1、ISO15189 质量管理体系范本文件（第三册）化验室作业指导书文件编号：盘 JSZXZ-03-S2012第 A 版编制： 审核： 批准： 生效日期：2012 年 3 月 3 日盘县乡镇计生服务站检验室文件编号：盘 JSZXZ-3-S2012盘县乡镇计生服务站化验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303 主题内容 目 录第 2 页 共 96 页目 录序号 主 题 内 容 代 号 页 号1 沙眼衣原体抗原检测 盘 JSZXZ-3-S01 52 离心尿沉渣镜检 盘 JSZXZ-3-S02 73 尿 HCG 胶体金法定性 盘 JSZXZ-3-S03 94 阴道分泌物常规检查 盘
2、JSZXZ-3-S04 115 ABO 血型鉴定 盘 JSZXZ-3-S05 136 Rh 血型鉴定 盘 JSZXZ-3-S06 167 乙肝表面抗原检测 盘 JSZXZ-3-S07 188 迈瑞 BC2900 三分类血球仪操作规程 盘 JSZXZ-3-S08 209 迈瑞 BC2900 红细胞计数 盘 JSZXZ-3-S09 2410 迈瑞 BC2900 白细胞计数 盘 JSZXZ-3-S10 2611 迈瑞 BC2900 白细胞分类计数 盘 JSZXZ-3-S11 2812 迈瑞 BC2900 血红蛋白检测 盘 JSZXZ-3-S12 3013 迈瑞 BC2900 血小板测定 盘 JSZX
3、Z-3-S13 3214 红细胞计数（显微镜法） 盘 JSZXZ-3-S14 3515 白细胞计数（显微镜法） 盘 JSZXZ-3-S15 3716 显微镜白细胞分类计数 盘 JSZXZ-3-S16 4017 显微镜血小板计数 盘 JSZXZ-3-S17 4318 氰化高铁血红蛋白测定 盘 JSZXZ-3-S18 4619 优利特 810 生化分析仪使用维护规程 盘 JSZXZ-3-S19 4920 ALT 测定 盘 JSZXZ-3-S20 5221 AST 测定 盘 JSZXZ-3-S21 5622 GLU 测定 盘 JSZXZ-3-S22 6023 BUN 测定 盘 JSZXZ-3-S23
4、 6424 CR 测定 盘 JSZXZ-3-S24 68文件编号：盘 JSZXZ-3-S2012盘县乡镇计生服务站化验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303 主题内容 目 录第 3 页 共 96 页25 优利特 50 型尿分析仪操作维护规程 盘 JSZXZ-3-S25 7126 尿十一项定性测试（干化学法） 盘 JSZXZ-3-S26 7227 普朗 2048B 双通道血凝仪操作维护规程 盘 JSZXZ-3-S27 7528 凝血酶原时间（PT）测定 盘 JSZXZ-3-S28 7929 生化复合质控品 盘 JSZXZ-3-S29 8230 血球仪全血质控品 盘 JSZX
5、Z-3-S30 8331 生化复合校准品 盘 JSZXZ-3-S31 8432 血球仪全血校准品 盘 JSZXZ-3-S32 8533 干化学法尿十一项质控品 盘 JSZXZ-3-S33 8634 显微镜使用规程 盘 JSZXZ-3-S34 8735 离心机操作维护规程 盘 JSZXZ-3-S35 8836 电冰箱操作维护规程 盘 JSZXZ-3-S36 8937 高压消毒锅使用操作规程 盘 JSZXZ-3-S37 9138394041文件编号：盘 JSZXZ-3-S2012盘县乡镇计生服务站化验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303 主题内容 修订页第 4 页 共 96
6、 页修 订 页序号 文件编号 页码 需更改的内容 更改内容 批准人 批准日期123456789101112131415161718192021文件编号：盘 JSZXZ-3-S01盘县乡镇计生服务站检验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303主题内容 沙眼衣原体抗原检测第 5 页 共 96 页沙 眼 衣 原 体 抗 原 检 测（一）检测目的规范沙眼衣原体的检测实验，以保证检测结果的准确性和重复性。（二）标本采集女性：用无菌拭子取子宫颈分泌物。（三）检测方法1.免疫层析法2.实验原理沙眼衣原体抗原检测（乳胶免疫层析法）采用高度特异性的抗原抗体反应及免疫层析技术来定性检测临床标本
