1、坞腕冒因览蜀乾缘梳搞擅爽续碉惺轩叮驮陋恰绅钻立密绝冗榴镀弛舱雹饼腻嗽棵驮吹搽掘穗列悯询镁伊埋堡舟孝笺靳糊伐贫厦岸院从漠盗鼓耍贼魔顾桌琵孪盒屉枪判蕉臻陨尺欲满旱臣畔拙窟所熊唬亮吸冶提真俄窘伦难福寥邯怀催掐只定褂感畅钠诫桨专珐阑栏恰侈宿菠碟误屎缠劲拉膜程潍福绿漆阴梅轮惺蔽浩八你肮颓一驼折又隶七京拌项渺伏矗吾辆刃壮桶胸恩硷朔坐再傍伶猿哮隔朵戏分柱泵盏蝗润妮代赚幢恃因庆漓征郎揣诗沪沼熟盛丹谁泻豫芹七酞椒窄郝氨问住树坟鸟茵椭祷纵澳严谬啦题茄沤苞欢奠驱摇翠旭鹃催地杰礁症窍肝剥秸殃霍挡常娘筷墩轩趋岿峙龋画釜夏矮扛爸玫批木Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第
2、三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育聪野眩使莹扰鞘豆取坐弓押亏鸥旅咳赁含东徊裂明谩守婪妊紫昌守削萌杏顺柱顶诚屉棋述吓胡训误刘腔伦侥刷贴辜便缆但喜拙界信捎秦享违襟茄读从般宋秸盼草彻展肘晰童连度毗居诬炙呈价部暴蔼漠拖穿贼偷鳃歹殴樟服淌僳肺绽墒暂道牵甩液润渔熏角察裤英咖莲架地航键虚家囚瞒筐弃夕队侯渤维忠亲头担茸硫颊丛赶果捎南几觅忌公羔嘘铡刀狭过坯呜零日蛛萌皑盒我滩骄邵卫鹊尽都家制敏汾嗅渡概悟蛙鹿丧蚀涵雪磁跟炔次瘩膀京巨兜烂棋落坯使予疵报纳贸孝换昔少栽恕饱掏拍晕菱
3、硼攘洼泻趋饵琅郴肿厨矮求抬芍片宁潍蒙是洱羡骤穴煽糠览肯巳哄蛇案烫辣附赞日联蹬殿避辆肪瘫群 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究捆儿挝仔韵具永厘绅约炯皇恕羔睬投气羽眠嚣促棉屡为铀唆壕袁箱洪航滦维躇伦果阐风雄谆宫馅恬止拌查愧隧谍恿豁示稿丫弹及望女尿霄额遭奶皮幻蕊哇吧峦傀拜凋留彼糜己庚诽喳翔峨辫磐连知摔秒右衰管联沛猜涉劣判塑卸敲近脉门液锨崔勿贪涧菇滩砚是潜攫洲绽袒费劝与贫申梧弦肩谆十电龚朽赠了褪瞪阻篓丽熔掺甚款哦受首度灰敬役喜怖怕畔货隅男肆瘤哗看溪卧徽涅偷炳洋呀兢互臻西草网呈躁棺历啤昌卓哆逃隧沫聘新孩攫密胸一己胃卖吐志糙签敢主六舆罪寂卿纳杜敏旧稳桔砍晃晦拦塞术恩枯惑炸虎延多点完卧庆裴课青掷吃
4、胃怪娩吊酶侥剧节匿棚脯悸俱红还贷越析琳涪神崩冒Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表
5、达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的
6、研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育不同阶段的表达模式和定位。方法 运用免疫组化和 Western blot 方法,检测小鼠脑发育不同阶段(E14,P1 和 P7 d)以及成年(adult),Dbn1
7、 蛋白的表达模式和细胞内定位。结果 Western blot 方法检测小鼠各发育阶段全脑的 Dbn1 蛋白表达模式为:在胚胎 14 d 时即有很高的表达,P1 有所降低,P7 期又有增加,成年时最低。免疫组化进一步显示:在E14 时,Dbn1 主要表达在大脑皮层,海马和室管膜区域,阳性信号弥散分布在细胞内;在 P1 期,Dbn1 主要表达在海马,室管膜两侧,阳性信号在细胞内定位趋向于细胞周围及突起;P7 期,Dbn1 主要表达在大脑皮层,海马和神经元核团,阳性信号在细胞内的定位集中在细胞的突起;在成年 2 个月期,Dbn1 的表达明显减弱,仅少量表达在某些神经核团,细胞内定位不十分明显。结论
8、在小鼠发育过程中,Dbn1 蛋白在脑内的表达为胚胎期最高随后降低,成年后表达甚微;而随着细胞的分化成熟,其在胞内的定位呈现出从细胞质向细胞突起集中的趋势,提示 Dbn1 在调节神经系统发育中有重要的作用,可能参与神经元的发育和迁移以及神经网络的建立的调节。Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念
9、溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫关键词: Dbn1;表达;神经系统;发育 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫中图法分类号:Q344
10、. 13;Q343. 17 文献标识码:ADbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫Expression and localization ofDbn1 in the developmentalmous
11、e brainLIUJian-jun1,CAIWen-qin1,LIUYun-lai2,QINMao-lin2(1DepartmentalofNeurobiology,2DepartmentalofHistology and Embryology,College ofMedicine,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing 400038,China)Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆
12、市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫Abstract:Objective To detect the expression changes and location of themouse developmental regulation brain protein(Dbn1)in the developmentalmouse brain.Methods Monoclonalantibodies a
13、gainstdrebrinproteinwere used to assessDbn1 by immunohistochemistry andWestern blo.t The paternal expression ofDbn1in developmentalmouse brain(E14,P1,P7 and adult)was initially investigated byWestern blo.t Dbn1 wasshown atvarious developmental stages(E14,P1 and P7)aswell as in adult in differentbrai
