1、生命科学学院,水产动物营养与饲料学实验,水产动物营养与饲料学,实验内容：,模块三 饲料微量成分分析,模块二 饲料营养价值评定,模块一 饲料配制及加工工艺,实验：水产饲料配方设计与制作,一、实验目的：,1、掌握鱼虾饲料的设计方法； 2、掌握鱼虾饲料配方设计的原理； 3、能够独立设计饲料配方。,实验：水产饲料配方设计与制作,二 、原理：,由于设计商品用配合饲料，需采用多种饲料原料， 同时要考虑每种饲料原料的多项营养成分，根据养殖 对象的营养指标，设计出营养成分合理、价格最低的 配合饲料配方。,三、实验原则：,1、能量与蛋白质的平衡 2、蛋白质与氨基酸的平衡 3、钙磷需要量及比例 4、微量元素与维生
2、素 5、粗纤维含量以及限度 6、动物性饲料与植物性饲料的平衡 7、日粮中其他营养物质,实验：水产饲料配方设计与制作,四、 基本方法,1)交叉法（cross method） 又称四角法、方形法、对角线法或图解法。在饲 料种类不多及营养指标少的情况下，采用此法。,2)代数法,3)软件法,4)EXCEL法,实验：水产饲料配方设计与制作,实验：水产饲料配方设计与制作,五、涉及步骤,1、查找动物的饲养标准及营养需要； 2、根据就地取材，原料广泛、易得的原则，选择饲料原料，实测或从中国饲料数据库查出所选饲料原料的成分及营养价值。 3、设计基本的饲料配方 4、检查饲料配方的合理性、经济性、推广性。,实验：水
3、产饲料配方设计与制作,几种鱼的营养需要,草鱼鱼种饲料配方 草鱼成鱼饲料配方,罗非鱼饲料配方 鲤鱼鱼种饲料配方,实验：饲料原料的混合,1、掌握饲料原料主体成分的计量； 2、掌握饲料添加剂的预混合方法 3、掌握主体饲料原料与预混料的混合方法,一、实验目的：,实验：饲料原料的混合,二、实验原理：,为保证水产动物每餐都能采食到包含有各种营养成分的饲粮。就必须保证各组分物料在整批饲料中均匀分布，尤其是一些添加量极少而对动物生长又影响很大的“活性成分”，如维生素、微量元素、药剂及其他微量成分等，更要求分布均匀。因此将各种饲料原料经计量配料后，在外力作用下各种物料组分互相掺合，使其均匀分布。,三、实验材料与
4、仪器：,台秤，托盘天平，铁锹，塑料大盆，花塑料布。,实验：饲料原料的混合,四、实验步骤：,1、用计量称将主体饲料按饲料配方比例称重 2、将预混料按逐级扩大的方法混合，如需特殊处理的添加剂，先做预处理。 3、先将主体饲料的80%称好，加入预混料，之后把剩下20%的主体饲料加到最上面进行混合，用铁锹翻倒混合7-8次。,实验：饲料原料的混合,配合饲料混合后的变异系数10% 预混合饲料混合后的变异系数5%,五、注意：,实验：饲料原料的混合,水产动物饲料制粒实验,一、实验目的,1、学习饲料制粒机械的使用方法 2、掌握饲料制粒加工工艺,二、实验原理：,水产动物饲料制粒实验,通过机械作用将单一原料或配合混合
5、料压实 并挤压出模孔形成的颗粒状饲料称为制粒。制粒的 目的是将细碎的、易扬尘的、适口性差的和难于装 运的饲料，利用制粒加工过程中的热、水分和压力 的作用制成颗粒料 。,三、实验材料环模饲料颗粒机（附带混合机）食用大豆油水,水产动物饲料制粒实验,四、制粒步骤1.将混合好的饲料加入混合机中，加入自来水进行调制，使物料的水分达到15%19%，温度8090 。2.调整制粒机环模和压辊的间隙（0.05-0.3mm）,目测压模与压辊正好接触。 3.调整切刀，切成长度适宜的颗粒。4.调整制粒机加料量，使其正好。,水产动物饲料制粒实验,饲料水分的测定 （GB/T6435 -2006）,重点及难点:对恒重的理解