7、中是否含有沙眼衣原体抗原。位于试剂卡检测窗的一侧吸收垫含有以乳胶标记的、抗衣原体属特有的脂多糖抗原的单克隆抗体，标本提取液能使被乳胶标记的抗体溶解，在检测窗内生成一条肉眼可见的线（对照线用 C 表示） 。如提取液中含有衣原体抗原时，与溶解的乳胶标记抗体发生反应，形成复合物。依靠毛细作用，复合物能沿与吸收垫相连的测试条移动。在测试窗的另一侧含有固定的、抗衣原体的单克隆抗体的区域。复合物移动到检测线内时，与固定的、抗衣原体的单克隆抗体发生反应，形成典型的“三明治”结构，在检测窗内生成一条肉眼可见的线（检测线用 T 表示） 。如提取液中不含有衣原体抗原时，只有溶解的、乳胶标记的抗体沿与吸收垫相连的测
8、试条移动，不能与固定于检测线附近的抗衣原体的单克隆抗体发生反应，检测线会保持空白。（四）条件1.南京黎明沙眼衣原体抗原检测试剂盒。2.检验人员应经过操作前培训，熟悉判读结果。（五） 操作程序：1.在标本提取试管中滴加标本处理液 A 8 滴，将棉拭标本侵没在标本处理液中并进行搅动 15 次，静置2 分钟。然后滴加标本处理液 B 8 滴并进行搅动 15 次，静置 1 分钟。在标本提取试管中转动棉拭，在标本提取试管口边缘按压棉拭以去除其上的液体，然后轻缓地将棉拭从试管中取出丢弃棉拭。2.从箔片袋中取出一个检测块，并将其水平放置。将滴管附件盖在提取试管上，然后向检测块的标本窗滴上 3 滴提取液，15
9、分钟后读取检测结果。3.结果判定3.1 检测窗口内有一条对照线（C 线位置）出现即表示检测过程中操作正确无误。所有未能在 15 分钟后在窗口显示一条线的检测块其检测结果均属无效。3.2 在结果窗内有两条线出现（C 线位置和 T 线位置），即表示检测结果为阳性。标本内含有衣原体抗原。如检测窗口内仅有一条对照线（C 线位置）出现，则表示检测结果就衣原体而言为阴性。检测窗口的线条可能深浅不同，但这种现象不影响检测结果。文件编号：盘 JSZXZ-3-S01盘县乡镇计生服务站检验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303主题内容 沙眼衣原体抗原检测第 6 页 共 96 页3.3 如结果
10、窗内无线条出现，应使用新的检测块再次进行检测。只要剩余的提取混合液制作成后未到 3小时。仍可供检测使用。亦可按试验方法中规定的程序重新采集和处理标本。3.4 强阳性的提取液有可能未到 15 分钟即在结果窗内 T 线位置形成一条线。这是阳性检测结果的表示，而检测操作的正确性则由稍候在结果窗内出现的 C 线条确认。（六）参考范围乳胶层析法：阴性（七）质量控制1.衣原体的生物活性不稳定，实验室检验的标本应缩短采集与检测之间的时间差。2.如标本不在 1 天内接受检测，则将其冷藏（2-8） ，不要冷冻，这样最多可保持 5 天。文件编号：盘 JSZXZ-3-S02盘县乡镇计生服务站化验室 作业指导书版本/
11、修订号：A/0生效日期：20120303 主题内容 离心尿沉渣镜检第 7 页 共 96 页离 心 尿 沉 渣 镜 检（一）目的通过对显微镜下的尿液中的有形成分进行检测，以弥补尿干化学实验检查不足造成漏检。（二）器材尿沉渣计数板、显微镜（三）标本来源由检验对象留取中段尿标本，经过干化学检测后，在 1500rpm 离心 5 分钟，弃上清，留取管底部约 0.25-0.35ml 沉淀尿液，混匀后加 1 滴在尿沉渣计数板相应孔位上（尿沉渣的量和压片厚度是标准化的重要环节） 。（四）镜检原则1.每份尿常规标本都要做尿沉渣检查。2.先用低倍镜观察，然后再转换高倍镜计数 10 个视野，计算平均值报告。（五）镜
12、检方法1.取 10ML 尿于离心管内，以 1500rpm 离心 5 分钟，离心机停止 1 分钟后取出。2.将离心管上清液弃去，使管底沉淀与管内剩余的约 0.25-0.35ML 尿混匀，用一次性吸管吸取尿液，滴入尿沉渣计数板相应孔位，放于载物台上，用低倍镜观察尿沉渣的分布情况、注意管型和结晶。3.然后转换高倍镜观察十个视野，分别记录细胞、确定管型类型，计算平均值报告。（六）报告方式1.红细胞、白细胞、小圆上皮细胞直接报告高倍镜视野下数量。如细胞数过多，无法计算，报告 X 细胞满视野。 （X/HPF）2.管型：以低倍镜视野观察，高倍镜鉴定（透明管型、颗粒管型、细胞管型、蜡样管型） ，报告低倍镜视野
