1、文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 实验室生物安全手册第 1 页 共 11 页20. HIV病毒的危害评估一、一般生物特性概述1、病原微生物起源1981年，美国首次报道了人类获得免疫缺陷综合征。病例；1983年，法国巴斯德研究所首次分离到病毒。1986 年，国际病毒名委员会将其命名为人类免疫缺陷病毒。HIV 属逆转录病毒科中的慢病毒属。2、形态特征成熟的 HIV病毒颗粒直径为 100120nm，球形，电镜下可见一致密的锥形核心，其内有病毒 RNA分子和逆转录酶。病毒表面由 72个刺突状结构组成。包膜糖蛋白
2、以三聚体形式存在。3、流行特征艾滋病自发现以来，在世界各地迅速蔓延，病例数不断增加，来势十分凶猛，特别是在非洲和东南亚各国更为严重。到目前为止，尚无有效的预防疫苗和根治药物，这都加速了艾滋病的流行。HIV/AIDS的流行已成为人类社会和经济的灾难。自 1985年我国首次发现 HIV感染者以来，截止到 2006年底，我国累计报告 HIV感染者 191565例，其中艾滋病患者为 47713例。我国目前 HIV/AIDS流行特征为：艾滋病疫情呈上升趋势；流行范围广，地区差异大；三种传播途径并存，吸毒和性传播是新发感染的主要途径；艾滋病患者的死亡情况严重；艾滋病由高危人群向一般人群扩散，存在艾滋病疫情
3、进一步蔓延的危文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 实验室生物安全手册第 2 页 共 11 页险。二、致病性和感染剂量1、致病性HIV感染所引起的临床表现十分复杂，以 CD4+T淋巴细胞进行性减少和免疫缺陷为特征，常伴有实质器官（脑、淋巴结和肺等）的炎性疾病、神经损伤和恶性肿瘤。感染 HIV后的 24周为急性期，出现病毒血症，30%70%的感染者可能伴有流感样或单核细胞增生样症状。此后，由于特异性淋巴细胞的免疫反应，病毒血症和临床症状基本消失，进入病毒的潜伏期，此时病毒仍在复制，淋巴细胞逐渐减少，机体的免疫
4、功能逐渐下降。免疫系统的进行性损伤导致免疫功能的严重缺陷，感染者出现各种不同程度的机会性感染、恶性肿瘤和神经损伤等临床症状。2、感染剂量HIV的感染剂量与潜伏期和发病过程相关，但具体的感染剂量目前尚未见报道。下面以实验室感染 HIV风险的相关报道为例。针刺或皮肤割伤暴露于 HIV感染的血液后，经皮肤感染 HIV的平均风险为 0.3%。无损伤皮肤暴露于少量感染血液后是否造成 HIV感染未见报道。眼、鼻或口腔黏膜暴露于 HIV感染的血液后，感染率估计为0.1%。流行病学和实验室研究结果显示，暴露的血量越大、损伤程度越深，越容易感染。以下几种情况可增加 HIV的传播风险：直接暴露于文件编号：xzyy
5、swaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 实验室生物安全手册第 3 页 共 11 页AIDS患者的血液；针头直接刺伤在动脉或静脉处；深部损伤。尚未建立用病毒载量（即 HIV RNA）评估 HIV传播风险的方法。血浆病毒载量仅代表外周血中游离在细胞外的病毒水平。在潜伏期，HIV阳性细胞也具有感染性。当血液中检测不到病毒或病毒滴度小于每毫升 1500RNA拷贝数时，意味着低滴度暴露。三、感染途径及潜在暴露结果1、自然感染HIV主要存在于感染者和患者的血液、精液、阴道分泌物和乳汁中，可通过性接触（包括同性、异性和双性性接触） 、血液及
