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大鼠小肠吸收模型.doc

上传人:hwpkd79526 文档编号:6878226 上传时间:2019-04-25 格式:DOC 页数:1 大小:23KB
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大鼠小肠吸收模型.doc_第1页
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资源描述

1、大鼠肠吸收单向灌流模型的建立取禁食12 h(可自由饮水)的大鼠,腹腔注射戊巴比妥钠(40 mgkg-1)将其麻醉。将麻醉的大鼠固定于恒温手术台上以保持体温,沿腹中线打开腹腔,分离待考察肠段,长度1015 cm,于两端切口,用 37 的生理盐水洗净肠内容物,然后,用空气将生理盐水排空,插入塑料管,并结扎固定,用预热至37 的pH=6.8的磷酸盐缓冲液 循环10 min,再用空气排出 pH=6.8的磷酸盐缓冲液 10。接着用pH=6.8的磷酸盐缓冲液 配制成的供试药液以 0.5 mLmin-1的流速泵入肠段,使肠段内充满药液,后将流速调至0.25 mLmin-1,同时开始记时,约0.5 h后,吸收

2、达到稳定状态 11。进口处用已知质量的装有供试液的小瓶进行灌流,开始每隔15 min在出口处用另一已知质量的小瓶收集一次 (同时迅速更换下一个供试液小瓶和收集液小瓶),称质量,计算灌入和收集的供试液的质量 12。于出口处收集流出的灌流液直到105 min,即分别于记时后的45、60、75、90和105 min取样。实验结束时,将灌流肠段剪下,测量其长度和内径。所取样品置于1.5 mL离心管中,12000 rmin-1离心20 min后,取20 L上清液用于测定峰面积,剩余的样品利用UV测定吸光度值(A)。大鼠外翻肠囊模型的建立取禁食(不禁水)12 小时的大鼠,腹腔注射戊巴比妥钠(40 mgkg

3、-1)将其麻醉,开腹取出相应肠段,以生理盐水灌流冲洗至无肠内容物,将小肠移至4人工肠液中,在不损伤肠管的情况下,剥离肠表面的脂肪及血管 13,然后,用滤纸沾干表面水迹。将一与肠腔口径相适的塑料软管轻轻插入肠段(从口端向肛门端方向),用丝线将肛门端结扎在塑料软管一端,用手指轻柔地将肠管翻转使粘膜面朝外,用0的磷酸盐缓冲液冲洗内表面 14,然后用注射器向肠内注入适量阴性对照液,使得肠囊的长度约为4 cm,再用丝线扎住口端,剪去塑料软管。迅速将此肠段置入一通有95O 2及5CO 2的混合气体(2mLmin -1)的25 mL预热至 37的沙棘黄酮供试液的烧杯中,烧杯放入37 恒温水浴中,分别于15、45、75 min,取肠外液1 mL置于离心管中,12000 rmin -1离心20 min后,取上清液20 L用于测定三种苷元的峰面积。VQCKinouta)1(

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