13、下管型数量及类别。 （X/LPF）3.上皮细胞：以+形式报告。4.结晶：以+形式报告。5.滴虫：见到即报。6.黏液丝：以+形式报告。7.酵母菌：以+形式报告。8.镜检中看到的其他物质也应依据实际情况给予报告。文件编号：盘 JSZXZ-3-S02盘县乡镇计生服务站化验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303 主题内容 离心尿沉渣镜检第 8 页 共 96 页（七）尿沉渣主要成分参考期间方法 红细胞 白细胞 管型 上皮细胞 结晶离心镜检 0-3/HP 0-5/HP 0-偶见/LP 少量 少见文件编号：盘 JSZXZ-3-S03盘县乡镇计生服务站化验室 作业指导书版本/修订号：A/
14、0生效日期：20120303 主题内容 尿 HCG 胶体金法定性第 9 页 共 96 页尿 HCG 胶体金法定性1. 实 验 原 理应 用 由 抗 人 绒 毛 膜 促 性 腺 激 素 （ HCG） 抗 体 和 抗 鼠 IgG 分 别 固 相 硝 酸 纤 维 膜 和 胶体 金 标 记 的 抗 HCG 单 克 隆 抗 体 及 其 他 试 剂 组 成 ， 应 用 层 析 双 抗 体 夹 心 法 的 原 理 快 速 检测 尿 液 中 HCG。 显 示 结 果 明 确 ， 操 作 简 便 。 用 以 妊 娠 早 期 诊 断 。2. 标 本 采 集2.1 标 本 采 集 前 病 人 准 备 ： 无 需 特
15、 殊 准 备2.2 标 本 种 类 ： 随 机 尿2.3 标 本 要 求 ： 尿 液 收 集 应 使 用 一 次 性 尿 杯 或 洁 净 容 器 ， 任 何 随 机 尿 均 适 用 本 实 验 。 3. 标 本 储 存 ： 如 尿 液 不 能 及 时 送 检 ， 应 置 4 冰 箱 ， 测 试 前 注 意 复 温 。 4. 标 本 运 输 ： 室 温 运 输5. 标 本 拒 收 标 准 ： 细 菌 污 染6. 试 剂6.1 试 剂 名 称 ： 蓝 十 字 胶 体 金 早 早 孕 检 测 试 纸6.2 试 剂 生 产 厂 家 ： 蓝 十 字 生 物 药 业 （ 北 京 ） 有 限 公 司6.3
16、包 装 规 格 ： 25 人 份 /筒6.4 试 剂 盒 组 成 ：检 测 试 纸 25 人 份干 燥 剂 一 包6.5 试 剂 储 存 条 件 及 有 效 期 ： 室 温 4-30 避 光 密 封 干 燥 处 贮 存 ， 切 勿 冰 冻 。 有 效 期17 个 月 。7. 操 作 步 骤7.1 待 测 样 品 、 检 测 试 纸 或 其 他 检 测 用 材 料 等 均 在 室 温 平 衡 后 取 出 试 纸 。7.2 将 测 试 纸 有 箭 头 的 一 端 插 入 尿 液 标 本 容 器 中 ， 至 少 3 秒 钟 后 取 出 平 放 ， 5 分钟 内 观 察 显 示 结 果 。7.3 测
17、试 纸 插 入 尿 液 深 度 不 可 超 过 MAX 标 志 线 。8. 结 果 判 断 与 分 析阳 性 ： 在 检 测 线 位 置 及 对 照 线 位 置 各 出 现 一 条 红 色 反 应 线 。阴 性 ： 仅 在 对 照 线 位 置 出 现 一 条 红 色 反 应 线 。文件编号：盘 JSZXZ-3-S03盘县乡镇计生服务站化验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303 主题内容 尿 HCG 胶体金法定性第 10 页 共 96 页无 效 ： 测 试 纸 无 红 色 反 应 线 出 现 ， 或 仅 在 检 测 线 位 置 出 现 一 条 红 色 反 应 线 ， 表 明
18、 实 验 失败 或 者 检 测 纸 失 效 。 9. 临 床 意 义9.1 本 实 验 主 要 用 于 妊 娠 的 诊 断 。 在 受 孕 2-6 天 即 呈 现 阳 性 。9.2 用 于 与 妊 娠 相 关 疾 病 和 肿 瘤 的 诊 断 及 鉴 别 诊 断 。9.3 过 期 流 产 或 不 完 全 流 产 ， 子 宫 内 仍 有 活 胎 盘 组 织 时 ， 本 实 验 仍 呈 阳 性 。9.4 人 工 流 产 后 ， 如 果 仍 呈 阳 性 ， 提 示 宫 内 尚 有 残 余 胚 胎 组 织 。9.5 宫 外 孕 时 ， HCG 低 于 正 常 妊 娠 ， 仅 有 60%阳 性 。10.
