1、实验一 光合细菌的分离与纯化一、目的要求（一）学习掌握从高浓度有机废水或污泥中采样富集培养、分离、纯化红螺菌科细菌。（二）了解培养兼性光能异养型细菌的培养基和培养方法。二、实验材料菌源：高浓度有机废水污染的污泥培养基：红螺菌科细菌分离和增殖培养基仪器：高压灭菌锅，电子天平，电炉，白炽灯，水样瓶，培养皿等接种分离器具三、实验步骤（一）采样从河底、湖底的污泥以及水田、沟渠、污水塘等经常有含有机残渣的污水进入的地方的泥土中用采泥器或烧杯进行采样。配制培养基（二）红螺菌科细菌分离培养：NH4Cl 0.1g，MgCl 2 0.02g，蒸馏水 90ml，0.1MPa 灭菌 20min，灭菌后再加入酵母膏
2、0.01g，K 2HPO4 0.05g，5ml 5% NaHCO3 和 Na2S9H2O，5ml 4% 丙氯酸，NaCl 0.2g，调 PH=7.0，琼脂 2 g。 富集培养基（生产培养基）：K2HPO4 0.78g CaCl2H2O 0.05g KH2PO4 0.5g(NH4)2SO4 0.05g MgSO47H2O 0.2g CH3COONa 1.65gNaCl 0.5g 硼酸钠 0.38g 钼酸铵 0.22g酵母膏 0.1g 水 1000ml PH 6.7高温煮沸即可。（三）富集培养将采回的样品装入水样瓶，再倒入配制好的培养液，充分搅拌，为造成厌氧环境，在水样瓶中加入液体石蜡以隔绝空气。
3、（四）分离纯化接种以接种分离法或涂布分离法对生产用的光合细菌液在平板上进行分离，放置暗处 23 h。（五）厌氧光照培养温度：以 2836为最适生长温度光照强度：以 30004000 勒克斯（LX）为最佳，即白炽灯至少 40 瓦，时间 57天。四、结果分析实验二 光合细菌扩大性培养一、实验目的（一）掌握光合细菌扩大培养的方法，分离纯化特征性明显的菌落（二）在不染色的情况下，通过显微镜观察光合细菌的形态特征二、实验材料（一）菌源：上次实验培养所得红色和绿色菌液（二）培养基：红螺菌科细菌分离培养基和富集培养基（三）仪器：无菌培养皿，移液管，塑料瓶，显微镜等三、实验步骤（一）显微镜观察1.取清洁的载玻
4、片和盖玻片；2.用无菌滴管自光合细菌生长良好的容量瓶内壁处，分别吸取红色菌液和绿色菌液各一滴，盖上盖玻片后，先用低倍镜找到菌落，再转换为告别高倍镜进行观察。（二）分离纯化用无菌滴管再次吸取红色和绿色菌液各数滴，在无菌培养皿中稀释，然后用接种环进行平板划线分离，进一步光照厌氧培养。（三）扩大性培养1.对照组扩大性培养：将商品光合细菌与生产培养基按 1：2 的比例进行混合，光照下厌氧条件培养，每班 2 塑料瓶即可。2.实验组扩大性培养：将两个小组的红色和绿色菌液分别吸取之后，再将它们分别装入 2 个塑料瓶内，一个盛红色菌液，一个盛绿色菌液，最后按 1：2 的比例加入配制好的生产性培养基后，继续培养
5、观察。四、培养观察（一）培养条件的监测及搅拌；（二）生产情况的观察与检察；（三）问题的分析和处理。实验三 轮虫的分离培养一、实验目的1.了解淡水臂尾轮虫的生态习性和形态特征2.掌握臂尾轮虫培养的基本方法二、实验器材浮游生物网，样本瓶，显微镜，微吸管，凹玻片，锥形瓶，筛绢，光合细菌，酵母，蒸馏水等三、实验步骤1.采样的分离用浮游生物网在自然水体中捞取一些轮虫，置瓶中带回室内，如发现臂尾轮虫（主要为萼花臂尾轮虫） ，在解剖镜下，用微吸管把轮虫吸出。为了避免吸取其他动物，可先吸于一清洁的凹玻片上，经观察后再吸入小三角瓶中培养。2.培养培养用水需筛绢过滤，除去敌害生物，再进行严格消毒。前期培养用水量较
6、少，采用高温煮沸法。3.接种轮虫的接种密度一般以 25 个/ml 为宜，在适宜的温度、饵料、溶氧、光照等条件下，经 810 天即可扩大培养或收获。4.日常管理投饵：定时投喂单细胞藻类或酵母，也可投喂光合细菌；搅拌和充气：每次投喂单细胞藻类后需轻轻的搅拌，一方面可使饵料分布均匀，另一方面可增加水中的氧；生长情况的检查：轮虫生产情况的好坏和繁殖速度的快慢的反映在每次投喂前进行观察，注意轮虫的游动是否活泼正常，分布是否均匀，密度是否一天天加大，剩余饵料量的多少等。四、实验结果与讨论实验四 单细胞藻的培养一、实验目的（一）了解单细胞藻培养的种类及生物学特征（二）学习并掌握单细胞藻的分离培养方法及注意事
7、项二、实验仪器浮游生物网，锥形瓶，显微镜，电炉，培养皿，电子天平，喷壶，烧杯，灭菌锅等三、实验步骤（一）采样：分离藻种，首先要采集生长有需要分离的藻类水样，可用浮游生物网在水中捞取。（二）镜检：水样采回来后，进行显微镜观察，如果发现需要分离的藻种，而这种藻类在水中数量较多时可立即进行分离。（三）分离方法1.显微镜吸管分离法：将稀释的水样置浅凹载玻片上，在显微镜下观察，挑选要分离的藻胞。2.水滴分离法：用微量吸管吸取水样，滴到载玻片上，一载玻片上 34 滴，显微镜观察。如果某一滴内只有一个需要分离的藻类细胞，无其他生物混杂，可将水滴冲入培养液中培养。3.平板分离法（喷雾法）：首先用经煮沸消毒的自来水把水样稀释到合适的程度，装入塑料喷雾器中，打开培养皿盖，把水样喷射到培养基表面上，使水样在培养皿上形成均匀的一薄层水珠。4.划线法：水样不用稀释，直接用接种环进行划线培养。（四）培养喷射或划线接种后，盖上培养皿盖子，放在适宜的光照条件下培养，一般经过20 天左右的培养，就可以在培养基面上生长出相互隔离的藻类群落。通过镜检，寻找需要分离的藻类群落，获得单种培养后，一方面扩大培养，供应试验和生产时用，另一方面可把藻种作较长时间保藏。四、实验结果与讨论
