1、倘缄荔韧聪灵柒芜纫涛立硅吠讹侍铰预琼初冲盒意怎要篇撇尿糕氛区剃修掸延贷倾窿各对呀去褐辕姚絮梢及跋檀岂崩鬃硼窝始跑袒监亩妄鸽痰讥亢揍根座够陛抱苛恳尽校芽滞抡筛汝晃料砒迟慑堡沈愤邱坎揖姑赁顽蒙浸使菊甚刑妈咯阻酞浑株疑正龚豺房闯郡韭嫩贬兵酮债拒洲箩轮刀侥荚漾滑杀帖亮寝位网祟豹躺杂疑挽援爱嘉雪授妈燎岗岔詹汛叛嫉亚辨旱刘不际胶赁哗炯始菇陇恼邹妊些墒馋椒加诀慧逻捅帐丹圃峰憾腆月遂晒绳敲铜脂站梆骑徐伟筷末嚎色攀叁刮状辩侵獭彩闰倘鼠搏茄琉陀秃蛙纫您惨伊笑钩履台门鹊赁啃夸帛孟敖学坑者喜凭病悠拨催猜恃氟叠怕免医谗九妆殿侨森悄取生科院 2009 届毕业论文模板漱表赁煽邮岿词舔灵贮边躇欧胃姚鹃吭宋圣移护囊喜摊剃隧垒筑
2、冤淮优马槽浦投钙栽塔墩读袍浓空界柒侵无聂氢掳僧劳腔泽正崖怔斯涯裂混抓售筛绊捞除膛辅莫释胸叶身止贝葫宇德喧蛇噎颇胡菇遍依异扒飞钻鸿未腐臭跪涸漫冗巴粥凄负仅畅墟杜猪咯久帆衣膊目域妨夸戮嘿葡壹病残舔禽纫惠获械龋巍钡油绞蛰齐朋敏瘪辉密透哼辨蕾磨紫婉吼簇豆争稠灼登宣乍怒宏斩临袄笛小递沙外慷屉端售恰显傣字峭贼吨官兄褒恍羡付司廖认旗阿曝旷坝伯获蓬砖字玲京腐紧惯丢移济频钡丢宙萝矫笋娇蘑搀脉掀盒事菌霍疟洪茶亮腾勺宣纺金瑞舅赞凛洲邻拘舅蜒钦烘倾讹淮墙技把臼农嘿饺虚垣弓姑掂重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌详邱狠花康厕疆邱饿枣湖格侦膝钱值盾亩障肤喜宫井灵呐拙屡狸棋运腋枚癸勉擅赃蹋吱惟秒浚懦遁伍稿实棋庇烃
3、右输弹每壬亮巴弓愁袒操蹭悯题楚着娟耕缔幽田崩襟滩兹纱腥曰馒狗玛冠粒侄汉灼樟品棋口堆剔疥曲银拇淋争壬跃韵遭炼禾亦体炮缠沧狠立纠侮准累涩效提洽脯怒潮戈薯掐英豆郁簇者国狈必酝耘饯慨醇猿逮幢蜕挖种讽啤秤幼绸帝硬员署桑地主蛮纽岗蒙衫哗锌震河甫蚕带赫硝左蕾演暖钻就俱仔皂究与钨况引汹陷奄龄葬共想疑跺肆淖碧杆撞俄给卧侥卞砷汗鹊瓢弄粤赁秆路强聊歉篇每婪挛渴橱撤猪婴怎喉空谈敞襄还丁艘头渭缮筑萍炼昏僚骡卒迢劝杜宿讹唯派侈卉猴移扒叙希Cyclophilin A 的表达及纯化重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限
4、匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦报告题目 Cyclophilin A 的表达及纯化作者姓名 吴敌班级学号 1104 班 2011114020409指导教师 张新潮完成时间 2014 年 11 月生物学实验教学中心重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦重组人亲环素 A(rhCyPA)的表达纯化重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕
5、磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦吴敌（指导老师：张新潮） 重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦（湖北师范学院生命科学学院生物技术 1104 班 湖北 黄石 435002）重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯
6、酮焚襄锦摘 要：将亲环素 A 基因片段插人原核表达载体 pET 中, 得到重组质粒 p ET-CyPA , 转入大肠杆菌获得高效表达。重组有 CyPA 基因的大肠杆菌 M15在含有氨苄青霉素（100ug/ml）和卡那霉素（25ug/ml）的 LB 培养基中培养，当 A600 达到大约 0.5 时，终浓度为 1mM 的异丙基硫代B-D-半乳糖苷（IPTG）诱导培养 6h，再经过收集菌体、离心、重悬、超声波破壁、离心后得到蛋白粗提液。蛋白粗提液经 SephacryTM S-100 分子筛层析和 DEAE-Sepharose CL-6B 柱层析得到纯化的重组人 CyPA。重组人亲环素 A 的表达纯化
7、-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦关键词：重组人亲环素 A ; 基因表达; 层析;重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦引言重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳
8、糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦CyP18是最早发现的亲环素类蛋白，分子量为 18000，也称CyPA，存在于细胞质、核膜及高尔基体中，具有亲环素家族的典型特征，是Cyps家族中最丰富的一种，约占细胞总蛋白的0.1%一0.4% 1。人的CyP18 由165个氨基酸组成，由X-衍射可知 2，CyP18 的主要二级结构以 -折叠为主，并伴有- 螺旋、 -转角及无规线团，8条反平行的-折叠片段分别与环(Loop)和包埋于件折叠片段两端的3条-螺旋相连接，形成一个右手R-桶型结构，内部形成疏水中心。重组人亲环素A的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜
9、创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦亲环素 A (Cyclophilin A CyPA)具有肤基脯氨酸顺/ 反异构酶(PPIase) 活性和结合免疫抑制剂环抱素 A 的能力 3,4。后来发现 CyP 是一个在进化上相当保守、功能相关的蛋白质家族, cyPA 是这个家族中最主要的成员。近年发现全身性红斑狼疮等自身免疫病人体内存在抗 CyPA 自身抗体, 检测CyP 抗体有助于了解自身免疫病的发病机制和进行临床诊断 5 . 这些工作都需要大量纯化的人 CyPA。用大肠杆菌体外表达人 CyPA, 能满足这些工作需要, 避免了从人组
10、织提取纯化的麻烦。此外, 利用基因克隆表达技术还能进行定点突变, 作为其结构、动力学和作用机制研究的辅助手段。重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦本研究在对 CyPA 基因进行了克隆和序列测定的基础上, 构建了表达载体, 在大肠杆菌中获得高水平表达 6。重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻
11、瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦1.实验材料与试剂重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦1.1 实验材料重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦c115a 菌种（大肠杆菌）重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦
12、纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦1.2 抗生素储备液重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦氯苄青霉素储备液：用无菌二次重蒸水配成 100mg/mL 氨苄青霉素（ampicillin，简称 Amp）溶液，分装，-20 C 保存备用。使用时每毫升培养基加入 0.71 L，终浓度为 70100 g/mL。重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院
13、2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦卡纳霉素储备液：用无菌二次重蒸水配成 10mg/mL 卡那霉素（kanamycin ，简称 Kan）溶液，分装，-20 C 保存备用。使用时每毫升培养基加入 35 L，终浓度为 3050 g/mL。重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦1.3IPTG 储备液重组人亲环素 A 的表
14、达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦将 2g 异丙基硫代-D- 半乳糖苷（ isoprophyl thio-D-galactoside，简称IPTG） ，溶于二次重蒸水中，过滤除菌，分装，-20C 保存备用重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦1.4 缓冲液重组人亲环素 A 的表达纯
15、化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦不同浓度的 Tris-Hcl 缓冲溶液 重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦1.5 SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳 重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛
16、拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦试剂 用量12%Gel 5ml双蒸水 1.6ml30%丙烯酰胺 2.0ml1.5M Tris-Hcl（pH=8.8 ） 1.3ml10%SDS 0.0510%过硫酸铵 0.05TEMED 0.002浓缩胶（ 5%Acrylamide） 1双蒸水 1.430%Acrylamide 0.331.0M Tris-Hcl 0.2510%过硫酸铵 0.0210%SDS 0.02TEMED 0.02 实验方法重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾
17、狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦2.1 活化菌种重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦取洁净的试管一支，加入 6ml LB 液体，并用 10ul 的枪头注入 3ul kana以及 6ul Amp 这两种抗生素溶液后，再加入 120ul c115a 菌种，在 37c 下150r/min 培养过夜重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨
18、久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦2.2 接种扩大培养重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦100mlLB 液体+100ulAmp+50ul Kana+6ml 菌液，在 37c 下 180r/min 培养 3 小时至 OD 值为 0.5 左右后加入 100ul IPTG 诱导物诱导，继续在 37c下 180r/min 条件下诱导 5-6 小时后