6、血制品（包括共用针具静脉吸毒、介入性医疗操作等）和母婴传播（包括产前、产中和产后）三种途径传播。2、其他感染途径从事健康护理、实验室和公共安全等人员，工作涉及与患者、血液或其他体液、组织和组织培养液等直接或间接的接触。HIV 职业暴露是指实验室人员从事 HIV检测、病毒培养及分离、病毒灭活和与 HIV相关的其他工作过程中意外地被 HIV感染，或被艾滋病患者的血液、体液、培养液污染了皮肤或黏膜，或者被含有 HIV的血液、休液、培养液污染了的针头及其他锐器刺破皮肤，有可能被HIV感染的情况。3、潜在暴露结果文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效
7、日期：20110809 主题内容 实验室生物安全手册第 4 页 共 11 页当工作人员进行 HIV相关操作而防护措施不到位时，可能出暴露于 HIV的潜在危险。HIV 感染是一个漫长而复杂的过程，从初始感染到终末期，不同阶段中的临床表现多种多样。参照 2001上制定的HIV/AIDS 诊断标准及处理原则中华人民共和国国家标准（试行） ，将艾滋病毒的全过程分为急性期、无症状期和 AIDS期。急性期：HIV 进入人体后，在 2448h内达到局部淋巴结，约 5天左右可以在外周知中检测到病毒成分。部分感染者出现的 HIV病毒血症和免疫系统急性损伤症状，通常发生在初次感染 HIV-1后的12周左右。大多数
8、患者临床症状轻微，没有明显的感觉。临床症状以发热最为常见，可伴有咽痛、盗汗、恶心、呕吐、腹泻、皮疹、关节痛、淋巴结肿大和神经系统症状。无症状期：可从急性期发展而来，也可无明显的急性期症状直接进入此期。在此期内，感染者体内 HIV持续复制，具有传染性，因此无症状期患者又称为 HIV感染者。此期持续时间为 68年或更长时间。时间长短与感染病毒的数量、型别， 、感染途径、机体免疫的个体差异、营养条件及生活等因素有关。由于 HIV在体内不断复制，免疫系统受损，CD4 淋巴细胞计数逐渐下降。AIDS期；为感染 HIV后的最终阶段。患者 CD4 细胞计数200/mm 3，HIV RNA拷贝数明显升高。此期
9、主要临床表现为 AIDS相关症状、洛种机会性感染及肿瘤。AIDS 相关症状包括；持续一个月以上的发热、文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 实验室生物安全手册第 5 页 共 11 页盗汗、腹泻、体重减轻 10%以上，部分患者表现为神经、精神症状，如记忆力减退、神情淡漠、性格改变、头痛、癲痫和痴呆等。另外还可出现持续性全身性淋巴结肿大，其特点为：除腹股沟以外有两个或两个以上部位的淋巴结肿大；淋巴结直径=1cm,无压痛，无粘连；持续时间 3个月以上。四、环境中的稳定性1、自然环境中的稳定性HIV在外界环境中的生
10、存能力较弱，对理化因素的抵抗办较低。HIV对酸敏感，PH 为 2.0时能完全灭活病毒；但 HIV耐碱，PH 为9.0时，病毒效价下降不多。HIV 对热很敏感，对低温耐受性强于高温。56处理 30min，可使 HIV在体外失去对人 T淋巴细胞的感染性，但这个温度和时间不能完全灭活血清中的 HIV。HIV 在室温（2327）液体环境中可存活 15天以上，而在干燥环境下，病毒效价可在数小时下降 90%99%。2.灭活条件HIV对消毒剂和去垢剂等化学因素很敏感，50%70%酒精、2%甲醇、5%石炭酸、1%甲酚皂、0.1%家用漂白粉、0.1%戊二醛、0.3%过氧化氢、0.25%丙内酯、0.1%次氯酸钠、
