1、 广州虹骅生物科技有限公司传真：020-81496070 电话：020-81494419Website: http:/ Email: 孔 雀 石 绿 /结 晶 紫 检 测 试 剂 盒使 用 说 明 书适 用Beacon 孔 雀 石 绿 /结 晶 紫 检 测 试 剂 盒 是 利 用 酶 联 免 疫 吸 附 测 定 法 用 于 食 品 中 孔 雀 石 绿 /结 晶 紫 的 定 量 测 定 。检 测 原 理酶 联 免 疫 吸 附 测 定 法 定 量 测 定 孔 雀 石 绿 /结 晶 紫 残 留 。 利 用 萃 取 液 通 过 均 质 及 振 荡 的 方 式 提 取 样 品 中 的 孔 雀 石 绿 /
2、结 晶 紫 进 行 免 疫 测 定 。 先 将 标 准 及 样 品 加 入 到 微 孔 中 ， 再 加 入 抗 体 。 孵 育 30 分 钟 后 洗 掉 小 孔 中 所 有 没 有 结 合 的 分 子 。每 孔 再 加 入 酶 标 记 物 ， 孵 育 30 分 钟 后 洗 掉 小 孔 中 所 有 没 有 结 合 的 分 子 。 每 孔 中 加 入 清 澈 的 底 物 溶 液 ， 结 合 的 酶 标 记 物 将无 色 的 底 物 转 化 为 蓝 色 的 物 质 。 孵 育 30 分 钟 后 停 止 此 反 应 ， 根 据 各 孔 颜 色 深 浅 进 行 数 据 读 取 。 依 据 标 准 的 颜
3、 色 得 出 样 品的 浓 度 值 。特 异 性Beacon 孔 雀 石 绿 /结 晶 紫 检 测 试 剂 盒 能 检 测 孔 雀 石 绿 及 其 相 似 物 ， 它 们 的 结 合 程 度 是 不 同 ， 以 下 表 格 中 展 示 的 是 相 关 值 及交 叉 反 映 率 （ %CR） ， 以 下 所 有 浓 度 均 为 ppb 级 。种类 % CR孔雀石绿 100%隐性孔雀石绿 1%结晶紫 250%隐性结晶紫 1%检 测 限水 产 品 ： 0.5 ppb.提 供 试 剂 及 材 料试 剂 盒 在 2-8C 贮 存 （ 不 要 冷 冻 ） ， 请 于 盒 上 标 注 日 期 前 用 完 。
4、1 空 包 装 微 孔 板 （ 812 条 ） .2 1 瓶 2mL 孔 雀 石 绿 高 浓 度 标 准 液 ， 浓 度 分 别 为 100 g/L (ppb) .3 1 瓶 1 mL 孔 雀 石 绿 酶 标 记 浓 缩 物 （ X30） .4 1 瓶 12mL 孔 雀 石 绿 抗 体 .5 1 瓶 14 mL 底 物 .6 1 瓶 14 mL 停 止 液 . (注 意 : 1N 盐 酸 , 勿 接 触 皮 肤 !).7 1 瓶 25mL 酶 标 记 物 稀 释 液 .8 试 剂 a 4 倍 浓 缩 物 （ 用 于 样 品 前 处 理 ） 20mL.9 试 剂 b （ 用 于 样 品 前 处
5、理 ） 10g.10 操 作 说 明 书 .注 意 事 项1 最 好 配 套 使 用 Beacon 所 提 供 的 试 剂 ， 不 要 同 其 它 公 司 的 产 品 混 用 ， 不 要 将 不 同 批 次 的 产 品 混 用 。2 样 品 稀 释 或 含 有 杂 质 很 可 能 对 结 果 的 准 确 性 有 影 响 。3 不 要 使 用 过 期 的 产 品 。4 使 用 之 前 将 所 有 试 剂 回 升 至 室 温 20-280C， 但 不 要 放 置 超 过 24 小 时 。5 孔 雀 石 绿 属 于 抗 生 素 ， 请 小 心 处 理 。广州虹骅生物科技有限公司传真：020-8149
