1、反复自然流产患者封闭抗体的流式细胞仪检测【关键词】流产 反复自然流产（Recurrent spontaneous Abortion，RSA）为连续发生自然流产 2次以上，是常见的妊娠并发症，除少数因生殖道器质性病变、染色体及内分泌异常等原因外，80%以上原因不明，多数可能与免疫有关，封闭抗体缺乏是 RSA的一种常见原因 1 。近年来，国内外许多学者运用母体抗父系淋巴毒抗体测定，及女方对男方的单项混合淋巴细胞培养和无关第三者的抗原作比较等方法来测定封闭抗体，但无一种方法可以作出确定的诊断 2 。我们以正常男性 AB型血清作对照，探讨 RSA患者血清中封闭抗体及正常生育妇女封闭抗体对配偶 T淋巴细
2、胞 CD抗原的影响，从而反映出 RSA患者体内封闭抗体的水平，取得了较满意的效果，现报道如下。1 对象与方法1.1 对象 RSA组 36例，既往曾发生自然流产 26 次，经子宫输卵管碘油造影证实生殖道无器质性病变，基础体温双相，黄体期不少于 12天，且较平稳，夫妻双方染色体核型正常，丈夫精液常规在正常范围。正常生育组 12例，1 年 内有足月分娩史，夫妻双方无内分泌及免疫性疾患史，接受免疫检查时处于非妊娠状态。1.2 方法 取 RSA患者配偶外周抗凝全血 100l 加入鼠抗人 CD 3 、CD 4 、CD 8 单克隆抗体 20l，再加入患者血清或正常男性 AB型血清 50l，孵育 30min，
3、加入红细胞溶解液 3ml，PBS 洗涤 1次，以流式细胞仪客观分析打印出加女性血清及加 AB型血清的配偶 T淋巴细胞 CD +3、CD +4 、CD +8 细胞比例，并按下列公式计算封闭效率。封闭效率=加 AB型血清CD比例-加女性血清 CD比例（%）封闭抗体阳性值:正常生育组封闭效率（X-1.96s） ，大于此值者为封闭抗体阳性。1.3 统计学方法 封闭效率数值作均数 t检验，封闭抗体阳性率作 X 2 检验。2 结果2.1 封闭抗体效率的计量 见表 1。表 1 正常组与 RSA患者组封闭抗体对配偶 T淋巴细胞 CD抗原的影响比较 （略）经统计学处理，正常生育组妇女封闭抗体效率（对配偶 CD
4、3 、CD 4 、CD 8 ）比例均明显高于 RSA患者的封闭抗体效率， P2.2 封闭抗体阳性发生率 见表2。表 2 正常生育组与 RSA患者组的封闭抗体阳性发生率的比较 以大于正常生育组封闭抗体效率（X-1.96s）计为阳性，经统计学处理，正常生育组封闭抗体阳性发生率明显高于 RSA患者组封闭抗体阳性率，P3 讨论3.1 封闭抗体与妊娠的关系 越来越多的证据表明封闭抗体缺乏可以导致 RSA的发生 1，2 ，正常生育妇女体内存在一定水平的封闭抗体，在妊娠期间，这种抗体可以与母胎界面上来自父方的抗原相结合，而使胎儿不能被母体免疫系统识别，免受母体免疫系统的攻击。RSA 患者体内缺乏抗配偶 CD
5、 3 、CD 4 等抗原的封闭抗体，致使母体对胚胎的免疫保护作用低于对胚胎的免疫损伤作用，胚胎最终因遭受免疫排斥而发生流产 3 。3.2 流式细胞仪分析封闭抗体的意义 资料表明，RSA 的患者有 80%封闭抗体阴性，而正常分娩者 77%封闭抗体为阳性 2 。我们运用流式细胞仪，分析RSA患者与正常生育妇女血清中封闭抗体，结果显示，正常生育组与 RSA患者组抗配偶 T淋巴细胞的 CD 3 、CD 4 、CD 8比例相比差异有显著性，t 值分别为5.876、5.077、3.554，P3.3 流式细胞仪分析封闭抗体的优点 运用流式细胞仪分析 RSA患者血清中封闭抗体，阳性率与文献报道相吻合，并且方法
6、较简便，耗时少，可以作为检测封闭抗体的一个指标。实验中我们发现，RSA 患者血清中封闭抗体对配偶 T淋巴细胞 CD 3 、CD 4 、CD 8 的影响与 AB型男性血清比较 后，样本均数为负值，这是否表明 RSA患者血清内存在某种因子，抑制了封闭抗体的活性呢?尚需进一步探讨。参考文献1 Takenchi S.Is production of blocking antibodies in successful human pregnancy an epiphenomenon?Am J Reprod Immunol，1990，24:108.2 罗丽兰.生殖免疫学，武汉:湖北科学技术出版社，1998，83-85.3 李大金，李超荆，朱影，等.流产患者的封闭抗体对配偶 T淋巴细胞 CD抗原的影响.中华医学杂志，1994，74:568.（收稿日期:2002-06-07）作者单位:221009 江苏省徐州市妇幼保健院（编辑晓 勇）作者：孟庆勇林萍王鸣