19、操 作 性 能 ： 快 速 简 便 、 特 异 性 强 、 灵 敏 度 高 、 重 复 性 好 。11. 方 法 局 限 性 ： 试 纸 受 潮 易 失 效12. 参 考 文 献 ：中 国 人 民 共 和 国 卫 生 部 医 政 司 编 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 （ 第 二 版 ） .1997,135-13613. 其 他13.1 测 试 纸 从 冰 箱 取 出 后 ， 先 充 分 复 温 再 打 开 包 装 ， 取 出 试 纸 后 及 时 扣 严 筒 盖 ， 谨 防受 潮 。13.2 不 要 用 过 期 的 试 剂 。13.3 本 品 为 一 次 性 使 用 体 外 诊 断
20、试 剂 。13.4 当 HCG 浓 度 很 高 时 ， 检 测 线 颜 色 可 能 变 浅 ， 属 正 常 现 象 。13.5 若 被 测 试 者 仍 怀 疑 有 受 孕 可 能 ， 而 尿 液 测 试 阴 性 ， 可 在 48-72 小 时 后 重 新 收集 晨 尿 再 次 测 定 。13.6 子 宫 肿 瘤 、 葡 萄 胎 或 更 年 期 病 人 ， 因 尿 液 中 HCG 含 量 较 高 ， 可 能 会 出 现 阳 性结 果 。13.7 怀 疑 异 位 、 异 常 妊 娠 时 ， 应 结 合 其 他 方 法 进 行 诊 断 。文件编号：盘 JSZXZ-3-S04盘县乡镇计生服务站化验室
21、作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303 主题内容 阴道分泌物常规检查第 11 页 共 96 页阴道分泌物常规检查（直接涂片法）1. 实 验 原 理本 实 验 是 利 用 阴 道 分 泌 物 的 生 理 盐 水 涂 片 在 显 微 镜 下 观 察 分 泌 物 中 是 否 有 阴 道 毛 滴虫 、 念 珠 菌 等 并 根 据 所 含 白 细 胞 （ 或 脓 细 胞 ） 、 上 皮 细 胞 、 杂 菌 的 多 少 ， 把 其 清 洁 度分 成 度 。2. 标 本 采 集2.1 标 本 采 集 前 病 人 准 备 ： 在 采 集 标 本 前 24 小 时 内 应 无 性 交 、 无
22、盆 浴 、 无 阴 道 灌 洗 、近 期 内 未 服 用 激 素 类 药 物 。2.2 标 本 种 类 ： 阴 道 分 泌 物2.3 标 本 要 求 ： 用 无 菌 棉 拭 子 从 阴 道 后 穹 隆 处 取 分 泌 物 ； 所 用 窥 阴 器 不 可 用 润 滑 剂 ， 只能 用 少 量 无 菌 等 渗 盐 水 润 湿 。3. 标 本 储 存 ： 取 材 后 应 立 刻 检 查 ， 避 免 因 放 置 时 间 太 久 影 响 滴 虫 的 活 动 性 或 虫 体 受 到破 坏 使 检 查 结 果 受 到 影 响 。 4. 标 本 运 输 ： 一 般 室 温 运 输 ， 如 冬 季 气 温 较
23、低 应 注 意 标 本 的 保 温 运 输 。5. 标 本 拒 收 标 准 ： 无 盐 水 干 结 标 本 。6. 操 作 步 骤6.1 将 采 集 标 本 的 拭 子 直 接 涂 在 滴 有 盐 水 的 载 玻 片 上 ， 盖 上 盖 玻 片 。6.2 用 低 倍 镜 观 察 有 无 阴 道 毛 滴 虫 、 念 珠 菌 菌 丝 等 。6.3 再 用 高 倍 镜 观 察 白 细 胞 、 上 皮 细 胞 、 杆 菌 、 球 菌 的 多 少 ， 并 寻 找 有 无 念 珠 菌 菌 体 及其 孢 子 。7. 结 果 判 断 与 分 析7.1 阴 道 涂 片 清 洁 度 的 判 定 如 下 ：清 洁
24、度 杆 菌 球 菌 上 皮 细 胞 白 （ 脓 ） 细 胞 多 满 视 野 0 5/HP 少 少 1/2 视 野 5 15/HP 少 多 少 15 30/HP 大 量 大 于 30/HP7.2 阴 道 毛 滴 虫 呈 梨 形 ， 比 白 细 胞 大 2 倍 ， 顶 端 有 鞭 毛 4 根 ， 在 25 42 温 度 下文件编号：盘 JSZXZ-3-S04盘县乡镇计生服务站化验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303 主题内容 阴道分泌物常规检查第 12 页 共 96 页可 活 动 。7.3 在 高 倍 镜 下 见 卵 圆 形 孢 子 或 假 菌 丝 与 出 芽 细 胞 相
25、连 接 ， 成 链 状 及 分 枝 状 。8. 临 床 意 义8.1 清 洁 度 在 内 视 为 正 常 ， 、 度 为 异 常 ， 多 数 为 阴 道 炎 。 可 发 现 阴 道 念 珠菌 、 阴 道 滴 虫 等 病 原 体 。 单 纯 不 清 洁 度 增 高 而 不 见 滴 虫 、 念 珠 菌 者 ， 可 见 于 非 特 异 性 阴道 炎 。8.2 找 到 阴 道 滴 虫 是 滴 虫 性 阴 道 炎 的 诊 断 依 据 。8.3 找 到 阴 道 念 珠 菌 是 诊 断 念 珠 菌 性 阴 道 炎 的 诊 断 依 据 。9. 操 作 性 能 ： 快 速 简 便 ， 适 合 门 诊 开 展 。