6、6070 电话：020-81494419Website: http:/ Email: 6 停 止 液 是 1N 盐 酸 ， 避 免 接 触 皮 肤 。试 剂 盒 未 提 供 的 材 料1. 蒸 馏 水 或 去 离 子 水 .2. 乙 腈 .3. 量 筒 , 100 ml 或 更 大 .4. 样 品 萃 取 及 收 集 用 的 玻 璃 器 皿 .5. 中 性 氧 化 铝 ,100-200 目 .6. 可 吸 取 50ul 的 移 液 器 及 吸 头 .7. 可 吸 取 50ul 和 100ul 的 八 道 移 液 器 及 吸 头 .8. 吸 水 纸 或 相 当 的 吸 水 材 料 .9. 450
7、nm 的 酶 标 仪 . 10. 计 时 器 .11. 混 旋 器 .12. 洗 瓶 .13. 20mM PBS： 0.62g NaH2PO4-2H2O+5.73gNa2HPO4-12H2O+9gNaCl ,蒸 馏 水 定 容 至 1000ml.检 测 前 所 需 准 备 试 剂试 剂 I 的 准 备 ： 用 乙 腈 按 照 1： 4 稀 释 试 剂 a ； 例 ： 移 取 试 剂 a 2ml 到 6ml 乙 腈 中 可 得 到 8ml 所 需 试 剂 。样 品 稀 释 液 的 准 备 ： 10ml 乙 腈 加 入 到 90 ml ,20mMPBS 中 混 合 ， 即 可 得 到 100ml
8、,10%乙 腈 / 20mMPBS。酶 标 记 物 的 准 备 ： 免 疫 测 定 前 准 备 酶 标 记 物 溶 液 ， 用 酶 标 记 物 稀 释 缓 冲 液 按 照 1： 30 稀 释 30 倍 酶 标 记 浓 缩 物 。 例 ： 移 取 0.2ml ,30 倍 酶 标 记 浓 缩 物 到 5.8ml 酶 标 记 物 稀 释 缓 冲 液 中 ， 可 得 到 足 够 3 个 孔 条 的 量 。标 准 的 准 备在开始检测程序之前，用样品稀释液（10%乙腈/20mMPBS）稀释高浓度孔雀石绿标准液。在稀释之前使高浓度孔雀石绿标准液回到室温。稀释好的标准需当日使用。1 取出 5 个干净的 10
9、ml 具塞试管分别标上“0.405，0.135，0.045，0.015，0.005”样品稀释液为 0 标准。2 配制 0.405ppb 标准：用玻璃微量移液器（液相或气相用）移取 30ul 100ppb 高浓度孔雀石绿标准溶液到已盛有 7.38ml 样品稀释液标有 0.405 的试管中。彻底混合。3 配制 0.135ppb 标准：用移液器移取 1ml 已配好的 0.405ppb 的标准到已盛有 2ml 样品稀释液标有 0.135 的试管中。彻底混合。4 配制 0.045ppb 标准：用移液器移取 1ml 已配好的 0.135ppb 的标准到已盛有 2ml 样品稀释液标有 0.045 的试管中。
10、彻底混合。5 配制 0.015ppb 标准：用移液器移取 1ml 已配好的 0.045ppb 的标准到已盛有 2ml 样品稀释液标有 0.015 的试管中。彻底混合。6 配制 0.005ppb 标准：用移液器移取 1ml 已配好的 0.015ppb 的标准到已盛有 2ml 样品稀释液标有 0.005 的试管中。彻底混合。、确定将试管该拧紧避免蒸发损失。样 品 制 备水 产 品 （ 稀 释 倍 数 ： 10）1. 称 5 g 绞 碎 样 品 ， 除 去 多 余 水 分 ， 于 50ml 离 心 管 中 加 入 10ml 乙 腈 。2. 均 质 5 秒 钟 。3. 3000 g 室 温 离 心 5
11、 分 钟 。4. 加 入 3g 中 性 氧 化 铝 (100-200 目 )。5. 3000 g 室 温 离 心 5 分 钟 。6. 移 取 上 清 液 于 2ml 干 净 离 心 管 中 ， 氮 气 吹 干 。7. 加 入 0.5ml 稀 释 好 的 试 剂 a,混 合 3 秒 钟 ， 然 后 静 置 30 分 钟 。8. 称 取 0.1g 试 剂 b 并 加 入 到 小 管 中 ， 混 合 3 秒 钟 ， 然 后 静 置 10 分 钟 。9. 取 100ul 上 清 液 加 入 1.9mL 样 品 稀 释 液 （ 10% 乙 腈 /20mMPBS 中 ） 1： 20 稀 释 并 混 匀 。
