1、,第五节 砷盐检查法,第六章,2,一、概述 砷盐检查法系指用于药品中微量砷盐(以As计算)的限量检查方法。,第六章,3,因近年来由于药材种植受除草剂、杀虫剂和磷酸盐肥料等的影响,中药制剂的原药材中残存有三价砷。砷是原生质毒,能与细胞酶系统的巯基(-SH)相结合,而抑制含巯基酶的活性,影响细胞的正常代谢,导致细胞死亡,并引起一系列严重的中毒症,如血小板减少,扩张毛细血管,麻痹血管舒缩中枢,使腹腔脏器严重充血,引起肝、肾、心等实质器官的损害以及致癌、致畸、致突变。目前东南亚国家和地区对口服中药砷含量有限量要求,一般要求低于5g/g。故中国药典2005年版规定了某些中药制剂的砷盐限量要求,如阿胶的砷
2、盐含量不得过百万分之三,黄连上清丸的砷盐含量不得过百万分之二。,第六章,4,二、测定方法 中国药典2005年版（一部）收载了两种砷盐检查法: 第一法(古蔡氏法) 第二法(二乙基二硫代氨基甲酸银法),第六章,5,制备标准砷溶液:称取三氧化二砷0.132g,置1000ml量瓶中,加20%NaOH溶液5ml溶解后,用适量的稀硫酸中和,再加稀硫酸10ml,用水稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。临用前,精密量取贮备液10ml,置lOOOml量瓶中,加稀硫酸10ml,用水稀释至刻度,摇匀,即得(每lml相当于1g的As)。,第六章,6,(一) 第一法(古蔡氏法),1.概述,初生态的氢,测定原理：本法系采用锌和
3、酸作用所产生的初生态氢与供试品中微量砷盐化合物反应生成挥发性砷化氢,再与溴化汞试纸作用生成黄色至棕色砷斑。比较供试品与标准砷溶液在同一条件下所显的砷斑的颜色深浅,以测得供试品的含砷量是否超限。,第六章,7, AsO33-+3Zn+9H+AsH3+3Zn2+3H AsH3+2HgBr22HBr+AsH(HgBr)2(黄色）（溴化汞试纸） AsH3+3HgBr23HBr+As(HgBr)3 (棕色),初生态的氢,第六章,8,五价砷在酸性溶液中也能被金属锌还原为砷化氢,但生成砷化氢比三价砷慢。三价砷生成砷化氢在2h内已反应完全,而五价砷在同时间内仅2/10起反应。为了防止五价砷存在,影响测定结果的准
4、确性,故必须加入碘化钾、酸性氯化亚锡还原剂,将五价砷还原为三价砷。碘化钾被氧化生成I2,以氯化亚锡来还原,使反应液中维持有碘化钾的还原剂存在。,第六章,9,As(V)反应慢，须将As(V)还原成As(III)1、 AsO43-+2I-+2H+ AsO33-+I2+H2O 2、 AsO43-+Sn2+2H+AsO33-+Sn4+H2O3、 I2+Sn2+2I-+ Sn4+,第六章,10,溶液中的碘离子,与反应中产生的锌离子能形成配合物,使生成砷化氢的反应不断进行。 4、4I-+Zn2+ZnI42-,促进反应向右进行,第六章,11,5、氯化亚锡与碘化钾存在,还可抑制锑化氢生成,在试验条件下,100
5、g锑存在不至于干扰测定。同时氯化亚锡的作用可在锌粒表面形成锌锡齐(锌锡的合金)起去极化作用,使锌粒与盐酸作用缓和,放出氢气均匀,使产生的砷化氢气体一致,有利于砷斑的形成,增加反应的灵敏度和准确度。,形成锌锡齐，有利于反应平稳的进行,6、 Sn2+ZnSn+Zn2+,第六章,12,古蔡氏法检查砷装置(见图)、分析天平(0.0001g感量)、架盘天平(0.lg感量)、恒温水浴锅、马福炉、坩锅、干燥器、变色硅胶(干燥剂)、量瓶（100ml、100Oml）、量筒(10ml)、定量滤纸。 盐酸、碘化钾、锌粒、稀硫酸、20%氢氧化钠溶液、酸性氯化亚锡试液、溴化汞试纸、醋酸铅棉花。,第六章,13,3.操作方