26、10. 方 法 局 限 性 ： 结 果 判 断 会 受 经 验 不 足 的 主 观 因 素 影 响 。11. 参 考 文 献中 国 人 民 共 和 国 卫 生 部 医 政 司 编 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 （ 第 二 版 ） .1997,15112. 注 意 事 项 ：12.1 采 集 标 本 方 法 要 正 确 ， 标 本 量 要 多 ， 并 及 时 送 检 。12.2 霉 菌 阴 性 时 不 能 完 全 排 除 感 染 ， 仅 凭 镜 检 也 不 能 确 定 为 何 种 霉 菌 感 染 ， 需 做 霉 菌培 养 鉴 定 。文件编号：盘 JSZXZ-3-S05盘县乡镇计生服务
27、站检验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303 主题内容 ABO 血型鉴定第 13 页 共 96 页ABO 血型鉴定1. 原理根据红细胞上有或无 A 抗原或/和 B 抗原，将血型分为 A 型、B 型、AB 型及 O 型四种。A 型红细胞膜上含有 A 抗原，B 型红细胞膜上含有 B 抗原，AB 型红细胞膜上含有 A、B 抗原，抗 A、抗 B 试剂是分别针对 A 抗原和 B 抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定 ABO 血型。所谓正定型，是用已知的抗 A、抗 B 试剂与受检者的红细胞混合时，与抗 A 试剂发生凝集者即为 A 型，与抗 B 分型试剂发生凝
28、集者即为 B 型，与抗 A、抗 B 试剂均发生凝集者即为 AB 型，与抗 A、抗 B 试剂均不凝集者即为 O 型。所谓反定型，是用已知 A 细胞和 B 细胞来测定血清中有无相应的抗A 或/和抗B.2. 标本采集2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢血和血清。2.2 标本要求：2.2.1 抗凝剂：如用抗凝血，多主张用 EDTA K2 抗凝。2.2.2 用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为 100ul，如手指有冻疮，则主张采耳垂血。3. 标本储存：2 小时内完成实验，室温放置下不超过 8 小时，4-8保存不超过 48 小时。4. 标本运输：室温运输5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作
29、测定6. 试剂6.1 试剂名称：ABO 血型检测试剂6.2 试剂生产厂家：上海血液制品生物工程有限公司6.3 试剂组成试剂 1：抗 A 分型试剂（蓝色） ，效价 1：128，2-8避光保存，室温放置不宜过久。试剂 2：抗 B 分型试剂（黄色） ，效价 1：128，2-8避光保存，室温放置不宜过久。试剂 3：5A、B 及 O 型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取已知 A、 B、O 三种血型的红细胞，经盐水洗涤 3 次，以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。 红 细 胞 悬 液 的 配 制悬 液 浓 度 （ ） 压 积 红 细 胞 （ 滴 ） 盐 水 （ 滴 ）25102011112ml（
30、40）0.8ml（ 16）0.4ml（ 8）0.2ml（ 4）为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取 3 个或以上的健康成人血液，按 A、B、O 型分别混合后，按上法制备。7. 操作步骤7.1 玻片法7.1.1 取清洁玻片 1 张（或白瓷板 1 块） ，用肥皂水刷洗后晾干，用蜡笔划出小格，并注明A、B 字样。将抗 A 试剂、抗 B 试剂各一滴分别滴于玻片（或瓷盘）上 A、B 处。分别取等体积待检血样（5-10红细胞悬液或全血）于抗 A 试剂和抗 B 试剂。7.1.2 另取洁净玻片 1 张（或白瓷板 1 块） ，用蜡笔划成方格，标明 A 细胞、B 细胞和 O 细文件编号：盘 JSZXZ-3-
31、S05盘县乡镇计生服务站检验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303 主题内容 ABO 血型鉴定第 14 页 共 96 页胞，用滴管各加受检者血清 1 滴，再分别用滴管滴加 A、B 和 O 型试剂红细胞悬液 1 滴。7.1.3 用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀，同时不停的摇动玻片（或瓷盘）并观察血型凝集（或溶血）反应。如以玻片做试验时，也可用低倍镜观察结果。7.2 试管法7.2.1 取洁净小试管（内径 10mm60mm）2 支，分别标上 A、B 字样，用滴管分别向 A 管滴加抗 A 分型试剂 1 滴。向 B 管滴加抗 B 分型试剂 1 滴。向 A、B 管各滴加待检血样的