11、1%NP-40 和 0.2%TritonX100均可使病毒灭活。标本经丙酮或甲醛处理后，也可便病毒灭活。五、被操作微生物的浓度和剂量的影响文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 实验室生物安全手册第 6 页 共 11 页HIV分离培养操作中，允许使用的 HIV最大估计浓度为10ng/ml(P24抗原检测)，容量为 30ml。在体外抑制或灭活实验中，HIV浓度约为 105TCID。六、自然宿主及和易感人群HIV的宿主为人类，感染人后引起 AIDS。研究发现，HIV 的序列与猴免疫缺陷病毒（SIV）有高度同源性，
12、因此，人们最初用动物传播给人类来解释 HIV流行的起源。根据这种假说，人类并不是HIV的自然宿主。HIV-1 的自然宿主可能是黑猩猩中的p.t.troglodytes，简称 SIVcpz(P.t.t).研究表明，大约在 1930年，p.t.troglodytes将 HIV传染给人类；而 HIV-2可能起源于乌黑白眉猴、SIVsm 或短尾猴 SIVsm。SIV 在自然突主中不致病，如感染的乌黑白脸猴、非洲绿猴、黑猩猩等并不发病，但当跨种属传播至非自然宿主时，可使后者发病。HIV的主要传播途径是高危性行为、污染的血液或血液制品和母婴传播。在不同的国家，HIV/AIDS 在不同的人群中以不同的速度流
13、行。HIV/AIDS 的高危人群包括：暗娼、嫖客、注射吸毒者、男性同性恋者和流动人口，他们常常不为社会所接受，属于难以接近的人群。要采取不同的干预措施，控制 HIV/AIDS在高危人群中的传播。七、实验动物研究、实验室感染或医院内感染信息在 AIDS流行早期，研究人员用感染者的淋巴细胞悬液接种包括文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 实验室生物安全手册第 7 页 共 11 页非人灵长类在内的不同动物，但只有黑猩猩能被感染。感染的黑猩猩多无症状，病毒不能损害它们的免疫系统。医务人员因职业暴露出发生 HIV感染
14、的危险性很小，但存在可能性。据国外报道，从 1984年-1993 年 12月，因职业暴露发生的感染共有 64人，欧洲 24人，美国 36人，其他国家 4人。在这些人中，绝大多数（91%）是经皮肤感染，其中接触 AIDS患者的占62%；多数是由于在给患者静脉穿刺时发生了针刺伤。几乎所有的感染者（94%）均在职业暴露发生 6个月内进行了检测并被证实感染；有 73%的感染者出现了急性症状。有 10人在职业暴跌发生后服用AZT药物进行预防治疗，但仍被感染。八、实验活动评估对可能接触 AIDS患者、HIV 感染者或阳性标本的实验室工作人员，应在开始工作之前进行有关隔离、消毒措施的教育，使他们了解工作中有
15、可能造成自身造成自身感染，自身防护是非常重要的。1.标本采集从准备血样采集工作开始直到样本采集完成后的处理，操作人员都要戴上两层乳胶手套、帽子和口罩。针头、针管及采血管等废弃物要用高效消毒液浸泡、高温高压消毒后，由相关部门处理销毁。2.分离血清或血浆对于 HIV阳性标本应在 BSL-2实验室中进行血清或血浆的分离工文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 实验室生物安全手册第 8 页 共 11 页作。灭活的血清或血浆可在血清检测室中开展实验工作。九、预防和治疗措施实验室工作人员接触 HIV时，应当采取以下防护措
