1、微生物检验用器皿的准备 SOP1、目的：明确微生物检验用器皿准备的标准操作规程2、范围：微生物检验用各种器材、稀释剂3、职责：质量检验室主任、微生物限度检查员对该文件的实施负责。4、规程：4.1、灭菌器材的准备工作 4.1.1、灭菌器材的包装：平皿分 10 个作一个包装包好，各种试管用合适的塞子按需要包好；吸管上塞进少许棉花， ；松紧适度以防污染，然后按其容量大小分别包好；三角瓶量筒用合适的塞子塞好，分别包好；4.1.2、稀释剂的配制：生理盐水，取氯化钠 9 克加蒸馏水 1000ml 溶解，分装后包扎好。4.2、灭菌4.2.1、将包装好的待灭菌器材、稀释剂置 121 高压灭菌 30 分钟4.2
2、.2、高压灭菌应严格按操作规程进行，必须逐渐加热，彻底排除灭菌器内的冷空气，使灭菌物品同灭菌器的温度一致，逐渐升压保持预定的压力和时间后令其自然降压4.3、玻璃器皿应按玻璃器皿洗涤干燥规程准备好微生物检验用培养基的准备 SOP1、目的：明确微生物检验用培养准备的标准操作规程。2、范围：微生物检查用各种培养基。3、职责：质量检验室主任、微生物限度检查员对该文件的实施负责。4、规程：4.1、培养基制备前的准备工作：4.1.1、制备培养基所用的玻璃器皿如：吸管、试管、三角瓶等必须按玻璃器皿的洗涤干燥规程准备好。4.1.2、对新购进的培养基初次使用前必须进行质量检查，并做好记录。内容包括：名称、配制日
3、期、接种菌名称、接种菌培养基培养结果、结论、检验日期、检验者。4.2、培养基的制备：4.2.1、营养琼脂培养基：用于细菌总数的测定。称取营养琼脂 35g 倒入三角瓶中，加入 1L 纯化水，加热溶解、分装，包装好后置121高压灭菌 30 分钟，室温下冷却至 45(pH 应为 7.20.2 范围内)，倾注于平板上或放于冰箱内保存。4.2.2、虎红琼脂培养基：用于霉菌数测定。称取虎红琼脂 29g，倒入三角瓶中，加入 1L 纯化水，加热、溶解、分装，包装好后置于 115高压灭菌 30 分钟，室温下冷却至 45，倾注平板或放入冰箱内备用。4.2.3、胆盐乳糖增菌液：用于大肠杆菌增菌培养。称取胆盐乳糖增菌
4、液琼脂 36g，倒入三角瓶中，加 1L 蒸馏水，加热溶解后分装，每瓶 100ml，于 121高压灭菌 30 分钟，冷却至 45(pH7.2-7.4)，供检验用或放入冰箱中备用。4.2.4、伊红美兰琼脂：用于大肠杆菌的检测。称取伊红美兰琼脂 42g，倒入三角瓶中，加入 1L 蒸馏水，加热溶解，分装。包装好后于 116高压灭菌 20 分钟，冷却至 45(pH7.2-7.4)，注皿或置冰箱内备用。4.3、培养基的质量检验4.3.1、无菌检查：配制好的培养基应澄清无沉淀，pH 符合要求。将已做好的平板，按其培养要求，营养琼脂 30-35培养 48 小时，虎红琼脂 25-28培养 72 小时，应无菌落生
5、长，否则培养基不能使用。4.3.2、灵敏度试验：将已做好的培养基，用规定的已知菌做生长试验，以评价培养基的灵敏度，不合格者不能用。将做好的伊红美兰平板，用大肠杆菌标准株划线，置 36培养 24 小时后，大肠杆菌应生长良好。将 1ml 含 50 个以下的白色念株菌接种于霉菌培养基里，置 20-25培养 24 小时后，应生长良好。4.4、培养基的保存4.4.1、环境条件：各种培养基应置于洁净冰箱内保存，5左右为宜，不得冻结，否则，融化后常因理化性质改变而不能使用。4.4.2、保存时间:配置好的培养基要当日用完。4.5、管理：4.5.1、贮存培养基的冰箱内不得存放食品、饮料等无关物品。4.5.2、实
6、验人员每周及临用前应检查培养基的外观，如：失水、沉淀、过期、棉塞松动或脱落等异常情况，发现问题及时处理或终止使用。4.5.3、已染菌的培养基废弃前须经高压灭菌（121、30 分钟）微生物限度的检查 SOP1、目的：明确微生物限度检查的标准操作规程，以保障产品质量得到有效的控制。2、范围：成品、半成品。3、职责：质量检验室主任、微生物限度检查员对该文件的实施负责。4、规程：4.1、总则：4.1.1、 供试品在检查前不得开启，检查前和检查中应防止供试中的污染受损、致死或繁殖。4.1.2、 检查全过程均应严格遵守无菌操作规程，严防再污染。4.1.3、染菌量的检查或控制菌的检查均应做空白对照试验。4.