6、,本标准适用于测定配合饲料和单一饲料中水分含量,一、适用范围,饲料水分的测定,二、原理饲料样品在1052烘箱内在大气压下烘干，直至恒重，逸失的重量为水分。,饲料水分的测定,三、仪器设备粉碎机、分析天平、烘箱、 称样器、 干燥器。,饲料水分的测定,四、测定步骤洁净称样皿，在1052烘箱中烘1h（以温度到105开始计时），取出，盖好称样皿盖，在干燥器中冷却30min称重。再同样烘干1h，冷却称重，直至两次称重之重量差小于0.002g。,饲料水分的测定,称取2克饲料，在1052烘箱中烘2h取出，盖好称样皿盖，在干燥器中冷却30min称重。再同样烘干1h，冷却称重，直至两次称重之重量差小于0.002g
7、。,饲料水分的测定,m1105烘干前试样及称样皿质量 m2105烘干后试样及称样皿质量 m0已衡重的称样皿质量,水分（）,=,饲料水分的测定,饲料中粗蛋白的测定,重点及难点: 1、试样的消煮 2、NH3的蒸馏 3、滴定,（GB/T6432-2006）,饲料中粗蛋白的测定,本标准适用于配合饲料，浓缩饲料和单一饲料。,一、适用范围,饲料中粗蛋白的测定,粗蛋白:在测定结果中蛋白质外,还有氨基酸、酰胺、铵盐和部分硝酸盐、亚硝酸盐等故叫做粗蛋白质.,饲料中粗蛋白的测定,凯氏法测定试样中的含N量，即在催化剂作用下，用 H2SO4破坏有机物，使含N物转化成（NH4）2SO4，加入 强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼
8、酸吸收后，再用盐酸滴定， 测出N含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出CP含量。,二 原理,饲料中粗蛋白的测定,其主要化学反应如下： 1、2NH2(CH2)2COOH+ H2SO4(NH4)2SO4+6CO2+12SO2+16H2 2、(NH4)2SO4+2NaOH2NH3+3H2O+2Na2SO4 3、NH3+4H3BO3NH4HB4O7+5H2O 4、NH4HB4O7+HCL+5H2ONH4CL+4H3BO3,饲料中粗蛋白的测定,1、H2SO4 2、混合催化剂(CuSO4和K2SO4) 3、NaOH (40%) 4、硼酸吸收液(2%) 5、混合指示剂 甲基红溴甲酚绿 6、HCl标准液 (
9、0.05mol/L) 7、蔗糖,三、试剂,1、粉碎机 2、分样筛 (孔径0.45m m，40目) 3、分析天平（感量0.0001 g） 4、消煮炉 5、酸式滴定管25ml 6、半微量凯式定氮仪 7、锥形瓶 8、容量瓶(100ml ) 9、消煮管,饲料中粗蛋白的测定,四、仪器设备,饲料中粗蛋白的测定,五、测定步骤,1、试样的消煮 称取0.3g试样准确至0.0002g，无损的放入消煮管中，加入硫酸铜和无水硫酸钾3g，与试样混合均匀，再加硫酸20ml，在消煮炉上小心加热，待样品焦化，泡沫消失，再加强火力（360-410）直至溶液澄清后，再加热消化15 min 。,浓H2SO420ml,样本0.3g,
10、混合催化剂2-3g,饲料中粗蛋白的测定,饲料中粗蛋白的测定,2 、定容 将消煮管中的试样消煮液冷却，加蒸馏水20ml转入100ml容量瓶，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液.,100ml容量瓶,实饲料中粗蛋白的测定,3、NH3的蒸馏 (半微量水蒸气蒸馏法),饲料中粗蛋白的测定,实验 二 饲料中粗蛋白的测定,饲料中粗蛋白的测定,4、滴定 用硼酸吸收氨后，立即用0.05 mol/l的HCL标准液滴定，仍以混合指示剂为指示剂。溶液呈砖红色为滴定终点.,每ml的1 mol/lHCL标准液相当于0.0140 g的N。因此， 粗蛋白质（%）=（v2-v1）c0.0146.25 v 100m v/ 试
