1、2006/05,1,生物安全实验室的检测验证,2006/05,2,概 述,生物安全实验室是通过物理围场的方式将病原微生物的操作局限在能防止感染性材料特别是防止感染性生物气溶胶扩散到实验室外环境。为了保证病原微生物实验室在实验操作过程中产生的含有病原微生物的“三废”（即感染性固体废物、感染性液体废物和感染性空气）不扩散到实验室外环境，通过各种物理和/或化学手段，使排出实验室 “三废”中的病原微生物达到“零排放”。,2006/05,3,概 述,实验室生物安全通用要求（GB194892004）的11.4条，明确规定“对于新安装的生物安全柜和安全罩及其HEPA滤器的安装与更换，应由有资格的人员进行，安
2、装或更换后应按照经确认的方法进行现场生物和物理的检测，并每年进行验证。”,2006/05,4,概 述,在中华人民共和国卫生行业标准微生物和生物医学实验室生物安全通用准则（WS 2332002），在附录B（规范性附录）有关级生物安全柜的现场检测的B.5中要求，“在颁布实施我国级生物安全柜有关标准之前，进口的级生物安全柜必须符合生产国相应的标准，生产国无相关标准的产品不得进口使用。国产的级生物安全柜生产厂家必须制定相应的企业标准，其性能指标不得低于国外同类产品的标准。出厂时必须按企业标准对每台生物安全柜进行检测并出具检测报告，使用微生物进行的生物安全防护检测不得省略。”,2006/05,5,概 述
3、,生物安全实验室设施的检测与验证，主要是排放口的HEPA滤器； 生物安全实验室设备的检测与验证，主要是生物安全柜和安全罩。 高压灭菌器的检测验证，国家已有相关标准和要求。,2006/05,6,一、生物安全实验室设施的检测验证,生物安全实验室设施的检测对象主要： 半污染区和污染区的洁净度检测 半污染区和污染区以及缓冲间的负压值检测 半污染区和污染区的气流流速和流向检测 HEPA滤器的物理检测 气密性检测 验证对象主要是半污染区和污染区的排风口HEPA滤器对微生物气溶胶滤除率的生物学检测验证。,2006/05,7,半污染区和污染区的洁净度检测,检测的技术方法参照洁净室施工及验收规范（JGJ 719
4、0）。BSL3和ABSL3实验室、BSL4和ABSL4实验室的半污染区和污染的洁净度检测合格范围应该是空气中0.5m的尘粒数352000粒/m3到3520000粒/m3，5m的尘粒数2930粒/m3到29300粒/m3。,2006/05,8,半污染区和污染区以及缓冲间的负压值检测,BSL3和BSL4实验室由外向内分别是清洁区、缓冲间、半污染区、缓冲间和污染区，它们的负压值分别是0Pa、10Pa、20Pa、30Pa和40Pa。 ABSL3和ABSL4实验室由外向内分别是清洁区、缓冲间、半污染区、缓冲间和污染区，它们的负压值分别是0Pa、10Pa、25Pa、40Pa和60Pa。 负压值的测定应在所
5、有的门关闭时进行，并应从平面上最里面的房间依次向外测定。,2006/05,9,半污染区和污染区的气流流速和流向检测,气流流速的检测 （1）单向流气流测定方法在距送风面0.5的垂直截面测定。截面上测点间距不应2，测点数应不少于10个，均匀布置。采用热球风速仪作为检测仪器。 （2）评价标准应符合生物安全实验室设计的每小时换气次数换算的气流流速，同时应考虑实验室内气流流速不应0.24m/s。,2006/05,10,半污染区和污染区的气流流速和流向检测,气流方向的检测和评价 （1）测定方法用发烟器装置测定，测点在送风口和排风口之间的连线方向上，高度为1.1m，均匀布置不少于3个。 （2）评价标准气流流
6、向应符合GB194892004的6.3.3条的要求。,2006/05,11,HEPA滤器的物理检测,HEPA滤器的物理检测,2006/05,12,气密性检测,生物安全实验室的缓冲间、半污染区、缓冲间和污染区房间的气密性应按以下要求进行检测和评价。 1. BSL-3实验室应通过直观检查证实围护结构密封完好。 2. BSL-4实验室除了应通过直观检查证实围护结构密封完好外，还应进行以下的检测和评价：,2006/05,13,气密性检测,方法一：压力衰减试验 A. 检测方法关闭送风气密阀门，关闭门窗，开启排风机，使室内外压差达到160Pa，然后关闭排风机和排风密闭阀。 B. 评价标准观察微压差计压力的
7、上升速度，每分钟上升不超过16Pa即为合格。,2006/05,14,气密性检测,诱导泄漏试验 A. 检测方法 a在室内靠近检测部位,发生0.5m以下的粒子NaCl气溶胶，使粒径局部浓度达到1106/m3以上。 b. 在实验室四周外侧，贴近要评估的墙面和门口的结构连接处，用光学粒子计数器以大约30cm/min的速度在离表面20cm处进行扫描。 c. 在敞开的房间门外，用光学粒子计数器60 cm处进行扫描。 B. 评价标准结构连接无泄漏，门外60 cm处的粒子浓度应室内粒子浓度的0.1%。,2006/05,15,其他检测项目除上述检测内容之外，还需要温度、湿度、噪声和照度等检测，这些参数的检测均应