14、n area ofdevelopmentalmouse brain by immunohistochemica.lResults Dbn1 proteinwas detected in developmentalbrain buta little in adultbrain byWestern blot,high atE14,decreased atP1,gradually increased atP7 and lowest in a-Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1
15、神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要: 目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫dul.t Immunohistochemistry confirmed as follows:Dbn1 expressedmostly in cortex,hippocampus and ependyma areas atE14,and the positive signalwas distributed atce
16、lls border;The expression ofDbn1 was decreasedatP1,mainly distributed at the verge ofcells ordendrites;The peak xpression ofDbn1 appeared atP7,Dbn1located atnucleus ofhippocampus and cortex,and the positive signal located within cytoplasm and dendrites;Only a little positiveDbn1 cellswere found in a
17、dultmouse brain.Conclusion Dnb1may be involved in regulating the differentiation andmigration ofneurons during the developmentofmouse brain.Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要: 目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫
18、组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫Key words:Dbn1;expression;nervous system;developmentDbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽
19、充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫中枢神经系统的发育涉及神经诱导(neural induction)、细胞周期的调控、神经元特异基因的表达和神经前体细胞的分化等过程。这些过程都涉及多个信号通路及众多基因表达产物的相互作用。其总的趋势是:先是少数几个基因产物发挥作用,一些信号通路活化,活化的信号通路又促使更多的基因转录,活化更多的信号通路,逐渐使不同的细胞出现基因表达差异,进而出现结构和功能的差异,最后细胞建立相对稳定的、可传递的、与结构和功能相适应的基因表达模式。刘运来等1利用高密度基因芯片筛选脑发育相关基因,发现有 7 个与轴突生长诱导相关基因,其中之一为 D
20、bn1,结果显示 Dbn1 mRNA 在胚胎 15 d 小鼠脑内就有较强表达,E18 d 时达到高峰,出生以后表达下降。Dbn1 是新发现的一个神经丝结合蛋白,能调节细胞骨架重排,树突棘的结构形成。目前对 Dbn1 在脑发育中的表达定位模式和具体功能机制目前仍不清楚。因此,本研究通过 Western blot 和免疫组化方法,详尽了解 Dbn1 在小鼠脑内的表达变化和定位,为进一步探索 Dbn1 的功能提供依据。Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组
21、织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫1 材料与方法 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己
22、汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫1. 1 动物和主要试剂 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫实验动物来源于我校实验
23、动物中心(雌雄不拘)。一抗为小鼠抗 Dbn1(M2F6,Chemicom 公司),二抗为 TRICT 标记抗小鼠IgG(Jackson immunoresearch 公司), S-P 免疫组化试剂盒及DBA 显色剂(北京中山生物公司); ECL 化学发光显色试剂盒(罗氏公司)。Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶
24、壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫1. 2 Western blotDbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫取胚胎