11、样：v2试样滴定时所需酸标准溶液的体积（ml）v1空白滴定时所需酸标准溶液的体积（ml）c盐酸标准溶液的浓度mol/lm试样的质量（g）v试样分解液总体积（ml）v/试样分解液蒸馏用体积（ml）0.014每ml盐酸标准溶液相当于N的g数6.25氮换算成蛋白质的平均系数,五、结果计算,饲料粗脂肪的测定,重点及难点:1 、滤纸包的包法 2 、抽提完全的判断,（GB/T6433-2006),一、原理索氏脂肪提取器中用乙醚提取试样，称提取物的重量，除脂肪外还有有机酸，磷脂、脂溶性Vit，叶绿素等，因而测定结果称粗脂肪或乙醚提取物。,饲料粗脂肪的测定,无水乙醚,二、试剂,饲料粗脂肪的测定,三、仪器设备
12、1、粉碎机 2、分样筛 3、分析天平 4、电热恒温水浴锅 5、恒温烘箱 6、索氏脂肪提取器 7、索氏脂肪提取仪 8、滤纸 9、干燥器,实验三 饲料粗脂肪的测定,实验三 饲料粗脂肪的测定,1、抽提瓶的恒重 在 1052烘箱中烘干60min，干燥器中冷 却30min，称重再烘干30min，同样冷却称重两 次重量之差小于0.0008g为恒重。,实验三 饲料粗脂肪的测定,四、分析步骤,(1)制做滤纸包 (2)试样预处理 (3)试样脂肪的提取,2、试样的测定,饲料粗脂肪的测定,3、脂肪和抽提瓶的恒重,饲料粗脂肪的测定,五、结果计算 1、计算粗脂肪（%）=,式中：m风干试样重量m1已衡重的抽提瓶重量m2已
13、衡重的盛有脂肪的抽提瓶重量,饲料粗脂肪的测定,2、重复性 每试样取两个平行样进行测定 粗脂肪含量在10%以上时，允许相对偏差为3%。 粗脂肪含量在10%以下时，允许相对偏差为5%。,饲料粗脂肪的测定,饲料粗灰分的测定,一、适用范围,本标准适用于配合饲料，浓缩饲料及各 种单一饲料中粗灰分测定。,饲料粗灰分的测定,二、原理试样在550灼烧后所得残渣，用质量百分率来表示，残渣中主要是氯化物、无机盐类等矿物质也包括混入饲料中的砂石、土等、故称粗灰分。,饲料粗灰分的测定,三、仪器与设备 1、分析天平(感量 0.00001) 2、茂福炉 (马福炉) 3、坩锅 4、干燥器,四、测定步骤 1.坩锅的恒重将干净
14、坩锅放入高温炉，在55020下灼烧30min取出，在空气中冷却约 1min，放入干燥器中冷却30min称重，再重复灼热，冷却、称重，直至两次重量之差小于0.0005g为恒重。,饲料粗灰分的测定,2.试样炭化在已恒重的坩锅中称取2g试样，准确至0.0002g，在电炉上小心炭化，在炭化过程中，应将饲料在较低温状态加热灼烧至无烟。,饲料粗灰分的测定,3.试样的灰化放入高温炉于55020灼烧3h，取出在空气中冷却约1min，放入干燥器中冷却至30min，称重，再同样灼烧1h，冷却称重,直至两次质量之差 小于0.001g为恒重。,饲料粗灰分的测定,六、结果计算,式中：m0 已衡重坩埚质量（g）m1 坩埚
15、加试样质量（g）m2 灰化后坩埚加灰分质量（g）,1、计算,饲料粗灰分的测定,每试样取两个平行样进行测定 灰分质量在5%以上时，允许相对偏差为1%； 粗灰分量在5%以下时，允许相对偏差为5%,2.重复性,饲料粗灰分的测定,本标准规定了饲料中Ca的测定方法 本标准适用于配合饲料，单一饲料和浓缩饲料。,饲料中Ca含量的测定,一、主题内容与适用范围,二、原理,将试样中有机物破坏，Ca变成溶于水的离子，用 草酸铵定量沉淀，用高锰酸钾法间接测定Ca含量。,饲料中Ca含量的测定,1、HCl 1:3 6、KMnO4标准溶液 (0.05mol/L) 2、硫酸 1:3 7、甲基红指示剂 3、浓硝酸 8 、氨水
