件 光源：氘灯200-375和碘钨灯320-2500 单色器：入射狭缝、准光器、色散器、投影器、出射狭缝 吸收池：玻璃吸收池、石英吸收池 检测器：光电转换设备 测量系统：放大器和结果显示装置。,第四节 紫外可见分光光度仪器,二、结构 单波长单光束分光光度计：721、751 单波长双光束分光光度计：自动消零，操作方便；能减小干扰和波动 双波长分光光度计：有干扰组分时的定量分析 三、紫外可见分光光度计型号与性能 四、使用 五、检验与维
5、护,第五节 可见分光光度法,分光光度法利用物质本身对紫外可见光的吸收进行测定。利用显色剂进行显色，生成有色化合物后测定。,第五节 可见分光光度法,一|、显色反应络合、氧化还原 要求： 1、选择性好 2、灵敏度高 3、有色络合物 4、组成恒定，化学性质稳定 5、显色剂颜色与生成物差别大 6、显色反应条件易于控制。,第五节 可见分光光度法,二、显色剂分类：无机、有机、多元配合物三、多元配合物显色体系,第五节 可见分光光度法,四、显色条件的选择 显色剂用量 溶液酸度 显色温度 显色时间 溶剂 消除共存离子干扰,第五节 可见分光光度法,五、光度测定条件的选择 入射光波长选择：考虑灵敏度、选择性 吸光度
6、范围控制理想的吸收度范围 0.20.8调整方法1、调节溶液浓度2、使用不同浓度的吸收池 六、定量分析方法工作曲线P125 七、误差方法误差、仪器误差P130,第六节 紫外分光光度法,一、概述近紫外200-400nm 远紫外10-200nm 二、基本原理P132电子跃迁 三、定性分析P141利用光谱吸收峰的数目、峰位置、吸收强度等特征进行物质的鉴定。常用与标准图谱对比的办法进行定性。 四、定量分析与可见光光度法相同不同点：不需显色剂特点：快速、简便、灵敏度高、重现性好,原子吸收分光光度法,一、简介方法原理,原理： 1、都基于被测物质对光的吸收以朗伯特比耳定律为基础； 2、基于测量吸收光谱峰值吸收
7、系数的相对定量方法。 特点：,一、简介方法特点与应用范围,特点： 1、灵敏度高。 2、选择性好。 3、测定元素范围广,二、仪器组成和结构,二、仪器组成和结构,1、仪器组成光源锐线光源原子化系统火焰、无火焰分光系统反射镜、狭缝、色散元件检测系统检测器、放大器、对数转换器、 显示装置。 2、有单光束和双单光束仪器之分。,三、浓度校准（计算）方法,常用校准方法 标准曲线法 标准加入法 内插法 直接比较法,四、技术术语,吸收灵敏度定义为在最佳实验条件下产生1吸收信号（0.0044Abs）时水溶液中元素的浓度或绝对量。前者称为相对灵敏度，常用于火焰原子吸收分析；后者用于石墨炉原子吸收分析 。为了与分析化学中一般灵敏度概念相区别，现国内普遍采用分别用特征浓度和特征量代替。,