16、施：（1）当进行有可能接触患者血液、体液、病毒培养液等实验操作时，必须戴手套，必要时还应戴具有防渗透性能的口罩。如有可能发生血液、体液或其他污染性液体大面积飞溅或者有可能污染工作人员身体时，还应穿戴防渗透性能的隔离衣或围裙。操作完毕，脱去手套后立即洗手，必要时进行手消毒。（2）在进入实验室之前要摘除首饰，修剪长的带刺的指甲，以避免刺破手套。工作人员手部皮肤有伤口和擦伤时不要进入实验室。在进行有可能接触患者血液、体液、培养液的实验操作时，必须戴双层手套。（3）在实验操作过程中要保证充足的光线，并特别注意防止被针头、刀片等锐器刺伤或划伤。尽量避免使用尖锐物品和利器，必须使用时，应放在耐扎的容器内，
17、使用后收集在特定的带盖的容器内保存至消毒处理完毕或销毁。（4）HIV 实验室应配备专用的工作鞋，鞋面覆盖足背，鞋底防滑。尽量使用塑料质地的实验物品。禁止将使用后的一次性针头重新套上针头套。禁止用手直接接触使用后的针头、刀片等锐器。文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 实验室生物安全手册第 9 页 共 11 页（5）使用螺旋帽的塑料管盛放含 HIV的样品，禁止使用Eppendorf管，以防止在开启管盖时发生样品迸溅。禁止用口吸任何液体，必须使用移液器操作。在离心含 HIV的液体时，离心机要使用密闭罐和密封头，
18、防止溢出或形成气溶胶。（6）设有专门储存阳性血清、质控品的低温冰柜和/或血清库、毒种库，上锁并由专人管理。（7）工作结束后及时消毒工作台面，有污染的地方要及时消毒处理。当工作人员在工作人员在工作中意外地被 HIV污染的针头或其他器械刺伤皮肤时，应在尽早及时进行处理并立即实施以下局部处理措施；（1）用肥皂液和流动水清洗污染的皮肤，用生理盐水冲洗黏膜。（2）如有伤口，应当在伤口旁轻轻挤压，尽可能挤出损伤的血液，再用肥皂液和流动水进行冲洗。（3）受伤部位的伤口冲洗后，应当用消毒如 75%酒精或者 0.5%碘伏进行消毒，并包扎伤口；被暴露的黏膜，应当反复用生理盐水冲洗干净。（4）污染物迸溅；发生小范围
19、污染物进溅事故时，应立即进行消毒处理。发生大量溢出后应离开房间约 30min。穿防护服时，被的地方用经消毒剂浸泡过的吸水物质覆盖；消毒剂起作用 1015min后文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 实验室生物安全手册第 10 页 共 11 页再清理该处。移走吸水性物质，用消毒剂冲洗该处。十、人员安全状况评估 1.健康监测和健康状况评估在进行 HIV相关实验后，应对操作者的健康善进行检查。一旦发生了 HIV感染，应立即到指定医院进行确认并接受相应的支持和对症治疗，同时报告各级疾病预防控制中心及相关卫生管理部门
20、。2.人员资质和培训进入 BSL-2实验室从事 HIV实验的工作人员应为本单位的正式员工，掌握 HIV传播、致病理论及基本的实验操作技能，经 BSL-2生物安全培训，考核合格后方可上岗。每年必须进行一次 BSL-2实验室生物安全培训和考核。对实验室所有其他相关人员，包括清洁人员、运输工、修理工等也要定期进行培训，使他们熟悉工作环境，了解潜在危害以及相应的事故预防和紧急情况处理措施。每次培训之后，要对培训结果进行评估，合格后方可进行相应的工作。十一、评估结论根据中华人民工和国传染病防治法 ，HIV/AIDS 被列为乙类传染病。根据人间传染的病原微生物名录规定，HIV 发球危害程度第二类病原微生物
21、。HIV的血清学实验应在 BSL-2实验室中进行，HIV 的致病性较强，文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 实验室生物安全手册第 111 页 共 11 页临床疗效差，积极地预防和防护是预防实验室感染的最有效方法。从事 HIV的工作人员必须经过生物安全培训并取得相应资质，在身体健康状态良好的情况下开展工作。在定点医院保健就医是防止实验室发生人员感染后扩散到社会的重要措施。文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 生物安全手册
