第三讲 免疫细胞功能测定.ppt

1、病原生物学与免疫学教研室Tel:03733831083第三讲 :免疫细胞功能测定 主要内容中性粒细胞吞噬功能实验E花环形成实验淋巴细胞转化实验单个核巨嗜细胞吞噬功能实验【 实验目的 】 熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法 通过本实验理解机体的非特异性免疫机制【 实验原理 】 吞噬作用（ phagocytosis）：是指细胞从周围环境摄取固体颗粒（如：微生物或较大的细胞残片）的活动 血液中的中性粒细胞是一种小吞噬细胞，通过趋化、调理、吞入和杀菌等步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物，是机体非特异性免疫的重要组成部分【 实验原理 】 吞噬细胞（ phagocyte）：主要包括中性粒细

2、胞（neutrophil）和单核吞噬细胞（ mononuclear phagocyte）两类大吞噬细胞吞噬细胞的 分类小吞噬细胞 大吞噬细胞 来源： 单核巨噬细胞 存在部位： 血液（单核细胞 )、全身结缔组织及小血管的基底膜组织（巨噬细胞） 功能基础： 富含溶酶体及线粒体 功能： 吞噬病原微生物（寄生虫等），死亡细胞 反应时间及寿命： 反应时间长（ 48h），寿命长小吞噬细胞 来 源： 血液的中性粒细胞 存在部位： 血液、炎症部位（全身） 功能基础： 溶酶体，过氧化物酶及杀菌物质 功 能： 主要吞噬化脓菌 反应时间及寿命： 反应时间短，数分钟到几小时，寿命短，平均数小时吞噬过程示意图 中性粒细

3、胞的吞噬作用吞噬过程 【 实验器材 】1、无菌肉汤，白葡菌液， PBS缓冲液，瑞氏 -姬姆萨染液2、注射器 ,解剖器材 ,玻片 ,显微镜等【 实验方法 】1.诱导 ： 实验前 1小时给小白鼠腹腔注射 (头低位、曲形进针 )无菌淀粉肉汤 2ml，诱导浆液渗出2.注射 ： 给小白鼠腹腔内注射白葡菌液 1ml，轻揉腹部，让小鼠活动3.取样 ： 注射后 30分钟处死小白鼠，抽取腹腔液涂片4.干燥 ： 室温或者放温箱中完全干燥标本5.瑞氏 -姬姆萨染液染色：滴加 3滴 A液于标本上，以完全盖住标本为宜，染色 40秒 。滴加 8滴 B液，用洗耳 球吹出微风使液面产生涟漪，使两液 充分混匀 ，染色 5分钟

4、。水洗 （勿先倒掉染液，应以流水冲去）。吸水纸拍干水分，干燥 。6.油镜镜检油镜使用镜油的原理光线丢失光线保留光线保留油镜的使用方法低倍镜找到视野后，下降载物台，滴加香柏油，调节物镜使用油镜镜头，从侧面观察，用 “ 粗调节器 ” 上升载物台至物镜镜头浸入油内 （有 些 镜 头 可 以 伸 缩 ） ；从目镜观察，用粗调节器下降载物台，在此过程中可能会有比较清晰的视野一闪而过，此时，立即停止并调节 “ 细调节器 ” 倒回，调整后就可以看到比较清晰的视野 前后左右调节载物台，寻找满意视野 下降载物台，去载玻片，用擦镜纸和擦镜液擦油镜镜头 油镜找视野油镜找细胞收显微镜低倍镜找视野【 实验结果 】小吞噬

5、大吞噬实验二E花环形成实验实验原理 CD2是人 T细胞独特的表面标志。 在一定的条件下，绵羊红细胞（ SRBC）与 T细胞表面的CD2结合，使 SRBC环绕在 T细胞的周围，形成玫瑰花样的细胞团。 E花环实验原理示意图+油镜下 E花环形态【 临床意义 】 E花环形成实验可作为人外周血 T细胞的鉴定和计数，同时作为人细胞免疫功能状态的一个检测指标，也是分离 T细胞的常用方法之一 。 E花环形成实验应用最广泛的是总 E花环实验（ Et）以及活性 E花环实验（ Ea）。【 临床意义 】 E花环形成率 = E花环阳性细胞数 /总 T细胞数 100% 正常值为 689.9% E花环降低：免疫缺陷性疾病、病毒感染 E花环增高：甲亢、慢性肝炎、移植排斥反应 实验三淋巴细胞转化实验淋巴细胞在体外培养时，当受到非特异刺激物如植物血凝素（ PHA）、刀豆蛋白 A（ ConA）、美洲商陆（ PWM）等有丝分裂原刺激后，转化为淋巴母细胞并且发生特征性的形态变化【 实验原理 】