16、1:50 4、氨水 1:1 5、草酸铵水溶液4.2%,三、试剂,饲料中Ca含量的测定,四、仪器和设备,1、分析天平 6、玻璃漏斗 2、高温炉 7、定量滤纸 3、坩锅 8、移液管 4、容量瓶 9、烧杯 5、滴定管,饲料中Ca含量的测定,1、 试样的分解 2、 试样的测定 3 、用滤纸过滤,五、测定步骤,饲料中Ca含量的测定,干法：称取试样2 g于坩埚中，在电炉上小心炭化， 再放入高温炉于550下灼烧3小时。在盛灰坩埚 中加入盐酸溶液10 ml和浓硝酸数滴，小心煮沸。 将此溶液转入100 ml容量瓶，冷却至室温，用蒸 馏水稀释至刻度，摇匀为试样分解液。,1、试样的分解,饲料中Ca含量的测定,2、试
17、样的沉淀,a 准确取试样分解液10ml于烧杯中，加蒸馏水100 ml，甲基红指示剂2滴。b 滴家氨水溶液使溶液呈橙色，再加盐酸溶液使溶液恰变成红色（pH为2.5-3.0）小心著沸，漫漫滴加热草酸氨溶液10 ml，并不断搅拌。C 如溶液变橙色，应补滴盐酸溶液至红色。煮沸数分钟，放置过夜使沉淀陈化。,饲料中Ca含量的测定,1：50氨水溶液洗沉淀6-8次，至无草酸根离子（接滤液数毫升，加硫酸液数滴，加热至30，再加高锰酸钾溶液2滴，呈微红色，30秒不褪色）。 将沉淀和滤纸转入原烧杯中，加入硫酸溶液10 ml,蒸馏水50 ml，加热至7585，用0.05 mol/l高锰酸钾标准溶液滴定，溶液呈粉红色半
18、分钟不褪色为终点。,3.试样的过滤,饲料中Ca含量的测定,（V-V0）C40/2,六、结果计算,式中：V 0.05 mol/l高锰酸钾标准溶液滴定用体积（ml）V0 测定空白时，0.05 mol/l高锰酸钾标准溶液滴定用体积（ml）C 高锰酸钾标准溶液浓度（mol/l）M 试样质量（g）V/ 滴定时移取试样分解液体积（ml）40/2 钙的mol数,MV/100,Ca（%）=,100/1000=,（V-V0）C200,MV/,饲料中Ca含量的测定,每个试样平行样进行测定，以其算术平均值为结果。含钙量在5%以上，允许相对偏差3%；含钙量5%1%时，允许相对偏差5%；含钙量1%以下时，允许相对偏差1
19、0%。,重复性,饲料中Ca含量的测定,饲料中总磷量的测定,本标准规定了用钼黄显色光度法测定饲料 中总P量的方法.本标准适用于配合饲料，浓缩饲料，预混 合饲料和单一饲料.,一、主题内容与适用范围,将试样中的有机物破坏、使P游离出来，在酸性溶液中，用钼酸铵处理，生成黄色的(NH4)3PO4NH4VO316M0O3,在波长420nm下进行比色测定。,二、原理,饲料中总磷量的测定,1、HCl 1:3 2 HNO3 3、钒钼酸铵显色剂,三、试剂,饲料中总磷量的测定,四、仪器和设备,1、粉碎机 2、分样筛 3、分析天平 4、分光光度计 5、比色管,饲料中总磷量的测定,五、测定,1、标准曲线的制作 在50m
20、l比色管中依次加0、 1 、 2、3、4、5（ml）的标准磷酸液，定容，静置半小时.以0号为空白溶液，在分光光度计上比色（光波为420nm）测定光密度。在方格纸上，以光密度为横轴，以浓度为纵轴，做标准曲线。,饲料中总磷量的测定,移取试样分解液5ml于50ml容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂10ml，在722分光光度计比色测定，测得试样分解液的吸光度，用标准曲线查得试样分解液的含P量。,2、试样的测定,饲料中总磷量的测定,样本中磷含量(%)=a/Wv1/v2100/10001/1000,六、结果计算,饲料中总磷量的测定,1.计算,含磷量在0.5%以上时,允许相对偏差为3%; 含磷量在0.5%以下时,
