1、反义 HER-2/neu寡聚核苷酸对卵巢肿瘤细胞增殖的影响癌症 1999 年第 5期第 18卷 论著摘要作者：吴林 严隽鸿 杨有文 金由辛单位：吴林 严隽鸿，上海第二医科大学仁济医院妇产科(上海，200001)；杨有文，首都医科大学北京神经科学研究所(北京，100054)；金由辛，中国科学院上海生物化学研究所 通讯作者关键词：反义寡聚核苷酸；HER?2/neu；卵巢肿瘤中图分类号：Q74 文献标识码：A文章编号：1000467X(1999)05060101在卵巢肿瘤发生、发展过程中 HER-2/neu基因呈高水平表达状态1，2 ，通过其反义寡聚核苷酸处理卵巢肿瘤细胞株3ao 10/3以探讨靶基
2、因表达水平降低对卵巢肿瘤细胞增殖的影响。1 材料与方法1.1 材料卵巢肿瘤细胞株 3ao 10/3购自中科院细胞所，反义 HER-2/neu寡聚核苷酸自行设计合成，序列为5CAGCCCTGGTAGAGGTGGC3，HER-2/neu 兔抗人多抗，羊抗兔 IgG-HRP系华美生物工程公司产品。1.2 细胞计数100ml 的 6个培养瓶中接种 7.0105个 3ao 10/3卵巢肿瘤细胞，培养过夜后，向其中 3个培养瓶加 2ml含 20mol 反义 HER-2/neu寡聚核苷酸和 15小牛血清的 RPMI 1640培养液，另 3瓶加等量的含 15小牛血清的 RPMI 1640培养液。12 小时后每
3、瓶均补加 4ml培养液。3 天后收集细胞计数。统计学检验采用 t检验。1.3 Western 印迹法参考文献3进行。2 结果2.1 反义 HER-2/neu寡聚核苷酸对卵巢肿瘤细胞增殖的影响实验至第 3天，反义 HER-2/neu寡聚核苷酸处理组细胞总数为 6.191060.613106，未处理组为9.231060.66106。反义 HER-2/neu寡聚核苷酸处理组细胞总数显著少于对照组(P0.05)。2.2 反义 HER-2/neu寡聚核苷酸对 HER-2/neu蛋白表达的影响Western 印迹结果表明经反义 HER-2/neu寡聚核苷酸作用的卵巢肿瘤细胞，HER-2/neu 蛋白表达水
4、平低于未处理组(图 1)。图 1 Westernblot 结果1.分子量标准；2.示处理的卵巢肿瘤细胞；3.反义 HER-2/neu寡聚核苷酸作用的卵巢肿瘤细胞3 讨论HER-2/neu 基因在卵巢肿瘤发生中的异常表现为过度表达2，4 。近年尽管对其进行了大量的研究，但仍不清楚 HER-2/neu基因高水平表达是卵巢肿瘤发生的原因还是其发生的结果。因此有必要寻找一种方法对其进行判别。反义寡聚核苷酸能与双螺旋 DNA结合形成三股螺旋或与局部解链的 DNA单链结合而抑制 DNA的复制和转录，也可与 mRNA靶序列结合而阻断 mRNA的加工、成熟、核浆转移和翻译，从而对靶 mRNA的表达实现抑制作用
5、。本研究以 HER-2/neu基因的反义寡聚核苷酸处理卵巢肿瘤细胞株 3ao 10/3，发现反义 HER-2/neu寡聚核苷酸不仅降低 HER-2/neu基因的表达水平，而且抑制卵巢肿瘤细胞的增殖(P0.05)，提示 HER-2/neu基因过度表达可能是某些卵巢肿瘤发生的原因之一。参考文献1 Giannios J,Ioannidou-MouzakaL. Molecular aspects of breast and ovarian cancerJ. Eur J Gynaecol Oncol,1997,18(5):387393.2 Bast RC Jr,Boyer CM,Jacobs I,et
6、al. Cell growth regulation in epithelial ovarian cancerJ. Cancer,1993,71(4suppl):15971601.3 Aosubel FM,Brent R,Kinggstry RE,et al. Short protocols in molecular biologyM. Published by Greene Publishing Associates and Wiley Interscience,1989:304306.4 King BL,Carter D,Foellmer HC,et al. Neu proto-oncogene amplification and expression in ovarian adenocarcinoma cell linesJ. Am J Pathol,1992,140(1):2331.收稿日期：19980930；修回日期：19990520