22、（霍乱弧菌危害评估）第 1 页 共 11 页21. 霍乱弧菌危害评估一、危害程度分类分类等级，在卫生部公布的人间传染的病原微生物名录中将其列为第二类病原微生物（危害程度为 III 级） ，属高致病性病原微生物。二、背景资料霍乱弧菌（V. cholerae）是烈性消化道传染病霍乱的病原菌。霍乱发病急，传染性强，死亡率高,为我国甲类法定传染病。1883年 Koch首先从埃及和印尼腹泻病人中分离出霍乱弧菌。1905 年埃及西奈半岛 EL Tor检疫站从尸体中分离出另一种致病弧菌，并命名为 EL Tor弧菌。1966 年国际弧菌命名委员会将霍乱弧菌分为古典生物型及 EL Tor生物型。自 1817年起
23、 100多年期间曾发生过 7次世界性大流行，前 6次均起源于印度恒河三角洲，是由霍乱弧菌古典生物型所引起的。1961 年的第七次世界大流行起源于印尼苏拉威西岛，由埃尔托（EL Tor ）生物型引起。1992 年一个新的流行株O139（Bengal）在印度和拉湾的一些城市出现，并很快在亚洲传播，这是首次由非 O1群霍乱弧菌引起的流行。 文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 生物安全手册（霍乱弧菌危害评估）第 2 页 共 11 页（一）一般生物学特性1.形态特性：霍乱弧菌为革兰阴性弯曲菌，大小0.30.8mm*
24、13mm，从患者体内新分离出的细菌形态典型，呈弧状或逗点状。经人工培养后，易失去弧形而呈杆状，与肠道杆菌难以区别。有端单鞭毛和菌毛，有些菌株（如 O139）有荚膜。运动活泼，呈穿梭样或流星状。涂片染色呈鱼群状排列。2.培养特性：营养要求不高，在 PH8.89.0 的碱性蛋白胨水或平板中生长良好。因其他细菌在这一 PH 不易生长，故碱性蛋白胨水可作为选择性增殖霍乱弧菌的培养基。在碱性平板上菌落直径为2mm,圆形，光滑，透明。 霍乱弧菌能还原硝酸盐为亚硝酸盐，靛基质反应阳性，当培养在含硝酸盐及色氨酸的培养基中，产生靛基质与亚硝酸盐，在浓硫酸存在时，生成红色，称为霍乱红反应，但其他非致病性弧菌亦有此
25、反应，故不能凭此鉴定霍乱弧菌。EL Tor 型霍乱弧菌与古典型霍乱弧菌生化反应有所不同。前者 VP 阳性而后者为阴性。前者能产生强烈的溶血素，溶解羊红细胞，在血平板上生长的菌落周围出现明显的透明溶血环，古典型霍乱弧菌则不溶解羊红细胞。个别 EL Tor 型霍乱弧菌株亦不溶血。文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 生物安全手册（霍乱弧菌危害评估）第 3 页 共 11 页（二）在外界环境的稳定性霍乱弧菌古典生物型对外环境抵抗力较弱，EL-Tor 生物型抵抗力较强，在河水、井水、海水中可存活 13 周，在鲜鱼，贝
26、壳类食物上存活 12 周。 霍乱弧菌对热，干燥，日光，化学消毒剂和酸均很敏感，耐低温，耐碱。经干燥 2小时或加热 5510 分钟即可死亡，煮沸立即死亡；水中加 0.5ppm氯 15分钟可被杀死。0.1%高锰酸钾浸泡蔬菜、水果可达到消毒目的。对酸敏感，在正常胃酸中仅能存活 4分钟，接触 15000110000 盐酸或硫酸、1200013000 升汞或1500000 高锰酸钾，数分钟即被杀灭，在 0.1%漂白粉中 10分钟内即可死亡。氯化钠的浓度高于 4%或蔗糖浓度在 5%以上的食物、香料、醋及酒等，均不利于霍乱弧菌的生存。（三)致病性和感染剂量1致病物质 霍乱弧菌的致病物质包括粘液素酶、菌毛和霍
