1、FQ-PCR 检测不孕不育患者解脲支原体和沙眼衣原体结果【摘要】目的：了解阳江市地区不孕不育患者解脲支原体(UU)和沙眼衣原体(CT)感染情况，探讨荧光定量 PCR(FQ-PCR)应用于诊治不孕不育的必要性。方法：采用 FQ-PCR 方法检测不孕不育患者宫颈分泌物、尿道拭子标本中的 UU-DNA 和 CT-DNA 含量。结果：238 例不孕不育患者中有 129 例感染 UU 或 CT（感染率 54.2 %） ，UU 和 CT 的感染率分别为 44.5%和 17.6%，混合感染率 8.0%；UU和 CT 感染率分别为男性 40.6%和 25.6%，女性 46.7%和 13.1%；女性与男性患者
2、UU 和 CT 的基因拷贝数差异无显著性(P0.05)。结论：UU 和 CT 是引起男女不孕不育的重要原因，UU 感染率明显高于 CT；FQ-PCR 技术应用于诊治 UU 或 CT 泌尿生殖道感染引起的不孕不育快捷精确、安全可靠。 【关键词】 荧光定量 PCR 不孕不育 解脲支原体 沙眼衣原体 感染阳性率随着社会的发展，不孕不育症逐渐成为一个世界性难题,并且不孕不育症的发病率不断上升，不孕不育症的发病原因复杂，由于病因不同，临床症状表现也不尽相同,其治疗关键是查明病因。研究表明，衣原体、支原体的泌尿生殖系感染是造成男女不孕不育的重要因素之一。我市位处南部沿海,是一个交通便利的开放旅游城市，为了
3、解我市不孕不育患者泌尿生殖道解脲支原体（UU）和沙眼衣原体（CT）的感染情况，我院采用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法对 238 例不孕不育患者宫颈分泌物、尿道拭子标本的 CT-DNA 和 UU-DNA 含量进行了检测，现报告如下。1 资料与方法1.1 资料来源选择 238 例 2006 年 3 月至 2007 年 11 月就诊于我院不孕不育门诊和妇产科、结婚 2 a 以上夫妇性生活正常、未避孕而未曾妊娠患者，其中男 86 例，女 152 例，平均年龄 30.2 岁，另选同期生殖健康科、婚检中心生育能力正常的人群 100 例，其中男40 例，女 60 例。标本由临床医生严格按无菌操作规程采集
4、。女性患者取子宫颈内口 1 cm2 cm 处棉拭子置含 1 ml 生理盐水的无菌试管送检，男性患者取尿道内口约 2 cm3 cm 处棉拭子置含 1 ml 生理盐水的无菌试管送检。1.2 仪器和试剂中山大学达安公司生产的 DA7600 自动荧光定量 PCR 仪；试剂均为中山大学达安基因诊断中心产品。1.3 实验方法标本洗涤液 12 000 r/min,离心 5 min，去上清液，用碱裂解法提取 UU 和 CT 的 DNA 置 DA6700 自动荧光定量 PCR 仪扩增。最后由仪器自动分析检测出定量结果。对测出定量结果进行统计学分析，患者感染率与正常人群资料对比采用2 检验，女性和男性 UU 或
5、CT 感染者基因拷贝数的差异采用样本均数的 t 检验。2 结果238 例不孕不育患者中有 129 例的受检标本检测出 UU 或 CT，检出率（54.2%）与正常人群（17.0%）差异显著(P0.01)；UU-DNA 阳性 106 例，CT-DNA 阳性 42 例，UU 和 CT 混合感染（UU+CT 阳性）19 例，男性 UU 和 CT 感染率分别为 40.6%和25.6 %，女性 UU 和 CT 感染率分别为 46.7%和 13.1%，UU 的感染率明显高于 CT(P0.05)；男性和女性患者感染 UU 和 CT 的基因拷贝数差异无明显 (P0.05，P0.05)。(见表 1)。表 1 23
