实验 白细胞分类计数 (修改版).doc

1、实验 白细胞分类计数目的与原理 了解各种类型白细胞的形态特征，掌握血涂片制作方法和白细胞分类计数方法，进行白细胞分类计数和血细胞形态特征的观察。 各种白细胞必须经过染色，才易于区分其类别。常用者为瑞氏（Wrights）染色法和姬姆萨(Giemsa) 染色法。通过显微镜观察染色血涂片，计算血液中各类白细胞的百分率，称为白细胞分类计数。利用白细胞总数和各类白细胞的百分率，即可计算每 mm3 血液中各类白细胞的绝对值。白细胞分类计数对疾实验对象 家兔实验器材 显微镜，香柏油，载玻片，盖玻片，玻片水平支架，采血针或注射器，计数器，小滴管，蜡笔，消毒棉球，瑞氏染液，pH6.46.8 磷酸盐缓冲液，姬姆萨

2、染液，蒸馏水。 实验步骤 1、血涂片的制作：取一滴血，滴于洁净无油脂的玻片一端。左手持玻片，右手再取边缘光滑的另一玻片作为推片。将推片边缘置于血滴前方，然后向后拉，当与血滴接触后，血即均匀附在二玻片之间。此后以二玻片约呈 3045 度的角度平稳地向前推至玻片另一端。推时角度要一致，用力应均匀，即推出均匀的血膜（血膜不可过厚、过薄） 。将制好的血涂片晾干，不可加热。 2、血涂片的染色步骤： （1）用蜡笔在血膜两端各划一道线，以免染料外溢，置涂片于染色架上。 （2）滴加瑞氏染液，并计七滴数，以盖满血膜为度，静置 1 分钟。 （3）再滴加等量的磷酸缓冲盐溶液，轻轻摇动，并轻吹液体使染色液与缓冲液混合

3、均匀，静置 510 分钟。 （4）用蒸馏水冲洗（如自来水的 pH 值稳定于 7.2 左右时亦可代用） 。切勿先倾去染液再冲洗，否则沉淀物附于血膜上不宜出去。冲洗后斜置血涂片于空气中干燥。或先用滤纸吸取水分迅速干燥，即可镜检。 3、白细胞分类计数：先用低倍镜检查涂片及染色是否均匀。然后加一滴香柏油于血膜厚薄均匀处（一般在体尾交界处） ，在油镜下由此处开始按其形态特征进行分类计数，计数移动时避免重复。根据所见到的 100 个白细胞，记录各种白细胞所占的百分数。 例如：嗜中性白细胞分数（%）=计数嗜中性白细胞个数/计数总白细胞个数100%。4、各类白细胞的形态特征（1）嗜中性白粒细胞：圆形，胞浆淡红

4、色，胞浆内有多量紫红色细小颗粒（染色不佳时则看不清楚） 。核为蓝紫色。（2）嗜酸性白细胞：大小、形态与中性白细胞大体相似，唯胞浆内含有粗大的鲜红色颗粒。核多数为两叶。（3）嗜碱性白细胞：大小、形态与中性白细胞大体相似，但胞浆内含有粗大的深蓝色，常遮盖在核上。核分叶不明显（4）淋巴细胞：分大小两种，小淋巴细胞圆形，核染成深紫色，圆形或肾形，胞浆很少，常呈一小片月牙状，染成蓝色。大淋巴细胞，核圆形或肾形，胞浆相对较多，染成天蓝色，在胞浆与核之间有淡染带。有时内含少数紫红色大颗粒。（5）单核细胞： 核染成紫色，其染色质疏松，核形不规则。胞浆较多，染成浅灰蓝色。注意事项 1、所用玻片必须干净，无油污。 2、如染色太浅，可按照原来步骤重染；染色太深或有沉淀物则可用甲醇脱色后重染。 3、如白细胞核为天蓝色则染色时间过短。如红细胞呈紫红色，表示染色时间过长。 4、染色时切勿使染液干涸，否则发生不易去掉的沉淀。 5、冲洗时不可先倾倒染色，应先轻轻摇动玻片，缓慢加水使沉渣泛起，然后再用水冲洗。 6、水冲洗时间不宜过长，否则会脱色。