27、乱肠毒素（Cholerac enterotoxin，CT）。霍乱弧菌活泼的鞭毛运动有助于细菌穿过肠粘膜表面粘液层，有毒株产生的粘液素酶有液化粘液的作用；依靠普通菌毛的粘附可使细菌定植于小肠粘膜，只有定植后方可致病。现已发现编码粘附素和菌毛蛋白中重要亚单位的相关基因为文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 生物安全手册（霍乱弧菌危害评估）第 4 页 共 11 页acf和 tcpA，与粘附和定植有关。CT 是一种不耐热的聚合蛋白，由一个 A亚单位（分子量为 2707KD）和 46 个 B亚单位（每个分子量为 11
28、.7KD）组成。A 亚单位是霍乱肠毒素的毒性物质，B 亚单位是结合单位，后者可与小肠粘膜上皮细胞上神经苷脂（GM1 受体）结合，结合后的毒素分子变构，使 A亚单位脱离亚单位进入细胞膜，同时双硫键降解，分为 A1，A2 两条多肽,A1 为毒性部分,作为腺苷二磷酸核糖基转移酶可使 NAD(辅酶 1)上的腺苷二磷酸核糖转移到 G 蛋白上形成 GS,GS可作用于膜上的腺苷酸环化酶，使细胞内cAMP浓度增高，肠粘膜上皮细胞分泌功能亢进，致使肠液（ +、 +、 3-、 2等）大量分泌，导致严重的呕吐与腹泻。 近年发现 O139群除具有 O1群致病物质和相关基因外，还有多糖荚膜和特殊 LPS毒性决定簇，其功
29、能是抵抗血清中杀菌物质并能粘附到小肠粘膜上。 2. 所致疾病 在自然情况下，人是霍乱弧菌的惟一易感者。霍乱的传染源是患者或带菌者，通过污染的水源或食品经消化道感染，正常胃酸条件下需大量细菌进入方可感染，当胃酸低时，少量细菌即可感染。病菌通过胃酸屏障后进入小肠，粘附在小肠表面迅速生长繁殖，霍乱弧菌不入侵细胞内，霍乱肠毒素是主要致病因素。一般在吞xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科生效日期：20110809 主题内容 生物安全手册（霍乱弧菌危害评估）第 5 页 共 11 页食细菌后 23d发病，表现为剧烈的腹泻和呕吐，腹泻物如米泔水样由此造成机体脱水，酸碱、电解质平衡功能紊乱
30、及微循环功能障碍，导致代谢性酸中毒、低溶量性休克及肾功能衰竭。如未及时治疗，死亡率可达 60，若及时给予补充液体及电解质，死亡率可小于。O 139 群霍乱弧菌感染比 O 1群严重，表现为严重脱水和高死亡率，成年患者约占，O1 群霍乱弧菌流行高峰期，儿童病例约占。 病愈后，一些患者可短期带菌，一般不超过两周，少数带 EITor菌者带菌时间长达数月或数年，病原菌主要存在于胆囊中，成为传染源。 3.感染剂量 在 正 常 胃 酸 条 件 下 ， 如 以 水 为 载 体 ， 需 饮 入 大 于1010 个 细 菌 方 能 引 起 感 染 ； 如 以 食 物 作 为 载 体 ， 由 于 食 物 高 强 度
31、的 缓 冲 能 力 ， 感 染 剂 量 可 减 少 到 102 104 个 细 菌 。 任 何 能 降 低胃 中 酸 度 的 药 物 或 其 他 原 因 ， 都 可 使 人 对 霍 乱 弧 菌 感 染 的 敏 感 性增 加 。 4.免疫性 病后可获得牢固免疫力，再感染者少见。主要是体液免疫，包括肠毒素抗体、抗菌抗体、和肠道粘膜表面的 SigA的中和作用。感染 O139群的患者大多为成年人，表明以前感染 O1群获得的免疫对文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 生物安全手册（霍乱弧菌危害评估）第 6 页 共 1