32、 5红细胞悬液各 1 滴，混合。7.2.2 另取洁净小试管（内径 10mm60mm）3 支，分别标明 A、B 和 O 细胞。用滴管分别加入受检者血清 1 滴于试管底部，再分别以滴管加入 A、B 和 O 型 5红细胞悬液 1 滴，混合。7.2.3 摇匀后以 1000 转/分的速度离心 1 分钟判定结果。将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。8. 结果判断8.1 观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于 A、B 亚型、类 B 或 cisAB的发现。8.2 凝集强度判断标准：4 红细胞凝集成一大块
33、，血清清晰透明。3 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。2 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。1 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。MF 混合凝集外观是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布。 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。8.3 按下表报告受检者红细胞 ABO 血型ABO 血型正反定型结果分型血清受检者红细胞 受检者 受检者血清试剂红细胞抗A抗B抗AB血型ABOABA 细胞B 细胞O 细胞9. 临床意义：输血、器官移植与亲子鉴定10. 操作性能：快速简便、特异性强、灵敏度高、重复性好。11.超出范围结果处
34、理11.1 红细胞自凝：冷凝集系增高是最为常见原因。应用 37-40的生理盐水洗涤红细胞可去除红细胞表面附着的导致红细胞凝集的冷集素。文件编号：盘 JSZXZ-3-S05盘县乡镇计生服务站检验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303 主题内容 ABO 血型鉴定第 15 页 共 96 页11.2 正反定型结果不一致原因11.2.1 分型血清效价太低、亲和力不强。如抗A 血清效价不高，可将 A 亚型误定为 O 型，AB 型误定为 B 型。11.2.2 红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例则不适当，使反应不明显，误判为阴性反应。11.2.3 受检者红细胞上抗原位点过少（如亚型）或抗
35、原性减弱（见于白血病或恶性肿瘤）以及 B 类或 cisAB 等。11.2.4 受检者血清中蛋白紊乱（高球蛋白血症） ，或实验时温度过高，常引起红细胞呈缗钱状排列。11.2.5 受检者血清中缺乏应有的抗A 和抗B 抗体，如丙种球蛋白缺乏症。11.2.6 各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集，部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。11.2.7 由细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。11.2.8 血清中有意外抗体，如自身抗I，常引起干扰。11.2.9 老年人血清中抗体水平大幅度下降。11.3 正反定型结果不一致的解决方法：11.3.1 另从受检者采取 1 份新鲜血液
36、标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不符合。11.3.2 将红细胞洗涤数次，配成 2盐水细胞悬液，用抗A、抗B、抗AI，抗AB及抗H 做试验可以得到其它有用的信息。11.3.3 对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。11.3.4 用 A1、A2、B、O 红细胞从自身红细胞检查受检血清。如果怀疑是抗I，用 O 型（或 ABO 相合的）脐血红细胞检查。11.3.5 如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和 4放置 30min，用显微镜检查核实。11.3.6 如疑为 A 抗原或 B 抗原减弱，则可将受检红细胞与抗 A 或抗B 血清作吸收及放散试验以及受