7、1.4、 供试品稀释成稀释液后应在均匀状态下取样，凡有抑菌成份或防腐剂的供试品应做特殊处理后进行检验。4.1.5、供试品稀释后应在 1 小时内操作完毕。4.1.6、 细菌、霉菌和酵母菌、大肠菌落检验结果的报告以 g、ml 为单位的菌落数表示。大肠埃希菌检验报告以 g 或 ml 为单位报告“检出”或“未检出” 。4.2、检查法：4.2.1、细菌、霉菌的染菌量，采用培养皿菌落计数法。4.2.1.1、供试液的制备： 固体供试品以无菌操作称取 10g，置含 0.9%氯化钠的生理盐水100ml 中，振摇溶解，使成 1:10 稀释度的供试液。然后依次稀释成1:10、1:100、1:1000 的供试液。4.
8、2.1.2、吸样：分别吸取 1:10、1:100、1:1000 的供试液分别注入 2-3 个平皿中。4.2.1.3、注皿：事先将细菌培养基融化，置于 45水浴中备用。当供试液注入平皿后，用培养基倾注入平皿，每皿约 15ml，随即转动平面，使供试液与培养基混匀后置水平台上待凝。4.2.1.4、培养：将平皿倒置于培养箱中培养。细菌培养 30-35、48 小时；霉菌培养 25-28、72 小时。4.2.1.5、菌落计数法：细菌先用肉眼观察，点数菌量（霉菌除外） ，然后持 5-10 倍放大镜检查有无遗漏。 如有片状菌落或花斑样菌落蔓延生长的以及平板受到污染的情况，则该平板计数无效。若平板上有 2 个或
9、者个以上的菌落重叠，如可分辩，仍以 2 个或是个以上菌落计数。当一个稀释级用 2 个平板时，应采用 2 个平板菌落数的均值为平均平板菌落数。若 2 个平板菌落数相差 1 倍以上时，该当稀释级不宜采用（不包括 2 个平板菌落数均在 15 个以下的情况）点计后，计算各稀释级的平均平板菌落数按菌数报告规则报告。4.2.2、控制菌的检查：4.2.2.1、检查步骤：按增菌、分离、纯化培养、革兰氏镜检检与生化鉴别等项试验进行。4.2.2.2、大肠杆菌检查法： 取供试液 10ml(供试品 1g、1ml)于 100ml 胆盐乳糖，增菌培养液内，置 361、18-24 小时培养，如增菌注呈现混浊、表面可见或未见
10、气泡都表明有菌生长，如混浊不明显，可延长培养时间至 48 小时。取其增菌培养物划线，接种于伊红美兰琼脂培养皿中，置 361、18-24 小时培养，如无菌落生长，可判为：未检出大肠杆菌。若有菌生长或疑似者，应挑选 2-3 个菌落，继续做染色镜检和乳糖发酵试验。4.3、细菌检查：4.3.1、细菌菌落形态：细菌菌落是一个菌细胞或菌细胞团在局限位置上，经一定条件下繁殖成肉眼可见的细菌群体，外观湿润或干燥，表面光滑或折皱，外缘整齐或缺陷。4.3.2、霉菌菌落形态：具有放射或树枝样分枝的菌丝是霉菌菌落的特征。初形成时多无色透明，成熟的霉菌菌落有各种颜色的孢子形成。4.3.3、大肠杆菌菌落形态： 4.3.3