32、1 页O139群感染无交叉免疫。O139 群感染后的免疫应答与 O1群基本一致。O139 群的保护性免疫以针对脂多糖和荚膜多糖的抗菌免疫为主，抗毒素免疫为辅。O1 群的脂多糖 O抗原与 O139群存在显著差异，并缺少荚膜多糖表面抗原，O1 群的免疫不能交叉保护 O139群的感染。四、传播途径和暴露的后果1.传播途径(1)经水传播：水在传播霍乱时起主要作用。在卫生条件差的地方，江河、河渠、池塘、湖水、井水和港湾海水等极易受到污染。我国农村夏秋季人们有喝生水、用生水漱口、洗刷食具、浸泡蔬菜、水产品等的习惯,这些增加了经水传播的机会。经水传播呈现暴发性流行，病人多沿污染的水源分布，在水体含菌浓度较低
33、或细菌毒力较弱、人群免疫力较高的地区，也可继续出现散发病例。(2)食物传播：霍乱可以通过食物传播。食物传播霍乱的作用仅次于水，但在已有安全饮用水的地区，轻型和临床型病人，污染食物而引起传播的作用可能更为突出。(3)生活接触传播:与病人或带菌者直接接触或接触了被埃尔托弧菌污染的物品也可发生霍乱。接触传播多在人员密集、卫生条件差的情况下发生，常在小范围内引起感染。如出现一户多例现象。但本型传播与食物型、水型传播不易截然分开。不应只因多发疫源地的出现即断定为日常接触传播。文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20110809 主题内容 生物
34、安全手册（霍乱弧菌危害评估）第 7 页 共 11 页(4)经媒介昆虫传播：本病流行时苍蝇可以带菌。有人曾从染有霍乱的疫船以及从疫区中捕获的苍蝇身上检出埃尔托弧菌。2. 暴露的后果当工作人员进行霍乱弧菌相关操作而防护措施不到位时，可能出暴露于霍乱的潜在危险。而经暴露后可分为如下传染源：(1)病人：分为重型、中型、轻型，急性病人排泄物中含有大量病菌。重、中型病人由于频繁的腹泄和呕吐极易污染周围环境，无疑是重要的传染源，但轻型病人由于及时就诊的少，临床上极易误诊和漏诊，常不被发现。这些病人可带菌活动，广为传播，作为传染源的流行病学意义更大。(2)带菌者：指无临床表现而粪便中排出霍乱弧菌的人，包括潜伏
35、期菌、恢复期菌(病后带菌)健康带菌和慢性带菌。潜伏期带菌：指病人在出现症状之前于潜伏期内大便有排菌者。恢复期带菌和慢性带菌：指病人在临床症状消失后 3 个月内带菌,为恢复期带菌：病后排菌超过 3 个月者称为慢性带菌。恢复期带菌一般不超过 1 周，持续 4 周以上者很少，慢性带菌时可持续数月至数年，国外报导最长达 10 年，这种带菌通常是胆囊或胆道带菌。健康带菌者:指始终没有临床症状,而粪便中排出霍乱弧菌者。一般不超过 1 周，少数可达 2 周，带菌的频率和传染源接触程度有关。文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本修订号：4/0生效日期：20110809 主题内
36、容 生物安全手册（霍乱弧菌危害评估）第 8 页 共 11 页据调查，有病人的家庭密切接触者中，5-20%的人受感染，邻居接触者为 0.3-0.4%，一般社会接触仅占 0.02-1.3%，这些感染者当中有 60-80%始终无症状。(五) 霍乱弧菌的宿主范围人类在自然情况下是霍乱弧菌的唯一易感者。患过霍乱的人可获得牢固的免疫力，再感染者少见。病人在发病数日，血液中即可出现特异性抗体，7-14 天抗体滴度达高峰，随后逐渐下降至较低水平，但能持续约 3 个月之外。病后小肠内可出现分泌型 lgA。体液抗体与免疫的关系尚不清楚，一般认为局部 SlgA 可在肠粘膜与病菌之间形成免疫屏障，有阻断粘附和中和毒素