21、允许相对偏差为10%,2.重复性,饲料中总磷量的测定,动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定 （过滤法） GB/T17811-2008,本标准规定了动物性蛋白饲料胃蛋白酶消化率的测定方法。本标准适用于所有动物性蛋白饲料胃蛋白酶消化率的测定，其值同体内消化率没有直接关系。,一 范围,动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定 （过滤法） GB/T17811-2008,二 原理:已脱过脂的试样用温热的胃蛋白酶液（酶液浓度和用量与酶解试样质量恒定），在恒温，持续不断地振摇或搅拌下消化16h，过滤分离不溶性残渣，洗涤、干燥，测定残渣的粗蛋白质含量，同时测定脱脂未酶解试样的蛋白质含量。,动物性蛋白质饲料-胃
22、蛋白酶消化率的测定 （过滤法） GB/T17811-2008,三 试剂和材料20IU/ml胃蛋白酶液（临用前配制）乙醚丙酮定氮试剂,动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定（过滤法） GB/T17811-2008,恒温式平转摇床：温控范围20-50，水浴式 或空气浴式均可，转速可调（15r/min-300r/min）. 实验室用样品粉碎机 索氏抽提器、脱脂设备 定氮仪器、设备 实验室常用仪器设备,四 仪器与设备,五 测定步骤1 脱脂称取3-4克试样用乙醚脱脂（含脂肪小于1%可不脱脂，含脂肪1%-10%建议脱脂，含脂肪大于10%则应脱脂）。脱脂方法可参照GB/T6433中粗脂肪抽提方法进行。脱脂后
23、样品需在室温风干，去掉乙醚。,动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定（过滤法） GB/T17811-2008,2 胃蛋白酶消化称取已脱脂风干后的试样1.000g（精确至0.0010g）250ml带盖磨口瓶中，加150ml新配制的并已预热至42-45的胃蛋白酶夜，应确保样品完全被胃蛋白酶溶液浸湿，盖紧瓶盖，将瓶夹于恒温摇床上，于45恒定速度搅动16h进行保温酶解消化。,动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定（过滤法） GB/T17811-2008,从搅动器上取下磨口瓶，呈45度角放置，让残渣沉淀15min以上，随后在铺有快速滤纸的布氏滤纸上抽滤，先用少量水将瓶盖上的残渣洗至滤纸，再将磨口瓶保持沉
24、淀时的角度移至布氏漏斗上，慢慢倾出内容物，使之通过滤纸后形成连续的细流，避免任何不必要的搅动。液体滤过滤纸的速度应与倾入的速度相同。,3 消化残渣的处理,动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定（过滤法） GB/T17811-2008,当上层液体通过滤纸后，于瓶中加入15ml丙酮，用拇指盖住瓶盖剧烈振摇，放开。再用拇指堵住瓶口，在滤纸上方将瓶倒置振摇，放开拇指，丙酮和残渣流到滤纸上。再用一份15ml的丙酮进行洗涤。照上法振摇和倒出。检查瓶子，并用丙酮再次洗涤。当全部液体通过滤器后，用洗瓶以少量丙酮洗涤漏斗壁上残渣两次，并抽干。从布氏漏斗上小心取下载有残渣的滤纸，无损地移入凯氏烧瓶中，并将凯氏烧瓶