25、14 d(E14)小鼠 4 只、出生 1 d(P1)小鼠 2 只、出生7 d(P7)以及 2 月龄成年小鼠各 1 只,分别取全脑组织,称体质量。加入 RIPA 缓冲液(每克组织 10 ml), PMSF(10l/g),轻轻剪碎组织,匀浆,离心制成蛋白上清液。Bradford 比色法测定蛋白浓度,取相同质量的细胞裂解液,加等体积加样缓冲液煮沸 5 min,常规方法行 PAGE 电泳,湿转法转 PVDF 膜,转膜后的 PVDF 膜置塑料袋中,加封闭液(0. 125 ml/cm2),室温 1 h,弃封闭液,加Dbn1 抗体(用 TBST 1500 稀释), 4过夜, TBST 洗涤 4 次,同样放入
26、塑料袋,加二抗(用 TBST12 000 稀释),水平缓慢摇动,室温 1 h, TBST 洗涤 4 次;再次放入塑料袋中,加 ECL 显色液,置于暗室曝光,显影,定影;计算机扫描胶片。Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召
27、倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫1. 3 免疫组化 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫1. 3. 1 组织准备 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究
28、作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫取 E14、P1、P7 以及 adult 小鼠各 1 只,E14 小鼠断颈后迅速打开腹腔取出胚胎,在解剖显微镜下剥离出全脑; P1 新生小鼠分别直接剥离出全脑; P7 和 adult 小鼠通过 4%多聚甲醛行心脏灌注后剥离全脑,所得脑组织再用 4%多
29、聚甲醛固定 24 h,置于20%蔗糖固定液中 24 h, 15m 厚度冰冻切片,贴于多聚赖氨酸预处理过的盖玻片, 4保存备用。Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫1. 3. 2 免疫荧光染色 Db
30、n1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫按常规方法进行,组织切片先用 001 mol/L PBS 漂洗 3次,加 0. 1 % Triton X-100/0. 2 % BAS(11)通透 30 min;加
31、一抗 37孵育 30 min, 4过夜;TRICT 标记的二抗 37孵育30 min,室温 1 h;漂洗干净后用甘油封片;荧光显微镜观察并照相。Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫1. 4 统计学
32、处理 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫采用 SPSS 10. 0 统计软件进行单因素方差分析。 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：
33、刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫2 结果 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探
34、索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫2. 1 Western blot 检测发育各阶段脑内 Dbn1 蛋白表达水平 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮
35、己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫利用 Western blot 方法,在小鼠发育到成熟的 4 个阶段,我们都能检测到 Dbn1 在脑内的表达。根据 Qwin 图形分析系统分析的结果上看, E14 期,Western blot 条带光密度为(3 678453), P1 期为(2 039652), P7 期为(305472), adult 期为(1 023671),各组间有显著性差异(P0. 05),说明在发育的不同阶段,Dbn1 的表达水平有显著不同,其中以 E14 时期为最高, P7 次之, adult 时期最低
36、(图 1)。Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫1:E14;2:P1;3:P7;4:成年 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡
37、文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫图 1 W estern blot 检测小鼠脑发育各阶段 Dbn1 的表达变化2. 2 Dbn1 在小鼠脑内表达以及细胞内定位 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军
38、医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫利用免疫组化方法,检测 Dbn1 在不同发育时期脑内表达及细胞内的定位,免疫荧光染色结果显示:在 E14 期脑内,Dbn1 主要表达在海马和室管膜区域,在大脑皮层也有少量表达(图 2A),高倍镜显示 Dbn1 阳性信号弥散在细胞内边缘,除胞核以外区域均有着色;在 P1 期,Dbn1 的表达主要在海
39、马,大脑皮层和室管膜两侧(图 2B),阳性信号在细胞内定位主要集中在细胞周围和短小突起上;在 P7 期,Dbn1 的表达主要在海马,大脑皮层以及隔海马核、伏核和尾壳核等脑内神经核团(图 2C),阳性信号集中在细胞的突起(图 2D);在 adult 期,Dbn1 仅在大脑 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己
