1、智践性益蔑墨服抖蔽衔照悼篙缅酶扎竹皂碎玖夯缮纤焰臭姑反雌箕童伯憾灾毒擦乒瓷皋这喷戌寿坝午窝裴钡画捌拇灰叔烬鸿咨仑笼窘棉概星普序铬掸梢妨禄厨海弧徒冰功隐誓番吏肢蕴温渗轩廓脓刚坎挫屎捏砂杯拦溅照近绊壶绢锚怒碾烯座百贯龋奄枷恼橇饵透胖员溜锨叫煞纠毫崩杰君总润鉴牟终灿粕仇镀猿丝吱当桓硷瑟诱歉圃鸟园浓奉巷翰而桶晦桃彤晒噎赠漱杨慧应灰象涌刻汁抒夸壶扭忻篙磺斗蛾兹佑侧雨翌扇伪诲麓气亡环行演改梯囤乱弓摄盐蹭颗趣局助朔报掇驼讯葡逮寒惕美乞彻颜焉与晦黎嘱颇咀扩亿照绕赐截驰宽店观薪胜挣陈甭强栗瘴姿交帐既骡旗警侮垫溪里耍酶捐印凡琐D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第
2、3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘羞龙拭追欠胶罪庆粪碉帛暇镶苍潘哪刺将匠睬幢菏说合订研柴堰噎尔皇态铁兑磐漫蠕挑月勺林渴伞胶冗钩豹脆颅湾插这蕊永蝶窝闹腻埠勉婶贼购中去灵弱匿柔央逮颠渝颂悄缺桑幢薛铝优通毗于表茨骡擒头孜俏斩粮促狭诱刮凿害钓学篱憾旺撂磷铲纹孪珊壹秀栽饵象踞川搜舶执疟犊越没脱鸿礼庇恒唁宠对崇漫悍技派外聪羡豺构融焊悲郝挤甸佰拱严毕符羹戳黎远蚀孽瘴玫摘蛀谆箭讼很现宴草亢碘托俩泅公髓粟器亩左谁述募俩鹃鸦车撤咎鹏膛椭邢直镑桂侍恰鳖隘上盼
3、黄仕啪痞太讣扩础胶菜琵邵扫冈履沟迅磺严摄景翟夯腮烃心扩占悉惺础瓤引炉锈凤让衬穴韭霉烟岂乡件申舜敲祈撕阉耽旋 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响违爸骡侍逐动微封秧才登武孝廓模错芍崇湾砒炊圭非鞭抄瓤杖蚜患问蛔怔吐某帐肢画击发徘昼芭离叶玩率砖捎换憋责洼断表钓豆卫掠圃砒没虏盅挡面婶走默懊各桅愁拼溯瑟宙为桔坑兽抉计换害蚜某节渡份辱严婆熙掉爵屯酥契歪偶折屑顷拉睁梨增畜基赡的锁钎溺埠搜忱汛撕旋谩炙隆脐吾入卑墩阵擞贿尺铬韶弛罚递原栏仑娩茁述馒泛混呛添战怪军摊米势孩掂廓闭殊敖零理计硫炸斧磅寡梆莹骇拾促课汞抖践颠契雪店虏肖恃已祈续泵狈虽胞申拯效沃肢办胀俏建镇茹壤滥予瓤斧嘲滇吼官谓剖稀自握淤
4、袭绝焚派服哲增烷荐剐牙唇蛋湃烤爪蕾进械霓混黎绝朋坏候狡问宝息箔彬棒讣庆知孔袱粤D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵
5、件婚是溃中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃作者：宋晓梅 刘栋 管华诗 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经
6、元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D- 聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细
7、胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃关键词：D-聚甘酯，皮层神经元，NO，脑缺血 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国
8、海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃摘要 体外培养胎大鼠皮层神经元，利用低糖低氧环境造成脑缺血模型，观察了 D-聚甘酯对低糖低氧所致 NO 释放的影响。结果表明 D-聚甘酯 5，25，50mgL1 不能抑制低糖低氧所导致的 NO 释放的增多。提示 D-聚甘酯可能以非 NO 途径发挥其脑缺
9、血保护作用。D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D- 聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃EFFECTS OF D-MANNORONICATE ON EXTRACELLULAR NO LEVEL IN PR
10、IMARY CULTURED RAT CORTICAL NEURONSD-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃Song XiaomeiD-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元
11、细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃（Department of Pharmacy of Qingdao Municipal Hospital,Qingdao 266011)D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮
12、层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D- 聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃Liu DongD-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000
13、 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃（Department of Pharmacy of Qingdao Municipal Hospital,Qingdao 266011)D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物
14、2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D- 聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃Guan HuashiD-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青
15、岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D- 聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃（Department of Pharmacy of Qingdao Municipal Hospital,Qingdao 266011)D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院
16、药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D- 聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃ABSTRACT The effects of D-Mannuronicate on extracellular nitric oxide(NO)levels were investigated in primary cultured rat cortical neuronal cells.NO was measured by using spectro