6、法 (1)仪器装置。见下图。A为100ml标准磨口锥形瓶；B为中空的标准磨口塞,上连导气管C（外径8.Omm,内径0.6mm）,全长约180mm； D为具孔的有机玻璃旋塞,其上部为圆形平面,中央有一圆孔,孔径与导气管C的内径一致,其下部孔径与导气管C的外径相适应,将导气管C的顶瑞套入旋塞下部孔内,并使管壁与旋塞的圆孔适相吻合,黏合固定；E为中央具有圆孔（孔径6.Omm）的有机玻璃旋塞盖,与D紧密吻合。测试时,于导气管C中装入醋酸铅棉花60mg（装管高度为6080mm）,再于旋塞D的顶端平面上放一片溴化汞试纸（试纸大小以能覆盖孔径而不露出平面外为宜）,盖上旋塞E并旋紧,即得。,第六章,14,古蔡
7、氏法检查砷装置A: 100ml标准磨口锥形瓶B: 中空的标准磨口塞C: 导气管(外径8.0mm，内6.0mm)， 全长约180mmD/E :具孔（孔径 6.0mm）的有机 玻璃旋塞,HgBr2试纸,醋酸铅棉60mg (装管高度6-8cm),第六章,15,(2)标准砷斑的制备。精密量取标准砷溶液2ml,置A瓶中,加盐酸5ml与水21ml,再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴,在室温放置1Omin后,加锌粒2g,立即将照上法装妥的导气管C密塞于A瓶上,并将A瓶置2540水浴中,反应45min,取出溴化汞试纸,即得。 若供试品需经有机破坏再行检砷,则应取标准砷溶液代替供试品，照各品种项下规定的
8、方法同法处理后，依法制备标准砷斑。,第六章,16,（3）检查法。取按各药品项下规定方法制成的供试品溶液,置A瓶中,加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴,在室温放置10min后,加锌粒2g,立即将照前法装妥的导气管C密塞于A瓶上,并将A瓶置2540水浴中,反应45min,取出溴化汞试纸。将 生成的砷斑与标准砷斑比较, 不得更深。,第六章,17,4.记录供试品生成的砷斑颜色与标准砷斑的颜色。5.结果判断供试品生成的砷斑颜色比标准砷斑颜色浅或接近,则砷盐限量检查符合规定,若供试品生成的砷斑颜色比标准砷斑颜色深,则砷盐限量检查不符合规定。,第六章,18,(二)第二法(二乙基二硫代氨基甲酸银法 Ag
9、-DDC法) 1.测定原理利用金属锌与酸作用产生新生态的氢,与药品中的微量亚砷酸盐反应生成具有挥发性的砷化氢,用二乙基二硫代氨基甲酸银溶液吸收,使之还原生成红色胶态银,与同条件下一定量标准砷溶液所产生的红色胶态银进行比较，或在510nm处测吸光度进行比较,以判定砷盐的含量是否超限。,第六章,19,2.仪器与试剂 二乙基二硫代氨基甲酸银法检查砷装置(图5-3)、分析天平(0.0001g感量)、架盘天平(0.1g感量)、分光光度计、比色计、恒温水浴锅、马福炉、坩锅、恒温干燥箱(精确士1)、干燥器、变色硅胶(干燥剂)、量瓶(100ml、100Oml)、量筒(10ml)。 定量滤纸、盐酸、碘化钾、锌粒
10、、稀硫酸、二乙基二硫代氨基甲酸银试液、酸性氯化亚锡试液、氯仿、醋酸铅棉花。,第六章,20,Ag-DDC 5ml,(1)仪器装置。见下图。A为100ml标准磨口锥形瓶；B为中空的标准磨口塞,上连导气管C (一端的外径为8mm，内径为6mm；另一端长18Omm，外径4mm,内径1.6mm,尖端内径为1mm)。D为平底玻璃管(长180mm,内径1Omm,于5.0ml处有一刻度)。 测试时,于导管C中装入醋酸铅棉花60mg(装管高度约80mm),并于D管中精密 加入二乙基二硫代氨基甲酸银试液5ml。,(1)仪器装置。见下图。A为100ml标准磨口锥形瓶；B为中空的标准磨口塞,上连导气管C (一端的外径
