1、T 淋巴细胞的分离技术（一）原理 混合单个核细胞悬液在通过尼龙毛柱时，B 细胞、浆细胞、单核细胞和一些辅助细胞被选择性粘附于尼龙毛上，而多数 T 细胞则通过尼龙毛柱，这是获得富含 T 细胞群的有效方法。（二）材料及试剂1尼龙毛（Femwall Laboratories,LP1 Leukoqak leukocyte Filters）。2烧杯、铝箔、漏斗、一次性手套等。3装填尼龙毛柱，一次性注射器。4取自然沉降的上层血浆，过聚蔗糖泛影葡胺分层液后，获取的血浆和分层液之间的单个核细胞层。（三）操作方法1尼龙毛的清洗与干燥（1）戴上已经洗去滑石粉的一次性手套，将尼龙毛（1 包或 2 包，每包 35g）
2、放入烧杯中，加入蒸馏水或去离子水，用铝箔盖上烧杯并煮沸约 10min。（2）冷却至常温，倒入漏斗内，使水滴干。（3）重复（1）、（2）步骤 6 次。（4）将尼龙毛摊在铺有纱布的方盘内，37温箱干燥 23 天后，贮藏在带盖的方盘内。2装尼龙毛柱（1）取 50ml 玻璃注射器，拔去注射芯，在注射器头上套一段带夹子的胶管。（2）将尼龙毛梳理，并适当折叠，以适应注射器的直径，填入注射器内，约 20ml 的体积。（3）将填好尼龙毛的注射器连同注射器芯一起包好，高压灭菌。3细胞分离（1）将注射器固定在支架上，倒入 37的细胞培养液，关闭阀门一定时间，然后打开阀门，放掉细胞培养液，以清洗几次尼龙毛，关上阀门
3、。（2）将要分离的细胞液用预先加温的培养液稀释成适当的浓度，约 5.00107个细胞ml。（3）将细胞液倒入注射器内，使之没过尼龙毛柱。盖上注射器，37温育 45min至 1h。（4）打开下口，缓慢放流（1 滴min），收集于离心管中。（5）离心，即获所需的 T 淋巴细胞。（6）关闭注射器下口，于注射器内加入 0.85冰冷生理盐水，振荡，并套上注射器芯，打开下口，使劲推出注射器内液体，即获得粘附于尼龙毛上的 B 淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞等。（四）注意事项1此种分离法，T 淋巴细胞也常有一部分被吸附，吸附的多少与尼龙毛的质量有关，与装柱的松紧也有关系。2此法的 T 淋巴细胞的回收率约 2030。3用过的尼龙毛可回收，以盐水洗涤，然后浸入 0.1Mol/L 的 HCl 中过夜，然后再同前法清洗。