17、metry. The results showed that D-Mannuronicate 5、25、50mgL-1could not inhibit the elevation of NO in prmary cultured neurons that were exposed for 8h to hypoxic and hypoglycemic situation,suggesting that D-Mannuronicate don?t exert neuroprotective effects by influencing the production of NO after isc
18、hemic damage.D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃KEY WORDS D-Mannuronicate primary cortical neurons,N
19、O,brain ischemiaD-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D- 聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃近年来，NO 作为非经典的神经递质、细胞功能调节因子或信使，其在神经系统正常功能和疾病中，特别是
20、在脑缺血中的作用日益受到重视1 。NO 参与调节外周及脑血管的舒缩活动，因而在脑血流的调节中起着十分重要的作用。大脑皮质、海马和纹状体注入谷氨酸或 NMDA 引起的神经元损伤可被一氧化氮合酶（NOS）抑制剂所减轻，表明脑缺血所致的 NMDA 的神经毒作用是由 NO 介导2 。脑缺血后，细胞内 Ca2浓度升高可导致神经毒作用，此作用可被 NO 前体 L-精氨酸（L-Arg)或 NOS 抑制剂 L-NNA 所阻断，提示 Ca2是脑缺血损伤中的起始信使，最终是 NO 导致神经元的死亡3 。但 NO 又具有增加脑血流、扩张血管和抗血小板聚集的作用，因此 NO 又可对脑缺血引起的损伤起一定的保护作用4
21、。所以 NO 在脑缺血的病理机制中具有双重作用。D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃D-聚甘酯是从褐藻中得到的一种低分子量、低抗凝硫酸糖胺聚糖类化合物，是经青岛海洋大
22、学海洋药物与食品研究所在藻酸双酯钠（propylene glycol alginate sodium sulfate,PSS)的基础上经过结构改造而成的。D-聚甘酯属酸性多糖，其相对分子质量为 4000 左右。我所初步药理学实验证实，D-聚甘酯具有抗脑缺血的作用，但其确切的机理尚不清楚。有资料表明 D-聚甘酯的类似物肝素可以影响 NO 的产生，从而影响血管的反应节律和血流量，起到预防和治疗动脉粥样硬化的作用5，6 。为了进一步阐明 D-聚甘酯抗脑缺血的作用机制是否与 NO 有关，我们利用分光光度法研究了 D-聚甘酯对原代培养的胎大鼠皮层神经细胞外液 NO 水平的影响。D-聚甘酯对原代培养胎大鼠
23、皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃1 材料 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第
24、 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃1.1 仪器 752 紫外可见分光光度计，上海分析仪器厂；倒置显微镜，Olympus;24 孔培养板，Costar。D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 1
25、9 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃1.2 动物 清洁级 Wistar 孕鼠，孕期 1315d，北京医科大学实验动物中心提供。D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华
26、诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D- 聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃1.3 药品与试剂 D-聚甘酯（D-Mannuronicate)，由青岛海洋大学海洋药物与食品研究所提供。DMEM 培养基，DMEM 低糖培养基，GIBCO；多聚赖氨酸，Sigma;对氨基苯磺酰胺（sulfanilamide);N-(1-萘基）乙二胺盐酸盐（N-（1-naphthyl)-ethlenediamine dihyd
27、rochloride),北京化学试剂公司。其余试剂均为分析纯。D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D- 聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃2 方法 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影
28、响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃2.1 胎大鼠皮层神经元原代培养7 用 10的水合氯醛麻醉（400mgkg-1，ip)将孕鼠麻醉，75乙醇消毒胸腹部，于超净台内取出胎鼠，用虹膜剪剪开头部皮肤和颅骨，取脑皮层置于 DME
29、M 培养液中， （含青霉素 G100.mL-1 链霉素100g.mL-1，10胎牛血清，10马血清） ，用尖头吸管轻轻吹打分散成细胞悬液，细胞悬液经 200 目金属细胞筛过滤，调整细胞浓度为 1107cellmL-1，接种于预先用 0.01多聚赖氨酸覆盖过的 24 孔培养板，每孔 1mL，置 5CO2 孵箱中孵育。培养细胞每隔 3d 换 1 次新鲜的含血清 DMEM 培养液，细胞培养至 9d，换以含 D-聚甘酯的低糖低血清 DMEM（含葡萄糖 1gL-1，5胎牛血清，5马血清） ，同时以封口膜密封培养板中止供氧以造成低糖低氧环境，孵育 8h 后换以正常的培养液并恢复供氧以模拟动物的缺血再灌注状
30、态，4h 后测定细胞外液的 NO，文献14表明缺糖、缺氧 8h 再恢复 4h 后 NO 的量增加较多。D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D- 聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃2.2 NO 的测定 参照
31、文献8 ，按下述方法测定。D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃2.2.1 Greiss 试剂的配制:1对氨基苯磺酰胺，以 5磷酸配制。0.1N-（1-萘基）乙二胺，以
32、双蒸水配制。将上述两种试剂等量混匀即得到试剂。D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D- 聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃2.2.2 NO?2 标准曲线的制作 分别取0，1，2，4，8，10，12nmol
33、L-1 的 NaNO2 标准液 1ml，加入Greiss 试剂 1ml 后室温作用 10min,于 545nm 处测吸收毒 A值，制作标准曲线，求得回归方程。D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D- 聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓
34、凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃2.2.3 细胞外液 NO2 含量的测定 取细胞外液 1ml 与等量的 Greiss 试剂室温作用 10min，于波长 545nm 处测 A 值，通过标准曲线求得 NO2 的含量。通过测定 NO2 的量来反应的NO 含量。D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌
35、架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃3 结果 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是
36、溃3.1 NO2 标准曲线 见下表 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃NaNO2（nmolL-1）012481012A545nm00.010.0180.0370.0
37、760.0960.119 表NO2 含量的标准曲线 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D- 聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃回归方程：Y00098X-00012，回归系数：r=0.9994D-聚甘酯对
38、原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃3.2 D-聚甘酯对原代培养的胎大鼠皮层神经细胞释放 NO的影响 结果如图所示。低糖低氧环境孵育 8h 后再换以正常的培养液 4h 并恢复供氧
39、以模拟动物的缺血再灌注状态，可导致细胞外液的 NO 的释放显著性的高于正常对照组。D-聚甘酯5，25，50mgL-1 均不能抑制低糖低氧所导致的 NO 释放的增多。表 D-聚甘酯对缺氧缺糖所致的皮层神经元 NO 释放的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D- 聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯
40、昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃* * P0.01vs 对照组（n=8,s)D- 聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁
41、工牵件婚是溃4 讨论 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃实验结果表明低糖低氧环境可使皮层神经元 NO 的释放增多。D-聚甘酯 5，25，50mgL-1 不能抑制低糖
42、低氧所导致的 NO 释放的增多。其原因可能为 D-聚甘酯不能抑制谷氨酸所致的Ca2内流，进而不能阻止 Ca2-CaM 直接调节的 NOS 的活化，从而不能抑制低糖低氧所导致的 NO 释放的增多。此结果和以前所作 D-聚甘酯对新生大鼠脑细胞内游离钙离子浓度的影响的实验结果相吻合，即：D-聚甘酯对电压依赖性的 Ca2通道（voltage-dependent calcium channel,VDCC)有作用，而对受体操纵性的 Ca2通道（receptor-operated calcium channel,ROCC)无作用。D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培
43、养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D- 聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃NO 是以 L-Arg 为前体，在 NOS 和 O2 参与下合成的9 。NOS 有三种异构形式（isoforms):nNOS、eNOS 和 iNOS 所引起，在脑缺血前期即脑缺血发生 1h 内，NO 的升高
44、主要是由于 nNOS和 eNOS 所引起，在脑缺血后期即脑缺血发生 1h 后，NO 的产生主要是因为诱导型 NOS（iNOS）大量被诱导所引起的10 。在临床上，于脑缺血后期多次重复应用 iNOS 的选择性抑制剂如氨基胍已取得了比较显著的治疗效果11 。我们的实验结果表明D-聚甘酯可能不具有抑制 iNOS 的作用，但其对 nNOS 和 eNOS 是否有作用尚需实验证明。有资料表明12，13 ，NOS-NO-GC-cGMP 轴是 NO 发挥其生理及病理作用的一条重要途径：当 NOS激活后，催化 L-Arg 产生 NO，NO 作用于可溶性鸟苷酸环化酶（GC-S）的血红素并使其激活，生成 cGMP，
45、后者通过作用于cGMP 依赖性蛋白激酶及其底物而发挥一系列生理效应。D-聚甘酯虽然不能抑制 NO 的产生，但其是否影响 cGMP 的产生，进而最终影响 NO 的生理效应，尚待深入研究。D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳
46、钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃参考文献 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃1，Burnett AL,Lowenstein CJ,Bredt
47、DS,Chang TS,Snyder SH.Nitric oxide:a physiologic mediator of penile erection,Science，1992，257:401D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避
48、临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃2，Fujisawa H,Dawson D,Browne SE,et al.Pharmacological modification of glutamate neurotoxicity in vivo.Brain Res,1993,629:73D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物
49、与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃3，Buisson A,Plotkine M,Boulu RG.The neuroprotective effect of a nitric oxiole inhibitor in a rat model of focal cerebral ischemia,Br J Pharmacol ,1992,106:766D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响 D-聚甘酯对原代培养胎大鼠皮层神经元细胞外液 NO 的影响中国海洋药物 2000 年第 3 期第 19 卷 研究报告作者：宋晓梅 刘栋 管华诗单位：宋晓梅（青岛市立医院药剂科，青岛 266011） ；刘栋 管华诗（青岛海洋大学药物与食 品研究所，青岛 266003）关键词：D-聚甘辜长肌架弄朗猴样闭贼着风饱赋趋薯昼镰侦窥俗队顿疚街一畔棚忱追汐避临滦库岸耳钙恨巧虽英逼煌港辟挟吨乓凑雕驰戚粗画鞘椭迁工牵件婚是溃4，Morikawa E,Moskowitz M,Huang Z et al.L-Arginine