8、按洁净室施工及验收规范(JGJ 71)的检测方法进行，检测结果符合实验室生物安全通用要求 (GB194892004)和生物安全实验室建筑技术规范(GB50346-2004) 或生物安全实验室设计指标即可。,2006/05,16,HEPA滤器对微生物气溶胶滤除率的生物学检测验证,生物学检测验证的结果应体现三方面的防护效果：一是HEPA滤器对微生物气溶胶的滤除效果；二是能够反映出安装过程中对HEPA滤器有没有损伤；三是反映出HEPA滤器安装的是否严密，不漏气。因此，在对生物安全实验室排风口HEPA滤器物理检测完毕后，必须用经确认的生物学方法进行检测验证。,2006/05,17,HEPA滤器对微生物
9、气溶胶滤除率的生物学检测验证,生物安全实验室排风口HEPA滤器生物学检测验证主要包括以下几个步骤： 检查实验室是否处于正常工作状态； 本底采样； 发生指示微生物气溶胶和指示微生物气溶胶本底的采样； 一级和二级HEPA滤器后的空气样本的采集； 采集样本的培养计数和HEPA滤器滤除率的计算。,2006/05,18,二、生物安全实验室设备的检测验证,生物安全实验室设备的检测验证主要是生物安全柜和安全罩。高压灭菌器的检测验证，国家已有相关的技术标准，参照执行即可。,2006/05,19,生物安全柜的检测和验证,级生物安全柜在出厂前就已经完成了物理（包括噪声、照度、向内风速、下送风速、气流流型等）和生物
10、学检测验证，应有检测报告。生物安全柜在实验室安装后，应进行全面检测，尤其是生物学检测，包括人员保护、样品保护、交叉污染保护和出风口泄漏检测验证。,2006/05,20,生物安全柜的检测和验证,人员保护检测验证人员保护检测验证的具体操作方法可以参照美国国家标准级（层流）生物安全柜（NSF49）。 合格判定标准：从6个AGI-30采样器采集到粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌的CFU数量，在每次检测时不得超过10个。采样时间达30 min时，裂隙式空气采样器的平板计数不得超过5个菌落。必须重复3次试验。对照平板必须是阳性结果。当平板含有300个以上的粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌菌落时，即为阳性。,2006/
11、05,21,生物安全柜的检测和验证,试验样品保护检测验证试验样品保护检测验证的具体操作方法可以参照美国国家标准NSF49。 合格判定标准：每次试验中，在琼脂平板上粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌的菌落数不得超过5个。必须重复3次试验。对照平板必须是阳性结果。当平板含有300个以上的粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌菌落时，即为阳性。,2006/05,22,生物安全柜的检测和验证,交叉污染检测验证交叉污染检测验证的具体操作方法可以参照美国国家标准NSF49。 合格判定标准：从攻击侧壁到距离侧壁36 cm之间的一些琼脂平板可以得到粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌菌落，它们用作阳性对照。每次测试时，在大于38 cm中心
12、处的琼脂平板所得到的菌落总数不得超过2个。在安全柜的左侧和右侧各做3次重复实验。,2006/05,23,生物安全柜的检测和验证,出风口泄漏检测验证出风口泄漏检测是在美国NSF49标准、欧洲EN12469中没有的检测验证项目。导致出风口泄漏的主要原因有两个：一是HEPA滤器与固定框之间密封不严，二是HEPA滤器在安装过程中有损伤。对出风口的生物检测验证可以及时发现泄漏。 出风口泄漏检测验证的具体操作方法可以参照美国国家标准NSF49的人员保护测试验证中的气溶胶发生，采样用Andersen 2级采样器在出风口处采样30min。 合格判定标准：每次试验中，在琼脂平板上粘质沙雷氏菌或枯草芽孢杆菌的菌落数不得超过5个。必须重复3次试验。,2006/05,24,安全罩的检测验证,安全罩的检测验证也是生物学检测验证，主要检测HEPA滤器对微生物气溶胶的滤除率。 安全罩的检测验证的原理和方法与实验室HEPA滤器的检测原理和方法是一致的，在此不作赘述。,2006/05,25,谢谢各位同仁！,
