1、18 遗传疾病的诊断Diagnosis of Genetic Disease,第十八章 遗传疾病的诊断,遗传病诊断是一项复杂、需要多学科密切配合的工作。 遗传病诊断包括常规诊断、特殊诊断 临床上遗传病诊断包括 临症诊断 症状前诊断 出生前诊断 植入前诊断,第一节 临症诊断,临症诊断：（symptomatic diagnosis）根据患者的各种临床表现进行分析，确诊并判断遗传方式，是遗传病诊断的主要内容。 一、病史、症状和体征 二、家系分析 三、细胞遗传学检查 四、生化检查,一、病史、症状和体征,一、病史、症状和体征（一）病史采集家族史 婚姻史 生育史（二）症状与体症 二、家系分析,三 细胞遗传
2、学检查,染色体检查的指征： 明显的生长发育异常、多发畸形、智力低下者 多发性流产和不育的夫妇 性腺及外生殖器发育异常者 原发闭经者 高龄孕妇 已经生有染色体异常患儿的夫妇 身材高大，性情粗暴的男性 恶性血液病患者 长期接受X射线、电离辐射的人员,三 细胞遗传学检查,染色体原位杂交：应用标记的DNA片段与玻片标本上的细胞、染色体，以及间期的DNA或RNA杂交，研究核酸片段的位置、相互关系的技术。 荧光原位杂交(Fish)：用生物素、地高辛等标记探针，原位杂交后，用荧光染料标记的生物素亲和蛋白、抗亲和蛋白的抗体进行免疫检测和杂交信号放大，使探针杂交的区域发出荧光。,四、生化检查,生化检查：是遗传病
3、诊断的重要辅助手段，主要是对由于基因突变所引起的酶和蛋白质的定量和定性分析，对单基因病和先天性代谢病进行诊断，包括一般的临床生化检验和针对遗传病的特异检查,第二节 出生前诊断,出生前诊断（产前诊断）：采用羊膜穿刺或绒毛取样等技术，对羊水、羊水细胞和绒毛进行遗传学检验，对胎儿的染色体、基因进行分析诊断，是预防遗传病患儿出生的有效手段。,一、产前诊断的对象,夫妇之一有染色体畸变，特别是平衡易位携带者，或者夫妇染色体正常，但出生过染色体异常的患儿的夫妇 35岁以上的高龄孕妇 夫妇之一有开放性神经管畸形，或出生过这种畸形患儿的夫妇,一、产前诊断的对象,夫妇之一有先天性代谢缺陷，或出生过这种患儿的夫妇
4、X连锁遗传病基因携带者孕妇 原因不明的习惯性流产的孕妇； 羊水过多的孕妇； 夫妇之一有致畸因素接触史的孕妇； 具有遗传病家族史，又系近亲婚配的孕妇。,二、出生前诊断方法,B超 羊膜穿刺法,二、出生前诊断方法,绒毛取样法,二、出生前诊断方法,脐带穿刺 胎儿镜检查 孕妇外周血胎儿细胞富集 植入前诊断,第三节 基因诊断,分子诊断（基因诊断）：利用分子生物学技术，检测患者体内遗传物质（DNA或RNA）的结构或表达水平的变化，从而作出临床诊断的技术。,一、基因诊断的主要技术方法,（一）核酸分子杂交 1斑点印迹杂交 2原位杂交 3PCR-ASO 4基因芯片技术 （二）其它常用的技术 （1）PCR-RFLP
5、 （2） PCR-SSCP （3）RT-PCR （4） Western印迹技术,核酸杂交,DNA变性：DNA分子由双螺旋结构变为单链的现象 DNA复性：变性的两条单链恢复双螺旋结构的现象,可发生在同源双链间，也可发生在非同源两条链间 核酸分子杂交：应用核酸分子的变性和复性的性质，使来源不同的DNA(或RNA)片段，严格按照碱基互补配对原则，在一定条件下形成杂交双链分子,聚合酶链反应,PCR-ASO,基因探针（probe）：一段与目的基因或DNA片段互补的特异的单链核苷酸序列 ASO：等位基因特异性寡核苷酸正常探针：一种与正常基因序列完全一致，能与 之稳定杂交；异常探针：另一种与异常序列完全一致
6、，能与突变序列稳定杂交,ASO探针斑点杂交,临床遗传学,基因芯片技术,限制性核酸内切酶,简称限制酶或内切酶，能特异地识别和切割特异的核苷酸序列限制酶能识别和切割通常为46个核苷酸回文序列，限制性位点或切点切割方式： 交错切割 产生粘性末端水平切割 产生平齐末端,RFLP（限制性片段长度多态性）,由于DNA序列的差异，造成了内切酶位点的变化，或是新的酶切位点的产生；或是原酶切位点的消失等，酶切后，所产生的片段长度发生变化。,VNTR，STR：第二代多态标记,在人类基因组中还存在一类DNA重复序列，称为小卫星DNA。每一个单位通常只有1628bp长，但其重复次数在人群中是高度变异的。当用限制酶切割
7、VNTR区时，只要酶切位点不在重复区内，就可能得到各种长度不同的片段。限制性片段大小的差异取决于两个酶切位点之间的串联重复单位数目的不同。,临床遗传学,PCR-RFLP,是将聚合酶链反应与RFLP方法结合的一种检测技术。 该方法包括：PCR、酶切、电泳,PCR-SSCP,二、分子诊断技术的应用,（一）基因诊断在遗传病中的应用1镰状细胞贫血的基因诊断镰状细胞贫血 链基因第六位密码子GAG突变为GUG，导致Mst切点CCTGAGG为CCTGTGG酶切片段由1.15kb、0.2kb两条变为1.35kb一条,二、分子诊断技术的应用,（一）基因诊断在遗传病中的应用2血友病A的基因诊断 地中海贫血的基因诊断,二、分子诊断技术的应用,（二）基因诊断在肿瘤中的应用ras基因突变的检测 PCR-ASO PCR-RFLP,基因诊断的策略 直接检测：直接检测致病基因本身的异常，适用于基因突变已知的疾病 间接检测（多态性连锁分析）：应用连锁分析进行诊断，适用于基因已知，但其突变未知或致病基因未知的遗传病,