25、置于105烘箱内烘干。,动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定（过滤法） GB/T17811-2008,4 粗蛋白质的测定将上述已烘干的残渣按GB/T6432中方法测定粗蛋白质的质量分数(w2)，测定残渣粗蛋白质时应从每个样品残渣粗蛋白质中减去酶液的空白值。同时称取脱脂风干样品若干克（精确至0.0002g）直接按GB/T6432测定脱脂未酶解的样品中粗蛋白质的质量分数（w1）。,动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定（过滤法） GB/T17811-2008,六 分析结果的表述：1 试样胃蛋白酶消化率X,以质量分数计，数值以%表示，按式（1）计算：,.(1),动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测
26、定（过滤法） GB/T17811-2008,式中：w1-脱脂未酶解的样品中粗蛋白的质量分数，%W2-脱脂酶解后残渣中蛋白质的质量分数，%,动物性蛋白质饲料-胃蛋白酶消化率的测定（过滤法） GB/T17811-2008,2 注意：每个试样脱脂风干后取两份试料进行酶解，平行测定残渣粗蛋白的质量分数，以其算术平均值为测定结果（保留三位有效数字），测定结果相对偏差6%。每个试样脱脂风干后取两份试料进行平行测定粗蛋白质的质量分数，以其算术平均值为测定结果（保留三位有效数字），测定结果相对偏差应符合GB/T6432中规定的相对偏差允许范围。每个试样胃蛋白酶消化率测定结果保留三位有效数字。,动物性蛋白质饲料
27、-胃蛋白酶消化率的测定（过滤法） GB/T17811-2008,木聚糖酶活力的测定（DNS法）,用分光光度法测定饲料添加剂中木聚糖酶的活力。,一 范围,二 原理木聚糖酶能将木聚糖降解为寡糖和单糖，还原性寡糖和单糖在沸水浴下和3,5-二硝基水杨酸（DNS）发生显色反应，反应液颜色的深度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中木聚糖酶的活力成正比。因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液木聚糖酶的活力。,木聚糖酶活力的测定（DNS法）,三 试剂与仪器,木聚糖 木糖标准液 3,5-二硝基水杨酸（DNS） 木聚糖酶液,电炉子 可见分光光度计 恒温水浴锅 漩涡振荡器 移液器
28、（200l，1000l） 25ml比色管 25 ml试管,木聚糖酶活力的测定（DNS法）,四 测定步骤1 绘制标准曲线按照下表进行标准曲线制作： 按下表操作后，将试管于沸水浴中沸腾5分钟（样品放入重新沸腾时算起），取出后冷却定容后，在分光光度计540nm比色，以所得的光密度OD值为纵座标，以对应的标准木糖液浓度（即：200，300，400，500，600，700，此为每管中木糖的g数）为横座标，绘制标准曲线。以0管调零，标线不设0点。,木聚糖酶活力的测定（DNS法）,木聚糖酶活力的测定（DNS法）,2.酶活力测定在试验管加入1.8ml底物，50水浴中预热5min后，加入200l适当稀释的酶液（
29、使OD值在0.1-0.7之间），混匀。精确反应5min后迅速冷却（置于冰浴中），加入3.0ml DNS试剂，混匀。沸水浴5min取出试管，加入10ml蒸馏水，冷却至室温，然后在540nm处测定样品中的木糖含量；,木聚糖酶活力的测定（DNS法）,按照下式计算样品的木聚糖酶的活力：,木聚糖酶活力的测定（DNS法）,U木聚糖酶活力，u/g ； X根据吸光度在标准曲线上查得（或从回归方程计算出）的还原糖生成量，g； V样品提取时加入水的量（ml）； N样品二次稀释时的稀释倍数； 0.2参与反应的酶量（ml）； W样品重量（g）； 5反应时间（min）。 注：每个样品同时做的三支平行试管，其相对误差=10%，超过此范围，试验应重做。,式中：,木聚糖酶活力的测定（DNS法）,