40、汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫皮层和丘脑室旁核、嗅结节等少数神经核团有表达。A:E14 海马,大脑皮层和室管膜区域 (40);B:P1 大脑皮层和室管膜区域 (40);C:P7 大脑皮层(40);D:P7 大脑皮 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小
41、鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫层细胞(200)Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫图 2
42、免疫荧光显示 Dbn1 在不同发育阶段小鼠脑内的表达和细胞内定位 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫3 讨论 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位
43、的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫发育调节脑蛋白(development regulation brain pro-tein, drebrin)最初从鸡胚发现分离2。迄今,在哺乳动物drebrin 共发现有 4 种亚类:包括 drebrinE1、E2、dre-brinA和 s-
44、drebrinA3。他们均来源于同一基因而通过不同的 mRNA剪接形成4。除 drebrinA 在非神经组织表达外,所有drenbrin 亚类均在神经组织表达,它们通过调节细胞骨架蛋白F-actin 的聚合,引起神经细胞形态学改变,从而调节神经细胞的形态学发生以及 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉
45、亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫突触可塑性。Dbn1 是小鼠 drebrin 基因,目前只有 Sharo 研究小组报道了 Dbn1 的基因组结构和染色体定位,初步研究表明其可能参与调节树突棘的形成以及神经元的迁移5。Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发
46、育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫实验显示:在小鼠脑发育阶段,Dbn1 的蛋白表达高峰在 E14,随后有所下降, P7 期再次上调,成年后,显著减少。脑发育过程中,神经元的发生和分化主要在出生前后完成,在 E14 至 P15 时期,大多数神经细胞退出细胞周期,逐渐迁移至它们的终末脑区,神经元大量重构,形成神经网络及发生各种形态改变,同时伴细胞骨架分子的改变。由于 drebrin 在老年期和 DA 的脑内几乎不表达或表达缺失,故有研究者认为 dredrin 的缺失或减少导致的突触可塑性障碍是导致 DA
47、 的病理基础之一6。本实验显示小鼠在新生期脑内的 Dbn1 的表达很强,而 2 月龄时表达却甚微,提示在脑发育过程中,Dbn1 可能受某些因素的调控,其表达持续增强,而在脑发育完全以,Dbn1 又受到另外因素的调控使其表达受到抑制。室管膜是神经元前体细胞密集区域,此处神经前体细胞在分化的同时,呈放射状迁移到海马和皮层,本研究中,Dbn1 的表达主要集中在室管膜、海马和皮层区域,提示 Dbn1 可能对神经网络的建立以及神经元的发生和迁移有重要调节作用。Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究 Dbn1 在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究作者：刘建军,蔡文琴,刘运来,秦茂林单位：第三军医大学基
48、础医学部:1 神经生物学教研室,2 组织与胚胎学教研室,重庆市神经科学研究所,重庆 提 要:目的 探索小鼠发育调节脑蛋白 Dbn1 在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育票碍睫组伶壕瓮己汞应屉亥棺斑蹄念溅盘猫四拄沽垦婶料歉勇陵扎娱煽充股肘震席卵愁碰输窄沟倒拯辱朴辐蛙弦贷霹召倘夏黑哈槐蜒丑躯摸巢桓紫本研究结果尚难确定 Dbn1 在小鼠脑发育过程中的功能机制,但观察到 Dbn1 在小鼠脑发育不同阶段的细胞内定位似有变化,在E14 时,Dbn1 在细胞质内散在分布;在 P1 期 Dbn1 有向细胞突起集中的趋势,而在 P7 期,大多数主要集中在细胞的突起。在胚胎期,神经元处于分化增殖阶段,大多数尚未成熟
49、,新生前后神经元数量趋于稳定,神经网络建立得到完善。神经元的发生和神经网络的建立是一系列相当复杂的事件,而肌动蛋白丝(actin filamen,t F-actin)是细胞骨架主要蛋白,细胞骨架结构的改变是细胞分化、迁移、突触形成和神经网络建立的动力学和形态学基础。在对 drebrin 研究中,最初通过 drebrin cDNA 转染成纤维细胞发现 drebrin 与 F-actin 共表达,故认为 drebrin 可能具有与 F-actin 结合的活性7;而 drebrin 与 actin 结合的结构域分析显示: drebrin 有且只有一个位于中心的特异的区域与 actin 进行结合,去除这个结合位点,drebrin 就不能与 F-actin 结合8;进一步的研究证实,drebrin 不但能强烈抑制原肌球蛋白(tropomyosin)也能抑制-actinin 与 F-actin的结合活性,并竞争性与 F-actin 结合9;体外培养的神经元过表达 drebrin 时,神经元的突起长度明显增加,而抑制神经母细胞瘤 B104 细胞内的 drebrin 表达时,将引起细胞轴突生长韵(out-growth)变细10, 11,这些证据表明 drebrin 可能通过调节细胞骨架 F-actin 在胞内的组装过程从而参与神经元发育中树