11、为8mm，内径为6mm；另一端长18Omm，外径4mm,内径1.6mm,尖端内径为1mm)。D为平底玻璃管(长180mm,内径1Omm,于5.0ml处有一刻度)。 测试时,于导管C中装入醋酸铅棉花60mg(装管高度约80mm),并于D管中精密 加入二乙基二硫代氨基甲酸银试液5ml。,第六章,21,3.测定方法 (1)仪器装置。见图 A为100ml标准磨口锥形瓶； B为中空的标准磨口塞, C导气管 (一端的外径为8mm，内径为6mm；另一端长18Omm，外径4mm,内径1.6mm,尖端内径为1mm); D为平底玻璃管(长180mm,内径1Omm,于5.0ml处有一刻度)。测试时,于导管C中装入醋
12、酸铅棉花60mg(装管高度约80mm), 并于D管中精密加入二乙基二硫代氨基甲酸银试液5ml。,第六章,22,(2)标准砷对照液的制备:精密量取标准砷溶液5ml,置A瓶中,加盐酸5ml与水21ml,再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴,在室温放置10min后,加锌粒2g,立即将导气管C与A瓶密塞,使生成的砷化氢气体导入D管中,并将A瓶置2540水浴中反应45min,取出D管,添加氯仿至刻度,混匀,即得。若供试品需经有机破坏再行检砷,则应取标准砷溶液代替供试品，照各品种项下规定的方法同法处理后，依法制备标准对照液。,第六章,23,(3)检查法。取照各药品项下规定方法制成的供试液,置A瓶中,
13、再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴,在室温放置10min后,加锌粒2g,立即将导气管C与A瓶密塞,使生成的砷化氢气体导人D管中,并将A瓶置2540水浴中反应45min,取出D管,添加氯仿至刻度,混匀。将所得溶液与标准砷对照液同置白色背景上,从D管上方向下观察、比较,所得溶液的颜色不得比标准砷对照液更深。,第六章,24,必要时,可将所得溶液转移至1cm吸收池中,照紫外-可见分光光度法在510nm波长处以二乙基二硫代氨基甲酸银试液作空白,测定吸收度,与标准砷对照液按同法测得的吸收度比较,即得。,第六章,25,4.记录记录供试品溶液的颜色与标准砷对照液的颜色；或供试品溶液与标准砷对照液吸收度
14、数据。5.结果判断供试品溶液的颜色比标准砷对照液浅或接近,则砷盐限量检查符合规定,若供试品溶液的颜色比标准砷对照液深,则砷盐限量检查不符合规定；或供试品溶液的吸收度低于或等于标准砷对照液,则砷盐限量检查符合规定,若供试品溶液的吸收度高于标准砷对照液,则砷盐限量检查不符合规定。,第六章,26,(一)黄连上清丸中的坤盐检查黄连上清丸是由黄连、栀子、连翘、防风、石膏、甘草等17味中药制成的大蜜丸,因其中含有矿物药石膏,故需检查砷盐。中国药典规定选用第一法(古蔡氏法)测定。取本品5丸,切碎,过二号筛,取1.Og,称定质量。加无水氢氧化钙1g,加少量水,搅匀,烘干,用小火缓缓炽灼至炭化,再在500600
15、炽灼至完全灰化(同时作空白,留做标准砷斑用),放冷,转入A瓶中,加盐酸7ml使溶解,再加水21ml,再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴,在室温放置1Omin后,加锌粒2g,立即将已装入醋酸铅棉花的导气管C与已于旋塞D的顶端平面上放上一片溴化汞试纸,盖上旋塞E并旋紧,密塞于A瓶中,并将A瓶置2540水浴中反应45min,取出溴化汞试纸,将生成的砷斑与标准砷斑比较,颜色浅于标准砷斑或相近者,则黄连上清丸砷盐限量检查符合规定(不得过百万分之二),若颜色更深,则砷盐限量检查不符合规定。,第六章,27,(二)阿胶中的砷盐检查阿胶为驴皮经煎煮、浓缩制成的固体胶。生产中使用明矾作沉淀剂,可能会引入重
