1、1 亲 和 素亲 合 素 又 称 卵 白 蛋 白 或 抗 生 物 素 , 分 子 量 为 68000, pI 10 10.5; 在pH9 13 缓 冲 液 中 性 质 均 稳 定 , 耐 热 并 耐 多 种 蛋 白 水 解 酶 的 作 用 。 天 然 亲 合素 为 碱 性 蛋 白 , 由 4 个 相 同 的 亚 单 位 构 成 4 聚 体 ; 每 个 亲 合 素 亚 单 位 通 过其 结 构 中 的 色 氨 酸 残 基 与 生 物 素 中 的 Ureido 环 ( I 环 ) 结 合 。 因 此 , 1 个亲 合 素 分 子 存 在 4 个 与 生 物 素 分 子 结 合 位 点 , 其 结
2、合 常 数 ( Ka) 高 达1015mol/L。 通 常 , 亲 合 素 的 活 性 单 位 是 以 亲 合 素 结 合 生 物 素 的 量 来 表 示 的 , 即 以 能结 合 1Pg 生 物 素 所 需 要 的 亲 合 素 量 为 1 个 亲 合 素 活 性 单 位 。 一 般 1Pg 亲 合素 约 含 13 15 个 活 性 单 位 。 2 链 霉 亲 合 素链 霉 亲 合 素 (SA)是 与 亲 合 素 (A)有 类 似 生 物 学 特 性 的 一 种 蛋 白 质 。 是 由Streptomyces avidin 菌 在 培 养 过 程 中 分 泌 的 一 种 蛋 白 质 产 物 ,
3、 SA 也 可 通过 基 因 工 程 手 段 生 产 。 SA 分 子 量 为 65000, 由 4 条 序 列 相 同 的 肽 链 构 成 ,每 条 SA 肽 链 可 以 结 合 1 个 生 物 素 分 子 。 因 此 与 A 一 样 , 每 个 SA 分 子 也 具有 4 个 可 与 生 物 素 分 子 结 合 位 点 , 其 结 合 常 数 与 A 相 同 为 1015mol/L。 约为 抗 原 抗 体 间 ka( 105 1011 mol/L)的 1 万 倍 以 上 。 SA 与 A 的 ka 虽 然 相 同 , 但 在 实 际 应 用 中 其 检 测 灵 敏 度 明 显 优 于 A,
4、 其原 因 是 SA 为 略 偏 酸 性 的 蛋 白 。 SA 的 每 条 肽 链 含 159 个 氨 基 酸 残 基 , 其 中赖 氨 酸 、 精 氨 酸 等 碱 性 氨 基 酸 的 含 量 比 一 般 亲 合 素 少 , 反 之 含 酸 性 氨 基 酸 较多 , 其 等 点 为 6.0, 较 A( pI=10) 为 低 , 同 时 在 结 构 中 SA 不 含 任 何 糖 基 ,而 A 含 糖 可 高 达 10%。 A 的 高 pI 及 高 含 糖 结 构 导 致 在 聚 苯 乙 烯 板 和 硝 酸 纤 维素 膜 上 或 与 组 织 细 胞 DNA 结 合 时 , 易 产 生 一 定 程 度 的 非 特 异 性 结 合 , 造 成 较高 的 显 色 背 景 , 而 SA 较 A 在 应 用 中 明 显 克 服 了 这 一 缺 点 。 SA 最 高 的 活 性 可 达 18u,较 A 高 ( 15u) ; 与 A 一 样 , 每 个 SA 分 子 也 具有 4 个 可 与 生 物 素 分 子 结 合 位 点 , 故 其 效 应 相 同 。