37、的作用。(六) 霍乱弧菌的预防、诊断和治疗必须贯彻预防为主的方针，作好对外交往及入口的检疫工作，严防本菌传入，此外应加强水、粪管理，注意饮食卫生。对病人要严格隔离，必要时实行疫区封锁，以免疾病扩散蔓延。 人群的菌苗预防接种，可获良好效果，现用加热或化学药品杀死的古典型霍乱菌苗皮下接种，能降低发病率。这种苗菌对 EL-Tor型霍乱弧菌感染也有保护作用，但持续时间短，仅 3-6 个月。近年来，有使用口服菌苗（大剂量、反复服用） ，类毒素及类毒素与死菌的混合疫苗等，这些尚待现场验证，才能下结论。治疗主要为及时补充液体和电解质及应用抗菌药物如链霉素、氯霉素、强力霉素、复方文件编号：xzyyswaq -
38、10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4 /0生效日期：20110809 主题内容 生物安全手册（霍乱弧菌危害评估）第 9 页 共 11 页SMZ-TMP 等。三、实验室实验活动及其危险性与预防措施(一) 实验室实验活动背景资料1.实验活动内容本实验室主要从事微生物学、体液检验等，涉及霍乱弧菌的实验内容有：(1)霍乱弧菌的培养与鉴定；(2)霍乱弧菌快速纸片法（O 1型与 O139型） ；(3)霍乱弧菌大便悬滴试验。(二) 可能造成不良后果的因素与预防措施1.实验标本的接收 由临床标本在运输过程中可能会因试管塞子脱落或破碎而造成污染。拟采取防护措施：要求接收和打开标本的人员应当了解
39、样品对身体健康的潜在危害，接受如何采用常规预防措施的培训，样品要在生物安全柜内打开，准备好消毒剂。样品接收与开启操作严格按实验样品的接收与开启操作细则进行。2.实验样品涂片悬滴试验用于显微观察时，严防粪便污染显微镜和实验台。此外，霍乱弧菌在未经处理的粪便中，可存活数天；在冰箱内的牛奶、鲜肉和鱼虾水产品中存活时间分别为 24 周、1 周和 13 周；在室温下存放的新鲜蔬菜中，可存活 15 天；在砧板和布上文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20101109 主题内容 生物安全手册（霍乱弧菌危害评估）第 10 页 共 11 页可存活相当
40、长时间；在玻璃、瓷器、塑料和金属上存活时间不超过2 天。拟采取防护措施：涂片操作过程应避免污染台面，制成涂片后立即暗视野观察。观察完毕后清除污染弃于装有消毒液的污桶中。3. 霍乱弧菌快速纸片法操作时也应注意粪便的处理，严防实验室暴露。4. 霍乱弧菌的培养与鉴定 接种含有霍乱弧菌的粪便标本时，接种时，应在生物安全柜中进行，接种碱性蛋白胨水培养基、庆大霉素培养基和四号培养基。四、工作人员素质见工作人员素质表五、评估结论霍乱弧菌古典生物型在外界环境中生存能力不强，而爱尔托生物型抵抗力较强，在未经处理的粪便中，可存活数天；在河水、井水、池塘水和海水中可存活 13 周，甚至更长，有时在局部自然水中也能越冬。霍乱弧菌有较为有效诊断手段和治疗药物。湘潭市中心医院可以承担感染后的处理以及患病后的治疗。建议检验人员在参加相关的实验活动时，严防污染和暴露。文件编号：xzyyswaq -10-201115湘潭县中医医院检验科版本/修订号：4/0生效日期：20101109 主题内容 生物安全手册（霍乱弧菌危害评估）第 11 页 共 11 页附件 1 出入微生物实验室人员登记表日 期 姓 名 信 息 进入时间 离开时间 备 注