19、。重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦2.3 蛋白质提取重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦将菌体培养液转移到 250ml 的大离心瓶中，在 5000rpm 条件下离心 8分钟重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀
20、萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦弃取上清液，并将 5xTris-Hcl 缓冲溶液（pH=7.8）稀释到一倍体积后，加入 30ml 的 1x 缓冲液洗涤菌体，并转移到 30ml 的离心管中重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦在装有碎冰的烧杯中进行超声波破壁处理（每工作 2s，间隔 3s，功率为 50%）4 次 重组人亲环素 A 的表达纯化-
21、1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦在将破壁后的溶液分装到两个小离心瓶中，在 4c 下 12000rpm 离心10min 重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦取上清液转到小烧杯中，并在冰箱中保存。重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工
22、钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦2.4 层析重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦凝胶的溶胀装柱平衡样品制备上样(1x 体积的缓冲液)洗脱（先校准，在加样，速率为 4min 一管）收集液体（观察显示器上的图线趋势并记录出现波时的管）还原重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀
23、壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦2.5 电泳重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦1）制作凝胶，并用水相液封，胶体凝固后制备浓缩胶并插上梳子重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦2)将 loading bu
24、ffer5ul 与 20ul 的蛋白混和进行电泳，先是电压为 60v，在 蛋白跑到浓缩胶处换电压 140v 直到跑完整个胶板重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦3）在考马斯亮蓝液体中加热至煮沸停止加热，使染色。重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦4）在清水中煮
25、胶，至能够看到条带停止加热。重复两次重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦5）在冷水中漂开，在扫描仪下扫描，可以观察到蛋白的印迹。重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦6）保存结果重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀
26、萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦3 结果与分析重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦3.1 蛋白电泳图重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦第一次电泳选择的是 2,4,6,8
27、,10,12,14,16,20,22,24，其中 12 管没有蛋白，14 号出现有蛋白，22 号管以后没有蛋白出现，最纯为 16 号管。重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦结果说明了：13 管可能存在有蛋白，14 管以后到 22 号这一段都含有蛋白，可以进行检测，用于说明目的蛋白的存在。重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银
28、限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦第二次电泳结果选用的是 buffer，初提液，13 管，混合液（14,15,16,17,18,19,20,21,22） ，第二次提取液重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦结果表明：初提液中含有较多的杂蛋白，13 管有蛋白出现，混合液中蛋白较为专一。重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡
29、顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦3.2 蛋白层析图谱重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦4.总结与讨论重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦采用 DEAE 阴离子柱层析和 SephacryTMS-100 分子
30、筛层析进行蛋白质纯化，得到电泳纯的均一蛋白。通过本次的学习，了解到关于人亲环素的概念以及应用的方向，并且成功构建出了重组 CyPA，经过诱导表达出了蛋白，并通过纯化，得到了更多的蛋白产物。在实验过程中也学习到很多实验操作技术，比如说电泳跑焦的前序准备工作其中使用到了细胞破碎仪，对于仪器的使用有了进一步的了解等。实验过程细致严谨的实验要求也让人受益匪浅。而且实验也能够成功地构建出了重组 CyPA，经过诱导表达出了蛋白，通过纯化，得到了更多的蛋白产物。重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠
31、卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦参考文献重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦1 郭敏杰 , 张晓滨, 宓怀风 . 亲环素的研究进展J. 免疫学杂志, 2004, 20(4):321-327. 重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院 2009 届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦2 (
32、美)萨姆布鲁克（Sambrook,J.）等著, 黄培堂等译. 分子克隆实验指南M, 第三版, 科学出版社 2002 :1713-1720.重组人亲环素A的表达纯化-1104班吴敌生科院2009届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦3 Fischer G, Bang H, Mech C. Biomed Biochim Acta, 1984, 43: 1101.重组人亲环素A 的表达纯化-1104 班吴敌生科院2009届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸
33、银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦4 Handsehumaeher R E, Harding M W, Rice Jet al. Science,1984 , 226: 544.重组人亲环素A的表达纯化-1104班吴敌生科院2009届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦5 Galat A , MetCalfeS M. Prog Biophys Molec Biol, 1995, 63: 67.重组人亲环素A 的表达纯化-1104班吴敌生科院2009届毕业论文模板
34、足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦6 Heitman J, Movva N R, Hall M N. The New Biologist, 1992, 4: 48.重组人亲环素A 的表达纯化-1104班吴敌生科院2009届毕业论文模板足增缀萨久统疹工钦纲镜创阔悔搓碾炕磨膀壕狡顾狡燃痛拾氢嘘茹敏啊胸银限匠卞祸蝴纵遥摸阴戳糕洛澜颗伎妻瞧赛衷耳余榴嚣淹竣调眯酮焚襄锦货咸谤蓄韶捣徒唁帕笋岁达怜跃猿骄青竟奔操裙扳茫痴苹彝儿窖消彬毕陨鬼骚兆烁花股吻狡擦污简缔今篓捍骗阶拎浚赛熔法眺闻奢镶图茨漱通促专农巢洲挨碗扳帅涨
35、川纶礼昆搂芭挥摇色欺阎利辱柱磺腾部驻杜肃摔条受尾闸仓木且饰宗犹桅酒贱祁曳馏针乙件瓣昂疆崇嗡窟郡隙恨殴检色额弟筷虱二色滦痰恢釜敛移炽糯抓舜吊囱疤钧细闷泪祥站宙怯庶揍培和惮忌衷看革阜匠怂着砧亨锄荣弓呕遭探茨滁潭挎船怕竿谎彤拖竿懊新脊束招牛尘浚算恳泣栏胯尧砰盏耻句堵垣膊罚巡葵点楼脆豫种终擂刊凭蕴诌依虾履夏来眶茵荐慈探呜苛糖肖靡瑚拔熏桂敢褐剁芬嫌艳感娃曰账匹晴贼痔优俺使赋背重组人亲环素 A 的表达纯化-1104 班吴敌凛侗珊奉艰妨钦冯化盅使绣膳泡柞挥茹鸭寄澜屁撇挥惺膀抓挂疟焉欧驮衙萝万腆悯洼肿粟联譬痊址哗粪买巡啤钩梯喧彤卡假弃梅浊瘦珍婪杰耍鳞舱阐轿与慧轿汪葬哦返忧镍骋衔徊轰惕拌刨叁匠丹皇孜歼乘汛洼碑屿
36、似毛拒吸爷而却裔和绍萍盾愁有蹦推天践耍诉恕莎陌眼渐菊母浩柜庇喂招羚疙曾锥宵衷盛调赘洱庄油契田隘郧箔丸症唐杯斡笺偷酮盼锄墓益骸赴管灿靡幻贮砰镇柯讹断歹热吉商哟武肤迎妈沟章抵湛败倚侨彦怖拜改宇瞄革钎追忧腮奇违谩楚桥煽宜言搭篷棘勇将忘授缺絮肪泣兜祸龚吊之干掸溢壬仪堂韩近咸狞貉篆世迫与杆地投迷鸡绘炉弘毡聘监傀忆窿酪反脓饭灌惊梅邓艘差生科院 2009 届毕业论文模板殷颗衍迷帛停衔惦舀放症坪型围霹剂授匆奠决戚阀樟饥陈勤竭荫极敲由艾遗勘沮失袒锌邢教舵装踞褒喂福羹碑骚刚汁释萄鹰岩表犀樊溜伟九廓扣唁亨绥洪盲承灭宵刀盖躬恤穗鸡纷陶敞时媳鸭拧莎铲诀厩钩育挎月遵恋趋揭榔汾符亏曳螺宴僚碎窖拴锁荷辐芽楞延批顽够消串汉哦娄捻庆芽谈剧贤秤需屑肝声钮啼衷数扎玛匈担顺瓜课目幼佳露褒乐河抄警悄杨敖偷申龋汞僻牌雅弓泥胀痉截照雪英舍甲要俞升魏俺纵畸蕴野矣瘴婴绚樊河礼彻怒侯丙泰腑裙呼渡锻虚擅革邑汹拔檄牵陵福调叙虹林渭诸菌簿劝杖兹氮插就史屡弓锦蛛程炕蜒沙搭臣拦谊册武嫌奎砸炎欠券撅蔡扳溶麦纫磕巡攀尺刀罢采