37、检者唾液作 A、B、H 血型物质测定。后者只对 80HAB 分泌型的人有用。11.3.7 如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水 1 滴，混合。往往可使缗钱现象消失。应注意不应先加盐水 1 滴于受检者血清中而后和红细胞作试验，以免使血清中抗体被稀释。11.3.8 如受检者为 A 型血而疑为有类 B 抗原时，可用下列方法进行鉴别：11.3.8.1 观察细胞与抗A 及抗 B 的凝集强度，与抗 A 的反应要比抗B 的反应强。这种区别用玻片法作试验更为明显。11.3.8.2 用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗B 不凝集自身红细胞上的类 B抗原。11.3.8.3 检查唾液中是否有 A、B 物质
38、，如果是分泌型，可检出 A 物质而无 B 物质。11.3.8.4 核对患者的诊断，类 B 抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴件杆菌感染有关。12. 方法局限性12.1 分型血清质量性能符合要求，用毕后，应放置冰箱保存，以免细菌污染。12.2 试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。12.3 操作方法应按规定，一般应先加血清，然后再加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。12.4 按理 IgM 抗A 和抗B 与相应红细胞的反应温度以 4为最强，但为了防止冷凝集现象干扰，一般仍在室温（20-24）内进行试验，37可使反应减弱。12.5 离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性
39、结果。12.6 观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。12.7 判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。文件编号：盘 JSZXZ-3-S05盘县乡镇计生服务站检验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303 主题内容 ABO 血型鉴定第 16 页 共 96 页12.8 试剂一旦发现浑浊不得使用。12.9 制红细胞悬液时防止自凝现象。13. 参考文献中国人民共和国卫生部医政司编。 全国临床检验操作规程（第二版） 。 1997，89-92文件编号：盘 JSZXZ-3-S06盘县乡镇计生服务站化验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303 主
40、题内容 Rh 血型鉴定第 17 页 共 96 页Rh 血型鉴定（一） 实验原理应用血凝实验检测红细胞抗原。RhD 血型是由红细胞表面是否存在或缺失 D 抗原来确定的，凡受检红细胞和抗 D 血清凝集者为 RhD 阳性，不凝集者为 RhD 阴性。(二)试剂和标本1Rh D 血型定型试剂(单克隆抗体 )。235受检者红细胞盐水悬液。(三)实验前准备1物品的准备：试管、吸管、生理盐水、试管架、记号笔蜡笔、白纸等。2试剂的准备：需室温平衡后使用。3样本的处理：根据试验要求洗涤 13 次受检红细胞配制红细胞悬液。4设备：血型血清学专用离心机、显微镜、光源灯盒。(四)试管法操作步骤1取洁净试管(内径 137
41、8mm)1 支标记：编号；抗 D。加入 2 滴 Rh D 血型定型试剂至试管底部。2-取洁净试管(内径 1378mm)1 支标记：编号；自身对照。用吸管加入2 滴受检者血清至试管底部。3用吸管分别加入 1 滴 35受检红细胞盐水悬液。4充分混匀，于 1000g 离心 15 秒。待离心机停稳后，取出试验管。5轻轻打散细胞扣，观察凝集强度，必要时，以低倍显微镜观察结果。(凝集强度判断参见 ABO 血型鉴定)6记录结果。7结果解释：(1)自身对照管未出现凝集，被检管出现凝集( 至少 3+)表明试验结果阳性：(2)自身对照管及被检管均未出现凝集，表明试验结果阴性；(3)自身对照管出现凝集时，应进一步查
42、找原因，不能将抗一 D 试验结果解释为阳性。(五)质量控制1试剂质量性能应符合室内质量控制要求。(1)试剂使用前应检查试剂外观，如抗 D 血清出现浑浊、絮状物，则不能使用。(2)抗 D 血清试剂须在有效期内使用。(3)从冰箱取出的试剂，应在室温平衡后使用，试剂不使用时应及时放人冰箱保存。(4)每日试验前，选择 RhD 阳性和 RhD 阴性试剂细胞检测抗 D 血清试剂。RhD 阳性试剂细胞与抗 D 血清试剂应出现凝集，凝集强度至少 3+以上。凝集强度低于 3+，应查找原因。RhD 阴性试剂细胞与抗 D 血清试剂呈现均匀的红细胞悬液，不出现凝集。2标本要新鲜采集，受检者信息(条码) 标识清晰。受检
43、红细胞悬液配制浓度符合试验要求，受检红细胞经生理盐水洗涤 13 次，洗涤上清清澈后配制相应浓度的悬液。3实验物品应干燥，洁净，标识要规范。4操作时应先加血清，然后再加红细胞悬液。文件编号：盘 JSZXZ-3-S06盘县乡镇计生服务站化验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303 主题内容 Rh 血型鉴定第 18 页 共 96 页5实验各环节要注意核对。6正确选择离心转速和时间：应参考试剂说明书。7血型结果判读时既要观察有无凝集，更要注意记录凝集强度。以下情况不能将抗 D 试验结果解释为阳性，需进一步调查。 (1)弱的或混合视野型的凝集反应。(2)阳性自身对照反应。(3)个体因
