1、电 泳 Electrophoresis 一、定义电泳带电粒子在直流电场中向着电性相反电极移动的现象。电泳分析技术利用电泳现象进行物质分离的技术。二、电泳分析技术发展概况三、电泳分析技术的分类1.根据被分离样品的量多少分析电泳制备电泳2.根据电泳电压的高低常压电泳 0500 V高压电泳 5003000V3.根据电泳中是否使用支持物自由电泳不使用支持物,在溶液中进行。区带电泳使用支持物(1) 按支持物的物理性状不同,可分为滤纸及其他纤维薄膜电泳,如醋酸纤维素、玻璃纤维、聚氯乙烯纤维粉末电泳,如纤维素粉、淀粉、玻璃粉电泳凝胶电泳,如琼脂、琼脂糖、硅胶、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳丝状电泳,如尼龙丝、人
2、造丝电泳 (2)按支持物的装置形式不同,可分为 平板式电泳 垂直板式电泳 垂直柱式电泳4.根据电泳系统pH是否连续 连续 pH电泳 指电泳过程中pH保持不变,如滤纸电泳、醋纤膜电泳 不连续 pH电泳 指电极缓冲液和电泳支持物的不同区段也有不同的pH,如 PAGE、IFE优点是在不同 pH区之间形成高的电位梯度区,使蛋白质移动加速压缩为一极狭的区带而达到浓缩的目的。四、电泳的基本原理 一个质点,如能解离或能吸附带电质点,在电场中便会向正极或负极移动。 以蛋白分子为例:F= EQ (Q:有效电荷,E:电位梯度)F=6rv(F:摩擦阻力,v:在介质粘度中半径为r的颗粒的移动速度)F=FEQ=6rv迁
3、移率(Mobility)带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度。V QM=-= - E 6r五、影响电泳速度的因素1.电场强度(E)E电流热效应支持介质上的水分蒸发样品的热变性E电泳速度慢延长电泳时间样品扩散区带模糊不清分辨率下降2.离子强度(I)溶液的I越高,质点的泳动速度越慢,但区带分离度却较清晰。I缓冲能力越大缓冲液所载的分电流增加,而样品所载的电流相应减少电泳速度减慢3.缓冲液的pHpH值决定了化合物解离的程度,也决定了质点所带的净电荷。正极:2OH-H2O + 1/2 O2 +2e pH负极:2H+ + 2e H2 pH4.电渗指在电场作用下对于固体支持物的相对移动。5.分子筛在凝胶电泳
4、中,分离蛋白质等物质除了利用所带电荷的差异的效应外,还利用了其分子上的不同及形状不同。醋 酸 纤 维 薄 膜 电 泳Cellulose acetate membrane electrophoresis,CAME一、醋酸纤维素 是纤维的醋酸酯,由纤维素的羟基进行乙酰化后制得,将它溶于有机溶剂涂抹成均匀的薄膜,待有机溶剂挥发后,即为白色不透明的醋酸纤维薄膜。厚度:0.15mm 二、特点1.吸附作用小2.电渗作用小3. 需加样量少4. 吸水性差三、影响醋纤电泳结果的因素1. 电泳图谱不齐2. 电泳图谱分离不清3. 电泳速度慢4. 白蛋白区带中间部分不着色,染色不足6.薄膜不能完全透明小 结1.掌握电泳的基本原理及影响电泳迁移率的因素2.掌握CAME的原理及操作方法思 考 题 名词解释1.迁移率2.电渗3.电泳 问答题1.血清蛋白电泳的基本原理是什么?2.影响电泳迁移率的因素有哪些?3.CAME分离血清蛋白电泳时应注意哪些问题?