6、8 例患者 UU 和 CT 的 FQ-PCR 检测结果（略）3 讨论 UU 和 CT 感染后主要引起泌尿生殖系局部炎症反应及并发一系列病理改变。医学研究证实1,2，男性泌尿生殖系感染 UU 和CT 后可直接由感染引起局部炎症导致尿道炎、附睾炎、前列腺炎，继而引起睾丸组织的病理变化，造成精子质量和受精功能下降，精浆的生理成分改变等因素均可导致男性不育；女性 UU或 CT 感染后引起炎性病变可使输卵管粘连、管腔变窄、阻塞导致卵子或受精卵通道障碍，子宫内膜炎干扰受精卵着床、植入及早期胚胎发育，感染诱发的变态反应和自身免疫改变等是引起女性不孕的重要因素。本组资料 238 例不孕不育患者中 UU-DNA
7、 阳性率 44.5%，CT-DNA 阳性率 17.6%，UU 或 CT 的总检出率达 54.2%，而正常人群则分别为 12.0%、8.0%和 17.0%，UU 的感染率明显高于 CT，说明泌尿生殖系统 UU 和 CT 感染与不孕不育有密切相关性，UU 和 CT 感染者是不孕不育的高发人群。本地区不孕不育症患者 UU、CT 感染率与王亚文3、廖启洪4、吴晓宁5等文献报道（UU、CT 感染率37.341.02、17.8%28.9）无明显差异，CT 感染率明显高于黄文珠文献报道6（UU、CT 感染率 39.4,4.1） ，本地区女性与男性患者 UU 和 CT 的基因拷贝数无明显差异性,这可能与本地区
8、病原体的流行病学因素、诊断水平、采样诊疗习惯、设备等因素有关。FQ-PCR 技术在医学检验学领域中对感染性疾病的诊断很有价值,该技术具有高特异性，高敏感、高精确的特点，对于典型病症或临床表现轻微或无症状的感染，都能够客观反映患者的病情，为疾病病因及早诊断提供依据，还可指导临床用药，对早期治疗和判断预后等方面有重要意义，FQ-PCR 技术应用于诊治 UU 或 CT 泌尿生殖道感染性不孕不育快捷精确、安全可靠，是值得临床上推广一种检测方法。解脲支原体、沙眼衣原体主要通过性行为传播，在性传播性疾病(STD)占感染性不育不孕的第一位，给人类自身带来了严重的后果。STD 的发生与流行不单单和医学有关，和
9、社会许多方面都有关系，STD 既是医学问题又是社会问题。因此，加强医学知识普及宣传、应用科学检测手段，提高人们防病意识及提供有效的防病措施，尽快在健康人群中进行有关方面的教育，提高大众预防疾病知识水平和预备意识，提高“自我生殖保健“能力，在防止 STD 蔓延导致感染性不育不孕方面起着十分重要的作用。【参考文献】1 吴志华.现代性病学M.广州:广东人民出版社,1996:133-136.2 叶顺章, 张木有.现代性传播疾病实验室诊断技术M.广州:广东科技出版社,1999:44-58.3王亚文,惠凌云,谭巩诚,等. FQ-PCR 检测不孕不育患者解脲支原体和沙眼衣原体J.中国妇幼健康研究,2006,4:262-263.4廖启洪,梁志东, 孟晓,等. FQ-PCR 检测不孕妇女沙眼衣原体和脲支原体研究J.中国优生与遗传杂志,2006,5:36-38.5吴晓宁,覃锦耀,黄 燕.生殖道感染与不孕不育的关系研究J.应用预防医,2007,13(5):309-401.6黄文珠. 生殖道支原体和衣原体感染与不孕的相关性J.中国热带医学,2006 ,9:1632.作者：谢文光，林晓桃作者单位：阳江市妇幼保健院, 广东 阳江 529500