44、输血出现抗体，而此个体体内具有针对该种抗体的抗原。8双人复核血型。血型报告由二人核对后在化验单上签字后方可发出。9及时记录，避免笔误。文件编号：盘 JSZXZ-3-S07盘县乡镇计生服务站化验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303主题内容 乙肝表面抗原检测第 19 页 共 96 页乙肝表面抗原检测（乳胶法）(一)检测目的乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)检测。(二)测定原理HBsAg 采用双抗体(原)夹心法原理。用抗 HBsAg 多克隆抗体包被硝酸纤维素膜，应用双抗体夹心法原理，定性检测血清血浆中 HBsAg。 HBsAg 测试时，将血清血浆标本滴入试剂板加样处，标本在毛
45、吸效应下向上层析，如标本中含有相应的待测物质，在测试区(T)内会出现一条红色条带，则是阳性结果。如标本中不含有相应的待测物质，则测试区(T)将没有红色条带，是阴性结果。无论待测物质是否存在于标本中，一条红色条带都会出现在质控区内(c)。质控区内(C)所显现的红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。(三)操作步骤具体方法参照试剂盒说明书。举例如下：在进行任何测试前必须先完整阅读使用说明书，使用前将试剂板和血清血浆标本恢复至室温(2030)。从试剂盒中取出原包装铝箔袋(注意：在打开铝箔前应先恢复至室温)，在 1 小时内应尽快地使用。1将试剂盒置于干净平坦的台
46、面上，用吸管吸取血清血浆标本，逐滴垂直加入于试剂板的加样孔中(23 滴)。2加样后立刻开始计时，等待红色条带的出现，在 15 分钟时读取测试结果。在 20 分钟后读取的结果无效。(四)结果判定(1)阳性(+)：两条红色条带出现。一条于测试区(T)内，另一条位于质控区(C)。阳性结果表明：标本中含有待测物质。(2)阴性(一)：质控区(C)出现一条红色条带，在测试区(T)内无红色条带出现。阴性结果表明：标本中检测不出待测物质。(3)无效：质控区(C)未出现红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已经变质损坏。在此情况下，应再次仔细阅读说明书，并用新的试剂盒重新测试。如果问题仍然存在，应立即停止使用此
47、批号产品，并与当地供应商联系。(4)注意：在进行 HBsAg 测试时，测试区(T)内的红色条带可显现出颜色深浅的现象。只要在规定的观察时间内，不论该条带颜色深浅，即使只有非常弱的色带也应该判为阳性结果。(五)注意事项1请控制判读时间，测试结果应在测定开始后 20 分钟左右读取，30 分钟后读判定无效。2乳胶法乙肝表面抗原检测试剂条(血清血浆)只是定性的筛选乙肝病毒表面抗原标志物的存在，不能确定血样中病毒的含量。3由于在技术上和操作上可能出现的失误，同时也由于标本中存在的干扰物质，检测结果可能有错误。对可疑结果应作相应的进一步检测。(六)生物安全防护1在检测前，所有标本均应视为“阳性”标本即生物
48、危险品。2如操作中不慎洒落血液，要及时对污染台面消毒处理。3操作前一定要做好自身防护(穿白大衣、带口罩、白帽、胶皮手套)。文件编号：盘 JSZXZ-3-S07盘县乡镇计生服务站化验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303主题内容 乙肝表面抗原检测第 20 页 共 96 页4HBV 对低温、干燥、紫外线、 70乙醇均有耐受性。煮沸 10010 分钟、高压蒸汽灭菌121cIC 15 分钟或干热 1602 小时均可灭活 HBV。510gL 次氯酸钠 30 分钟，1：4000 福尔马林 3772 小时，05过氧乙酸 15 分钟均可破坏其传染性。(七)临床意义HBsAg 阳性：血清
49、HBsAg 阳性，表示受检者处于 HBV 的感染状态。HBsAg 也可从许多乙肝检验对象体液和分泌物中测出，如唾液、精液、乳汁、阴道分泌物等。文件编号：盘 JSZXZ-3-S08盘县乡镇计生服务站化验室 作业指导书版本/修订号：A/0生效日期：20120303 主题内容 迈瑞 2900 三分类血球仪操作规程第 21 页 共 96 页迈瑞 BC2900 三分类血球分析仪操作规程1.原理BC2900 用阻抗法测量 WBC、RBC 和 PLT 的体积分布和数目。电极插在液体中计数孔的两边，在计数孔的两边周围建立了一个电场环境，根据血细胞非传导性的性质，当有细胞通过计数孔时，将引起阻抗变化，阻抗变化的大小与细胞体积成正比。2.标本的采集与处理2.1 标本的采集静脉血标本：推荐用 K2EDTA 抗凝剂，含量规定为 1.5-2.