11、.1、在 EBM 琼脂平板上的典型菌落呈紫黑色或中心深紫色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，带有金属光泽。4.3.3.2、非典型形态，在 EBM 琼脂平板上呈浅紫、粉紫、粉色，无明显的暗色中心，应做为疑似菌进行鉴定。4.4、对照试验4.4.1、阴性对照试验：检验试验全过程无菌技术的可靠性。4.4.1.1、菌数测定阴性对照试验：分别吸取生理盐水 1ml 置于无菌平皿中，分别按细菌、霉菌测定方法注皿、培养，不得长菌。4.4.1.2、控制菌检查阴性对照试验：吸取生理盐水 1ml 于增菌液中，按控制菌检查方法检查不得长菌。4.4.2、阳性对照试验：检查供试品是否对控制菌生长产生干扰作用及检查培养条件
12、是否适宜。4.4.2.1、方法：于供试液中加入一定量的相应对照菌，做平行试验。4.4.2.2、规定阳性对照菌株为大肠杆菌CMCC（B）44102。对照菌的加入量为 50-100 个，可事先预试确定。4.4.2.3、用计数方法，取 37培养 8-20 小时的新鲜肉汤培养物 10 倍递增稀释至 10-6,取其 0.1ml 于普通肉汤琼脂板表面涂抹或取 10-7稀释液 1ml 以少于皿法进行测定。4.4.2.4、当供试品未检出菌时，而阳性对照试验也未能检出，则不能做出供试品未检出控制菌的结论。4.4.2.5、阳性对照试验操作必须与供试品检验操作严格分开，避免交叉污染。4.5、复试4.5.1 菌数测定
13、不合格者应复试，控制菌检验以一次检验为准，不再复试，但应保留检出菌株一个月备查。4.5.2、复试项目以不合格项目为准，做单项复试。4.5.3、复试需取同批样品测定 2 次。4.5.4、复试报告以 3 次测定结果的算术增均值报告。4.6、检验报告4.6.1、测定菌数报告：以各次测定结果的全部平均值报告。4.6.2、控制菌按全部复试检验结果报告：如全部复试均未检出控制菌时，报告为“按规定抽样检验未检出菌”如全部抽样中任一样品检出控制菌时，报告为“按规定抽样检验，检出菌，不符合药品微生物限度规定” 。微生物室清洁、消毒 SOP1、目的：制订本标准的目的是建立无菌室清洁消毒程序，防止样品被环境中的微生
14、物污染，影响检测结果的准确性。2、范围：本标准适用于微生物室的清洁消毒。3、职责：质量检验室主任、微生物限度检查员对该文件实施负责。4、规程：4.1、清洁部位：超净工作台、墙面、地面、顶棚、门窗及玻璃、把手、进风口、回风口、地漏、公用具、容器具等。4.2、清洁频度：无菌操作前、无菌操作后；每星期最后一个工作日。4.3、清洁工具：水桶；不脱落纤维的拖把、毛刷、清洁巾；橡胶手套等。4.4、清洁剂：4.4.1、洗涤剂：取液体洗涤剂加去纯化水配成适宜浓度，摇匀即可。4.4.2、消毒剂（每月轮换使用）：4.4.2.1、5%甲酚皂溶液：取甲酚皂液加纯化水适量配成 5%溶液后，摇匀即可。4.2.2.2、0.
