1、 DNA 提取步骤 抗凝（20ml 血+3.5mlACD ）-70 保存5ml 冻存血液，室温水浴中融化 +等体积 PBS（5 ml ），来回颠倒混匀 （约 50 次） 天平平衡，室温，3500g, 离心 15min弃上清，沉淀+4ml 抽提缓液，混匀（轻轻），以充分溶解沉淀 （20ml 血+15 ml 抽提缓冲液） 37温育 1 小时（泡多的 DNA 多） 加蛋白酶 K 至终浓度达 100g/ml（血液），充分混匀（50 次） (可多加 5-15ml) 蛋白酶 K20mg/ml 20g/l（ml 血液可加入 30 l 或 35l ) 5ml-500g 500/20=25l将裂解细胞的悬液置于
2、 50水浴 3 小时，不时旋转混匀冷却至室温+ 等体积盐饱和酚(5ml)，来回颠倒混匀 （约 50 次） 天平平衡，室温，5000g, 离心 15min用大口径移液管（出口径为 0.3cm）将粘稠的水相移至一洁净离心管中+1/2 体积饱和酚 +1/2 体积氯仿，混匀（50 次） （注意：不要将絮状沉淀吸入，不要将下层血液吸入） 天平平衡，室温， 5000g, 离心 15min 用移液管将水相移至一洁净离心管中体积氯仿，混匀天平平衡，室温， 5000g, 离心 15min 用移液管将水相移至一洁净离心管中0.1V 3M 乙酸钠V 异丙醇稍混匀，小心别粘在盖子上，用枪头小心挑起丝状物至一干净离管 天平平衡，室温， 5000g, 离心 5min沉淀用乙醇洗两次，收集 DNA（多洗几次，把 DNA 放在壁上，用枪头吸干乙醇洗次，无须离心） 晾干乙醇0-50l TE 液 100l TE 液（溶解 DNA） 摇床 12-24 小时，直至 DNA 完全溶解，如隔几天使用，无须摇床，DNA 也能完全溶解测定 DNA 样品在 260nm 和 280nm 处的光吸收值，计算 DNA 纯度和浓度DNA 于下保存