12、10. 移 取 100 ul 进 行 分 析 。注 意 ： 此 方 法 所 得 到 的 结 果 为 孔 雀 石 绿 ； 隐 性 孔 雀 石 绿 ； 结 晶 紫 ； 隐 性 结 晶 紫 的 总 量 。广州虹骅生物科技有限公司传真：020-81496070 电话：020-81494419Website: http:/ Email: 本 方 法 只 可 作 为 样 品 筛 选 方 法 ， 不 可 作 为 最 终 确 认 方 法 。水 样需 用 1.9mL 样 品 稀 释 液 （ 10% 乙 腈 /20mMPBS 中 ） ， 高 倍 稀 释 后 测 定 。测 定 结 果 乘 以 稀 释 倍 数 。注
13、意 ： 如 果 样 品 浑 浊 需 要 离 心 或 用 玻 璃 纤 维 滤 纸 过 滤 后 在 处 理 测 定 。 此 方 法 为 孔 雀 石 绿 及 结 晶 紫 的 总 量 。免 疫 测 定 过 程 (注 意 : 标 准 及 样 品 最 好 做 平 行 试 验 以 增 加 准 确 度 )1. 将 所 有 试 剂 及 样 品 回 升 至 室 温 20-280C， 但 不 要 放 置 超 过 24 小 时 。2. 从 铝 箔 袋 中 拿 出 要 求 数 量 的 微 孔 条 ， 放 入 干 燥 剂 并 重 新 封 好 袋 子 以 免 微 孔 条 受 潮3. 吸 取 100ul 标 准 、 样 品
14、到 对 应 微 孔 中 ， 必 须 保 证 每 种 溶 液 使 用 干 净 的 吸 头 吸 取 ， 避 免 交 叉 污 染 。 4. 加 入 100ul 抗 体 溶 液 到 每 个 小 孔 中 。5. 混 合 30 秒 ， 20-28 摄 氏 度 下 孵 育 30 分 钟 。6. 将 微 孔 中 的 溶 液 倒 入 水 槽 中 ， 用 蒸 馏 水 完 全 充 满 微 孔 ， 震 荡 后 倒 掉 ， 重 复 三 次 ， 总 共 四 次 洗 板 。7. 吸 取 200ul 稀 释 好 的 酶 标 记 物 到 微 孔 板 的 每 个 孔 中 。8. 20-28 摄 氏 度 下 ， 孵 育 30 分
15、钟 。9. 孵 育 完 后 ， 将 微 孔 中 的 溶 液 倒 入 水 槽 中 ， 用 蒸 馏 水 完 全 充 满 微 孔 ， 震 荡 后 倒 掉 ， 重 复 三 次 ， 总 共 四 次 洗 板 。10. 在 吸 水 纸 上 拍 打 ， 尽 可 能 将 水 拍 干 。11. 每 个 微 孔 中 加 入 100ul 底 物 溶 液 。12. 20-28 摄 氏 度 下 ， 孵 育 30 分 钟 。13. 每 个 微 孔 中 加 入 100ul 停 止 液 。14. 450nm 下 读 板 。结 果 分 析1. 半 定 量 的 结 果 是 由 样 品 的 吸 光 率 与 标 准 的 吸 光 率 的
16、 简 单 对 比 而 来 判 定 :样 品 的 颜 色 比 标 准 的 颜 色 浅 则 孔 雀 石 绿 的 浓度 比 标 准 样 的 浓 度 高 , 样 品 的 颜 色 比 标 准 的 颜 色 深 则 孔 雀 石 绿 的 浓 度 比 标 准 样 的 浓 度 低 。2. 定 量 分 析 需 要 绘 制 以 标 准 样 的 吸 光 率 为 X 轴 ,以 标 准 样 的 浓 度 的 半 对 数 为 Y 轴 的 曲 线 图 .依 据 标 准 样 吸 光 率 的 点 画成 一 直 线 ,如 此 样 品 的 光 吸 收 率 可 在 线 上 找 到 ,与 此 相 对 应 的 Y 轴 则 为 样 品 的 浓 度 ,样 品 光 吸 收 率 范 围 应 比 标 准 样 的最 低 范 围 高 ,比 最 高 范 围 低 , 即 可 说 明 此 样 品 中 孔 雀 石 绿 的 含 量 小 于 0.005ppb 或 大 于 0.405ppb。