15、1%新洁尔灭溶液：取 5%新洁尔灭液适量加纯化水配制成 0.1%溶液，摇匀即可。4.2.2.3、75%酒精：取 95%乙醇加纯化水适量稀释成 75%溶液，摇匀即可。4.5、清洁方法：4.5.1、无菌操作前的清洁消毒：无菌操作前对无菌室内各种表面、空气进行清洁或消毒。4.5.1.1、层流净化台：用湿抹布擦拭后，用消毒剂擦拭消毒。4.5.1.2、桌面：用湿抹布擦拭后，用消毒剂擦拭消毒。4.5.1.3、地面：用清洁剂溶液擦拭后，用消毒剂擦拭消毒。4.5.1.4、空气消毒：无菌室清洁、消毒后，打开层流净化台使其开始运转，开启无菌室及层流净化台紫外灯，照射消毒 30 分钟。关闭紫外灯后，方可进行无菌操作
16、。4.5.2、无菌室操作结束后的清洁、消毒：4.5.2.1、 整理工作台面：将使用过的器具放入盛有消毒剂（5%甲酚早溶液或 0.1%新洁尔灭溶液）的玻璃缸内浸泡 12 小时后取出，清洗；收集各种废弃物，经消毒或灭菌后处理。 4.5.2.2、先后分别用清洁剂、消毒剂擦拭台面、桌面、地面。4.5.2.3、所有废弃的活菌培养物以及盛有或均培养物的器皿，均应放入蒸汽灭菌锅内，高压灭菌。4.5.3、空气消毒：无菌室清洁、消毒后，开启无菌室及层流净化台紫外灯，照射消毒 30分钟。4.6、每星期工作结束后的清洁、消毒：4.6.1、先后用清洁剂、饮用水、消毒剂擦拭室内各种表面，包括：层流净化台、桌面、台面、用
17、具、容器； 所有门窗、墙壁、顶棚、地漏、回风口、进风口、灯具、地面；柜子、培养箱、冰箱、水池等。4.6.2、开启紫外灯照射 3060 分钟。4.6.3、清洁工具的清洗及存放：将清洁工具用洗涤剂清洗干净，并用消毒剂消毒后，置存放间晾干备用。4.7、清洁效果评价： 肉眼检查，各种表面应光洁，无可见异物或污垢。4.8、超过规定标准时的处理程序：4.8.1、若层流净化台检测结果超过规定标准，应用尘埃粒子计数器找出其高效过滤器的泄漏点并修补，必要时更换高效过滤器或调整风速。4.8.2、若无菌室空调高效过滤器测试结果超过规定标准，应用 75%酒精或 0.5%甲醛消毒，检测，修补，必要时更换 。4.8.3、
18、 其它测试结果超过规定标准时，应立即更换消毒剂，消毒后再进行测试，或测试空调高效过滤器的性能。纯化水在线检测 SOP1、目的：明确纯化水理化检测的理化操作规程。2、范围：纯化水制备在线检测。3、职责：纯化水制备岗位操作工、质量检验人员对该文件的实施负责。4、规程：4.1、检验依据：中国药典（2005 年版二部） 。4.2、性状：为无色的澄明液体，无臭、无味。4.3、检验项目：4.3.1、酸碱度：4.3.1.1、试液：甲基红指示液：取甲基红 0.1g 加氢氧化钠液(0.05mol/L) 7.4ml，使溶解，再加水稀释至 200ml，即得。4.3.1.2、仪器：具塞试管4.3.1.3、操作方法：取
19、具塞玻璃试管支，各加入 10ml 本品，向一支试管中加入甲基红指示液 1 滴，摇匀，不得显红色。 甲基红色范围 pH4.2-6.3（红黄） 向另一支试管加入溴麝香草酚蓝指示液 5 滴，不得显蓝色溴麝香草酚蓝变色范围 pH6.0-7.6（黄兰） 。4.3.2、氯化物、硫酸盐与钙盐：4.3.2.1、试剂与试液：硝酸银试剂：取硝酸银 17.5g 加水适量使溶解成 1000ml，摇匀。 氯化钡试剂：称取氯化钡的细粉 5g 置 100ml 量筒中，加适量水搅拌使溶解，最后用水加至刻度，摇匀。 草酸铵试液：取草酸铵 3.5g 加水溶解成 1000ml，摇匀。4.3.2.2、仪器： 纳氏比色管及管架、滴管、吸管(1-2ml)、烧杯。4.3.2.3、操作方法用原理：取检品分置三支纳氏比色管中，每管各加 50ml，第一管中加硝酸 5 滴，硝酸银试液 1ml，第二管中，加氯化钡试液 2ml，第三管中加草酸铵试液 2ml 均不得发生浑浊。原理：氯化物与硝酸银在酸性条件下生成氧化银白色沉淀。硝酸盐与氯化钡生成硝酸钡白色沉淀。钙盐能与草酸铵形成草酸钙白色沉淀。4.4、注意事项：4.4.1、接取样品的容器用样品冲三遍，方可接取样品。4.4.2、接取前放 10 分钟-15 分钟方可取样，否则影响检测结果。