16、金属,故中国药典规定用第二法(二乙基二硫代氨基甲酸银法)检查砷盐。取本品2.Og,加氢氧化钙1g,混合,加少量水,搅匀、,干燥后先用小火烧灼使炭化,再在500600炽灼至完全灰化,放冷,加盐酸3ml与适量的水使溶解成30ml,分取溶液10ml,加盐酸4ml与水14ml,再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴,在室温放置10min后,加锌粒2g,立即将导气管C与A瓶密塞,使生成的砷化氢气体导人D管中,并将A瓶置2540水浴中反应45min,取出D管,添加氯仿至刻度,混匀。将所得溶液与标准砷对照液同置白色背景上,从D管上方向下观察比较,所得溶液的颜色比标准砷对照液浅或相近,则阿胶砷盐限量检查符
17、合规定(不得过百万分之三),若更深,则砷盐限量检查不符合规定。,第六章,28,（第四节注射剂有关物质检查法,第六章,29,注射剂有关物质系指中药材经提取、纯化制成注射剂后，残留在注射剂中可能含有并需要控制的物质。 除另有规定外，一般还应控制蛋白质、鞣质、树脂等；静脉注射液还应控制草酸盐、钾离子等，其检查方法如下：,第六章,30,一、蛋白质 取注射液1ml，加新配制的30%磺基水杨酸试液1ml，混匀，放置5min，不得出现浑浊。注射液中如含有遇酸能产生沉淀的成分，可改加鞣酸试液13滴，不得出现浑浊。,第六章,31,二、鞣质取注射液1ml，加新配制的含1%鸡蛋清的生理氯化钠5ml（必要时，用微孔滤
18、膜（0.45m），放置10min，不得出现浑浊或沉淀。如出现浑浊或沉淀，取注射液1ml，加稀醋酸1滴，再加氯化钠明胶试液45滴，不得出现浑浊和沉淀。含有聚乙二醇、聚山梨酯等聚氧乙烯基物质的注射液，虽有鞣质也不产生沉淀，对这类注射液应取未加附加剂前的半成品检查。,第六章,32,三、树脂取注射液5ml，加盐酸1滴，放置30min，不得出现沉淀。如出现沉淀，另取注射液5ml，加氯仿10ml振摇提取，分取氯仿液，置水浴上蒸干，残渣加冰醋酸2ml使溶解，置具塞试管中，加水3ml，混匀，放置30min，不得出现沉淀。,第六章,33,四、草酸盐除另有规定外，取溶液型注射液适量，用稀盐酸调节pH值至12，滤过
19、，取滤液2ml，滤液调节pH值至56，加3%氯化钙溶液23滴，放置10min，不得出现浑浊或沉淀。,第六章,34,血中高钾的危害,1.四肢乏力，神志淡漠和感觉异常。 2.皮肤苍白发冷，心跳缓慢或心律不齐，血压低。 3.严重者，出现软瘫，呼吸肌麻痹，心跳骤停。 中药注射剂研制指导原则及有关规定汇编对其钾离子进行了限量控制,规定钾离子应在1.0mg/mL以下,第六章,35,五、钾离子(目视比浊法 ) 取静脉注射液2ml，蒸干，先用 小火炽灼至炭化，再在500600炽灼至完全灰化，加稀醋酸2ml使溶解。置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，作为供试品溶液。,第六章,36,五、钾离子(目视比浊法 )
20、 取10ml纳氏比色管两支，甲管中精密加入标准钾离子溶液0.8ml，加碱性甲醛溶液12滴、3%乙二胺四醋酸二钠溶液2滴、3%四苯硼酸钠溶液0.5ml，加水稀释成10ml，乙管中精密加入供试品溶液1ml，与甲管同时依法操作，摇匀。甲、乙两管同置黑纸上，自上向下透视，乙管中显出的浊度与甲管比较，不得更浓。,第六章,37,标准钾离子溶液的配制 取硫酸钾适量，研细，于110干燥至恒重，精密称取2.330g，置1000ml量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。 临用前，精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于100g的K)。,第六章,38,谢 谢！,
