1、常用缓冲液的配制（TBS，PBS）科研探索 2007-04-23 13:25:54 阅读 728 评论 0 字号：大中小 订阅 这是各种缓冲液的配制方法1. 0.01MPBS(PH7.2)液 NaCl 8g Na2HPO4 1.15g KH2PO4 0.2g （NaH2PO4） 加双蒸水至 1000ml 2. 0.05MTBS(PH7.4)液 Tris(三羟甲基胺基甲烷) 12.1g Nacl 17.5g 加双蒸水至 1500ml 在搅拌下加浓 HCL 至 PH7.4，再加双蒸水至 2000ml。 3. 0.02MTBS（PH8.2 ）液 Tris 4.84g Nacl 17.5g BSA 2
2、.0g NaN3 1.0g 加双蒸水至 1500ml 在搅拌下加浓 HCL 至 PH8.2，再加双蒸水至 2000ml。 （BSA牛血清白蛋白；NaN3 叠氮钠，为防腐剂）。 4. 0.05MTB 液（PH7.6 ） 先配制 0.05MTB 液： Tris 60.75g 1N HCL 约 420ml 双蒸水 至 1000ml 配制方法：先以少量双蒸水（300ml ）溶解 Tris，加入 HCL 后，再用 1N HCL 或 1N NaOH 将 PH 值调至 7.6，再加双蒸水至 1000ml。 用时将 0.5MTB 稀释 10 倍，即为 0.05MTB 液（PH7.6）液 磷酸缓冲液(Gomor
3、i 缓冲液)最通用的磷酸盐缓冲液是以其发明者 Gomori 命名的。该缓冲液是由单价磷酸二氢盐和双价磷酸一氢盐的混合物组成的。通过变化每种盐的量，就可配制出 pH 5.8 至 pH8.0 之间缓冲液 (见表 A1-3A 和 A1-3 。磷酸盐有很高的缓冲能力，在水中高度可溶。但是，它们也有不少潜在的缺点：磷酸盐缓冲液抑制许多酶促反应和步骤，而这些酶促反应和步骤恰恰是分子克隆的基础，其中包括许多限制酶对 DNA 的切割，DNA 的连接和细菌转化等。因为磷酸盐在乙醇中沉淀，不能用于沉淀 DNA 和 RNA。磷酸盐螯合像 Ca2+和 Mg2+这样的阳离子。表 A1-3A 25下 0.1mol/L 磷
4、酸钾缓冲液的配制pH 1 mol/L K2HP04 的体积/mL 1 mol/L KH2PO4 的体积/mL5.8 8.5 91.56.0 13.2 86.86.2 19.2 80.86.4 27.8 72.26.6 38.1 61.96.8 49.7 50.37.0 61.5 38.57.2 71.7 28.37.4 80.2 19.87.6 86.6 13.47.8 90.8 9.28.0 94.0 6.0注：根据 Green(1933)的资料汇编。用蒸馏水将混合的两种 1mol/L 的贮存液稀释至 1000mL。根据Henderson-Hasselbaleh 方程计算其 pH 值：pH=pK+Log ，在此，pK=6.86(25)表 A1-3B 25下 0.1mol/L 磷酸钠缓冲液的配制pH 1mol/L Na2HPO4 的体积/mL 1mol/L NaH2P04 体积/mL5.8 7.9 92.16.0 12.0 88.06.2 17.8 82.26.4 25.5 74.56.6 35.2 64.86.8 46.3 53.77.0 57.7 42.37.2 68.4 31.67.4 77.4 22.67.6 84.5 15.57.8 89.6 10.48.0 93.2 6.8注：根据 ISCO(1982)的资料汇编
